Емельян Пугачёв — предводитель народного восстания 1773—1775 годов

Донский казак Емельян Иванович Пугачёв, вошедший в историю как предводитель одного из крупнейших крестьянских восстаний, появился на свет примерно в 1740 году в станице Зимовейская. Принимал участие в Русско-Турецкой и Семилетней войнах.

После того, как в 1770 году его произвели в хорунжие, самовольно покинул службу и вступил в ряды Терского войска. Позже был неоднократно задержан, но успешно скрывался, скитаясь по стране и выдавая себя за обычного купца. По сообщению официальной биографии, осев в Яицком городке, назвал себя Петром Третьим, и начал подстрекать казаков идти на Закубанье. После взятия Чернореченской крепости, сторонниками Пугачёва стали башкиры, калмыки и татары.

Восстание Пугачёва в Оренбурге продолжалось в 1773-1774 годах, с октября по март. Несмотря на некоторые успехи на Урале и вход в Казань, повстанцы были разбиты не дремавшими регулярными частями русской армии, освободившимися по окончании Русско-Турецкой войны.

Не спасло повстанцев ни пополнение крепостными на Волге, ни взятие череды городов, таких как Алтырь, Курмыш, Саранск. После ряда поражений и разбитой в городе Царицын армии, Емельян Пугачёв был выдан царским властям его братьями по оружию и приговорен Сенатом к смерти. Казнь бунтаря состоялась 10 января 1775 года.

Восстание: основные цели и причины, ключевые события и результаты

Говоря о восстании и роли в нем самого Пугачева, нужно понимать предпосылки подобных явлений в истории. Они происходят тогда, когда власть пассивно относится к непростому положению своего народа. В данном случае народное движение превратилось в крестьянскую войну, потому что восставшие действовали на огромной территории, жестко и в течение продолжительного промежутка времени, при этом основными чертами была многочисленность и организованность крестьянских войск. Они добивались, в первую очередь:

• смены крепостного права и отмены рекрутского набора;
• минимизации налогообложения;
• ликвидации чиновничества и дворянства, которые считались разорителями крестьян;
• установления казачьего самоуправления по всей российской территории.

Восстание распространилось на огромную площадь — от Оренбургского края до Среднего Поволжья. Стартовало все у реки Яик 17 сентября с выступления маленького казачьего отряда, которое впоследствии превратилось в мощное воинственное соединение, продвигающееся к району гор Урала.

С августа 1773 по март 1774 года проводилась осада Оренбурга, пугачёвцы потерпели поражение. С апреля по июль — взятие Казани. 31 июля Пугачёв отменяет крепостное право, однако его армию окончательно разбивает А. Суворов. Причинами поражения стало множество факторов: отсутствие военного опыта, плохое вооружение, непонимание чётких целей и недоработка конструктивной программы восстания.

Пугачёв как личность: роль в восстании, человеческие качества

Роль предводителя восстания трудно преувеличить — сама жизнь так называемого «самозванца» с трагической судьбой показала, что в нём присутствовала особая внутренняя сила, раз уж за ним пошла вся многочисленная «чернь»: начиная от местных казаков и заканчивая работными людьми.

Он часто говорил о своей ненависти к угнетателям, о том, что каждый имеет право на свободу. Несмотря на множество недоработок, этому человеку удалось захватить много населенных пунктов, мелких и крупных, создать собственное правительство и военную коллегию, издавать царские указы и манифесты и щедро жаловать соратников, что характеризует его как отважного и умелого лидера.

Как бы то ни было, произошедшие события привели к улучшению положения рабочего класса, казачества и крестьянства, ослаблению помещичьего гнета, а также ликвидации самоуправления и централизации власти.

Образ бунтаря в известном пушкинском романе

Что заставило Пушкина обратиться к этой теме?

Ещё с 20-х годов великий русский писатель и поэт проявлял неподдельный интерес к историческому прошлому своей Родины. Об этом прямо свидетельствуют изданная им литература: драма «Борис Годунов», поэма «Полтава», а также непосредственно «История Пугачёвского бунта», при подготовке которой автор посетил места, непосредственно связанные с восстанием, говорил со старожилами, прямо или косвенно знавшими популярного бунтаря, систематизировал и обобщил материалы, собрал народное творчество на эту тему. Весь уникальный и сугубо подлинный материал Пушкин использовал и в своих художественных произведениях, в частности, «Капитанской дочке», в которой удачно объединил талант историка и поэта.

Какой он, пушкинский Пугачёв?

В историческом труде Пушкин рисует судьбу «страшного бунтовщика», злодея, способного на низость и подлость, предательство. В повести же — это

яркая и цельная фигура с внутренним стержнем, похожая на героев народных песен и былин, которая соединяет в себе лучшие черты русского человека. Этой личности присуща щедрость, широта души, сила и удаль, а также высокие нравственные принципы. Образ Пугачёва здесь становится ключевым. Герой появляется при достаточно романтичных обстоятельствах, и проявляется в первую очередь как талантливый человек с живым и острым умом, вызывающий уважение, а не осуждение из-за кровопролития.

У Пушкина он истинный народный вождь, хитрый и умный, которого уважают и любят массы, которому не чуждо великодушие, чувство справедливости. При этом автор не идеализирует бунтовщика, рисуя картины откровенных протестов, основанных на жестоких расправах, насилии и чужих жизнях, поставленных на кон высокой идеологии. Но, невзирая на это, в произведении он не может причинить зло людям, от которых видел только добро.

Каким бы ни был в реальности этот человек, он уже вошёл в историю не только как кровожадный изверг, но и как надежда и сосредоточение высоких мечтаний русских людей о воле.

---

Если это сообщение тебе пригодилось, буда рада видеть тебя в группе ВКонтакте. А ещё — спасибо, если ты нажмёшь на одну из кнопочек «лайков»:

---

Вы можете оставить комментарий к докладу.

Восстание Пугачёва – кратко — Русская историческая библиотека

Емельян Пугачёв, вождь восстания 1773–1775, родился в 1742 на Дону, в станице Зимовейской. Несмотря на то, что Пугачев был донским казаком, восстание под его предводительством началось среди казачества реки Яик (Урал). В середине XVIII столетия богатая войсковая старшина Яика возобладала над демократическим казацким самоуправлением. Старшины ввели произвольные налоги на ловлю рыбы, стали задерживать жалование рядовым станичникам. Уже в конце 1760-х вспыхнули вооружённые стычки между верхами и низами Яицкого войска. Императрица Екатерина II помогла старшине усмирить бедноту, но прислала на Яик следственную комиссию, сместила обвинённого в злоупотреблениях атамана Бородина и обязала войсковую канцелярию платить казацкое жалование без задержек. Однако произвол старшины вскоре возобновился. Рядовые казаки послали депутацию к царице, но президент военной коллегии Чернышев арестовал её и приказал бить кнутом.

Емельян Пугачёв

 

Власти распорядились, чтобы яицкое войско послало несколько сот казаков на службу в прикавказский Кизляр, а также задержало движение калмыков, которые решили тогда уйти из России на свою прежнюю родину – Джунгарию. Старшина стала возлагать эти тяжкие службы на бедных станичников.

13 января казаки Яицкого городка двинулись с жалобами к дому главы следственной комиссии, генерала Траубенберга. Тот вывел солдат с пушками, но казаки разогнали их, убили Траубенберга и повесили собственного атамана Тамбовцева. Это выступление вскоре было подавлено отрядом генерала Фреймана, но глухое брожение не унималось.

В этот момент на Яике и объявился уроженец Дона Емельян Пугачев. Человек ещё молодой (около 30 лет), он уже успел поучаствовать в Семилетней войне, в борьбе с польскими повстанцами и русско-турецкой войне 1768-1774, отличился в боях и имел звание хорунжего. В Польше Пугачев тесно общался с беглыми старообрядцами и проникся симпатией к расколу. Отпущенный с турецкой войны по болезни, Пугачёв поехал к сестре в Таганрог. Там он помог скрыться на Кубани не желавшему служить мужу сестры, был за это арестован, но бежал, жил в раскольничьих скитах, а потом добрался до Яика.

Проявляя наклонности авантюриста, Емельян Пугачёв поначалу стал подбивать часть казаков уйти с Яика к туркам (как недавно сделали на Кавказе казаки-некрасовцы). Этот план не осуществился, но Пугачёва заметила часть богатых яицких старшин, которая желала путём мятежа расширить урезанную в последние годы автономию своего войска. Пугачёв провозгласил себя низвергнутым мужем Екатерины II, императором Петром III. В народе ходили смутные (и безосновательные) слухи, что государь Пётр стоял за простых людей против дворян, поэтому самозванчество Пугачёва имело большой успех.

18 сентября 1773 Пугачев с отрядом из 300 человек подступил к Яицкому городку, но не сумел его взять. Тогда Емельян двинулся вверх по Яику и захватил несколько слабых крепостей (Илецкий городок, Татищеву, Чернореченскую, Сакмарский городок), чьи гарнизоны состояли в большинстве из солдат-инвалидов, либо казаков, настроенных в пользу восстания. Всех, кто отказывался присягать царю «Петру Федоровичу», подвергали казни, а присягнувших солдат и крестьян объявляли «вольными казаками». Войско Емельяна Пугачёва вскоре возросло до 7 тысяч и осадило Оренбург. Другая его часть вновь подступила к Яицкому городку.

Карта восстания под предводительством Пугачева

 

Пугачёв сильно зависел от своего окружения из богатых яицких старшин – Зарубина, Шигаева, Падурова, Чумакова, Перфильева. Чтобы самозванец не вышел из-под их влияния, они утопили своего соперника, сержанта Кармицкого, убили любовницу Пугачёва, офицерскую вдову Харлову. Самого Емельяна этот круг главарей намеревался поддерживать лишь до того, пока он ему будет удобен. Первоначальные легкие победы восставших объяснялись переводом лучших войск с Урала на театр турецкой войны. Но правительство вскоре двинуло против восстания Пугачева надежные части во главе с опытным генералом А. Бибиковым. 22 марта 1774 Емельян Пугачёв был разбит Бибиковым под Татищевой, потеряв полторы тысячи убитых и 36 пушек. Управлявшая Пугачевым старшина завела с властями переговоры о выдаче самозванца, но тому удалось бежать, а хотевшие пожертвовать им «предатели» Шигаев, Падуров и Зарубин были схвачены. Правительственные войска освободили Оренбург и Яицкий городок от осады.

Воспользовавшись весенней распутицей и внезапной смертью Бибикова, Пугачёв оторвался от погони и с небольшим числом приверженцев сделал быстрый бросок к северу – на уральские заводы. С его приходом там начали восставать приписные рабочие и крестьяне. К бунту примкнуло немало башкиров с их давней племенной неприязнью к русской власти. Вокруг Пугачёва опять собралось 5-10 тысяч человек, хотя это были уже не казаки, а лишённая всяких боевых качеств толпа. Кинувшийся за Пугачёвым правительственный отряд Михельсона без усилий бил восставших, но Емельян стал быстро уходить на север, а потом на запад, где вместо разбитых сторонников к нему повсюду примыкали новые толпы. Добравшись до Камы, Пугачёв взял города Осу, Ижевск, Воткинск, а затем неожиданно объявился у Казани, чей гарнизон ушёл бороться с ним под Оренбург. Самозванец захватил и страшно разорил Казань, но подоспевший вскоре Михельсон нанёс ему новое сильное поражение.

Суд Пугачева. Художник В. Перов, 1870-е

 

Всего с 500 человеками Пугачёв ушёл за Волгу, и здесь восстание разгорелось снова. Емельян прошёл уже большую часть пути от Казани до Нижнего Новгорода, но на Москву идти не рискнул и повернул на юг, в сторону Дона и Кубани. По пути крестьянские толпы Пугачёва жестоко разгромили Алатырь, Саранск, Пензу, Саратов. Заключив Кучук-Карнаджийский мир с турками, Екатерина II двинула против восстания новые силы во главе с Н. Паниным и знаменитым Суворовым. Пугачёв надеялся, что крестьянскую войну поддержит казачий Дон, но донское войско объявило его самозванцем и присоединило свои полки к силам правительства.

Разорив донские станицы Березовскую, Орловскую, Малодельскую, Раздорскую, Емельян Пугачёв повернул к Царицыну, но был отражён от этого города и под Чёрным Яром окончательно добит Михельсоном. С 30 казаками Пугачёв перешёл на восточный берег Волги, думая бежать в казахские степи. Однако по пути сопровождающие схватили его и выдали властям.

Пугачев и Перфильев были приговорены к четвертованию (Екатерина II из гуманности велела сперва отрубить им головы, а уж потом руки и ноги), Зарубин – к отсечению головы, Шигаев и Падуров – к виселице. Пугачёва казнили 10 января 1775. Его родная станица Зимовейская была переименована в Потемкинскую. Подавив последние очаги восстания Пугачёва, Екатерина в конце 1775 объявила прощение уцелевшим его участникам, но повелела для полного уничтожения памяти о мятеже переименовать реку Яик в Урал, Яицкий городок – в Уральск, а Яицкое казачье войско в Уральское. Общие казацкие круги прежнего Яицкого войска после восстания Пугачёва были отменены, а атаманы стали назначаться властями.

 

Краткий рассказ о Пугачеве

Емельян Иванович Пугачев – известен как бунтовщик, предводитель крестьянской войны, донской казак, талантливый авантюрист, все это сделало его известной исторической личностью с очень интересной биографией.

Емельян родился в станице Зимовейская-на-Дону (сейчас она называется Пугачевская) в 1742 году. Емеля рос смышленым мальчиком, очень добрым, отзывчивым, честным и трудолюбивым. От других сверстников его отличали невероятные лидерские качества и харизма.

В 18 лет парень отправился на службу, в 19  лет женился на красавице Софье Недюжевой, жившей в соседней станице. С 1756 года участвовал в составе донского войска в семилетней войне, затем 1764 году – в Польском походе, с 1768 года по 1774 принимал участие в русско-турецкой войне, был назначен хорунжем. После всех этих событий и начинается бурная жизнь Емельяна Пугачева.

Пугачев из-за болезни, просился в отставку, но ему было отказано. Емельяну предложили лечение в лазарете либо же самостоятельно. Он выбрал второй вариант и отправился в Таганрог к своей сестре и ее семье. Там он вызвался помочь мужу сестры бежать со службы, но побег был неудачным, и он, будучи схваченным, сдал Пугачева. Емельян после этого вынужден был скрываться. Его неоднократно находили, и он постоянно сбегал.

После одного из задержаний, Пугачева направили в Черкасск под конвоем. Бывший сослуживец Худяков, с помощью своего сына, помогли Пугачеву сбежать. В 1772 году Емельян расположился в старообрядческом ските Введения Богородицы, там он услышал от настоятеля о волнениях Яицком войске. Сразу же направился в Яицкий городок, где встретился с Денисом Пьяновым (один из участников восстания). При общении с Пьяновым, Пугачев представился чудом выжившим Петром ІІІ, и предлагал варианты возможно побега на Кубань. Пугачева снова арестовали и заслали на каторгу в Сибирь, откуда он успешно сбежал.

В 1773 году, снова представившись Петром ІІІ, поднял бунт яицких казаков, к которым затем присоединились уральские, донские, а также местное население, недовольное русским правлением. Восстание было огромным и охватило обширные территории. В 1774 году Пугачева сдали властям его же союзники за вознаграждение. Его казнили на Болотной площади в 1775 году.

Краткий рассказ о Пугачеве (вариант 2)

Краткий рассказ о Пугачеве (вариант 3)

История города Пугачёва — Пугачев

В 1762 году Екатерина II издала манифест, в котором призывала своих подданных осваивать левый берег Волги. С той поры началось активное заселение степи беглыми крепостными, раскольниками, людом свободолюбивым и мятежным.

Селились по излучинам Иргиза. В 1764 году старообрядцы образовали слободу Мечетную. Назвали так, потому что здесь еще от Золотой Орды оставались развалины мусульманских храмов.

Слобода Мечетная в ту пору представляла собой одну улицу. По переписи 1765 года в ней числилось 264 души мужского пола.

Одновременно с возникновением слободы выше и ниже её по течению реки Иргиз «…основались раскольничьи мужские и женские монастыри и скиты, из которых впоследствии приобрели громкую известность мужские — Верхний Спасопреображенский, Средне-Никольский и Нижне-Воскресенский, а женские — Покровский и Успенский, долгое время служившие притонами для разных беспокойных людей, скрывавшихся сюда под видом «за древле-отеческую веру». К концу 18 века иргизские монастыри имели для древлеправославных старообрядцев такое же значение, как Киев для обычных православных. С Урала, Дона, Волги, из отдаленной Сибири и с гордой Невы — отовсюду тянулись сюда паломники, чтобы не только насладится благолепием храмов и послушать ангелоподобное пение, но и припасть к нетленным мощам святых отцов Исаакия и Асафа, от которых больные получали исцеление. В 1772 году в слободе Мечетной оказался беглый казак Емельян Пугачев. Именно здесь мудрый старец Филарет надоумил бунтаря выдать себя за царя Петра III.

Впоследствии, в 1828 году, саратовский губернатор Голицын с помощью военной силы сумел обратить часть иргизских старообрядцев в единоверие. После этого закончилось и процветание монастырей.

Слобода Мечетная тем временем росла и развивалась. В начале 19 века население на Иргизе настолько увеличилось, что императорским указом от 18 декабря 1835 года образовано было в заволжской части тогдашней Саратовской губернии три уезда — Николаевский, Новоузенский и Царевский. Слобода Мечетная назначена была городом с переименованием в Николаевск. Торжественное открытие нового уездного города состоялось 9 мая (22 мая по новому стилю) 1836 года. 1 января 1851 года Николаевск отчислен уездным городом во вновь образованную Самарскую губернию. По размерам Николаевский уезд занимал второе место по губернии. В подчинении города оказались крупная торговая слобода Балаково и главная немецкая колония на Волге — Екатериненштадт. Жители Николаевска занимались в основном переработкой сельскохозяйственной продукции. К этому же времени относится и начало регулярной застройки города по принципу четкой прямоугольной планировки улиц на основе высочайше утвержденных типовых генеральных планов городов Российской империи.

Во второй половине 19 века Николаевск был захолустным уездным городком, но он славился хорошей пшеницей, которая ценилась как на внутреннем, так и на внешнем рынке. Росло и богатело купеческое сословие. Строились мельницы купцами Волковойновыми, Чемодуровым, Фоминым. В 1865 г. было выдано 237 торговых свидетельств купцам 2-й гильдии. Первая народная школа была открыта в 1848 году. В 1850 г. было открыто женское приходское училище, а в 1860 — уездное училище — единственное на весь огромный уезд учебное заведение среднего звена. Николаевская больница Приказа общественного призрения была единственной в крае. После пожара 1897 года прямые, похожие на проспекты, улицы наиболее интенсивно стали застраиваться кирпичными особняками и всевозможными лавками, магазинами и складами, зданиями присутственных мест. Бурно развивалась промышленность. В городе было несколько крупных мельниц, два кирпичных завода, лесопильный завод, небольшое чугунолитейное производство, много мелких кустарных производств. Почетный гражданин города купец С.О. Локтев более двадцати лет был церковным старостой Иоанно-Предтеченского собора, председателем попечительства и городским головой. Его попечением на базарной площади Николаевска по проекту саратовского архитектора А. М. Салько в 1899 году был возведен величественный каменный пятиглавый Воскресенский храм с отдельной трехъярусной колокольней и двумя часовнями на углах. Этот собор и сейчас господствует над городской застройкой, которая состоит в основном из одно и двухэтажных каменных домов. В 1911 году вольский купец Н.С. Меньков начал строить на свои деньги больницу на 25 коек, которая была открыта 2 ноября 1913 года и подарена городу. В 1913 г. начато строительство водопровода и водозаборных сооружений на реке Иргиз, здание городской электростанции и водонапорной башни в центре города, появилась и телефонная сеть. 10 января 1883 года в Николаевске родился будущий известный писатель Алексей Николаевич Толстой. Жизнь города он описал в своих романах «Хромой барин», «Чудаки». Советская власть была провозглашена в городе Николаевске 27 ноября 1917 года. Возглавлял большевистскую организацию В. И. Ермощенко. В годы гражданской войны на территории Николаевского уезда В. И. Чапаев формирует отряды 25 дивизии. 11 ноября 1918 года город Николаевск по инициативе В. И. Чапаева был переименован в г. Пугачев. В 1935 году образован Пугачевский район. Промышленность в основном была направлена на переработку сельскохозяйственной продукции — мукомолье, а также кустарно-промысловое, гончарное, кузнечное, бондарное, столярное производство.

Мы гордимся людьми, которые здесь жили и работали, оставив о себе добрую память в России. Это председатель городской Думы, отчим А.Н. Толстого, первый заволжский марксист А. А. Бостром; легендарный начдив, романтик революции В.И. Чапаев; поэты Демьян Бедный и Степан Щипачев; И. В. Доронин, который за спасение челюскинцев стал седьмым Героем СССР. Есть и другие славные имена.

Тяжкие испытания выпали на долю жителей Пугачева и Пугачевского района в годы Великой Отечественной войны. Около 30 тысяч наших земляков ушли воевать с германским фашизмом. Более восьми тысяч не вернулись с полей сражений. 14 воинов стали Героями Советского Союза. В городе свято чтут память своих земляков, защищавших свободу нашей Родины. В 1975 году в центре воздвигнут памятник Воину-победителю, 9 мая 1985 года открыта аллея Героев Советского Союза, где установлены 15 бронзовых бюстов и щиты с фамилиями всех погибших в годы войны пугачевцев.

В годы войны коллективы пугачевских предприятий перестроились на военный лад. В районе и городе было развернуто движение в помощь фронту. На личные средства горожан и сельских тружеников были построены 21 боевой самолет, танковая колонна. Труженики села отправили для фронта пять миллионов пудов хлеба, десятки тысяч пудов другой сельхозпродукции.

Пугачевский район — интеллектуальный центр Заволжья. В нем имеется сеть образовательных учреждений, Домов культуры, Краеведческий музей, Дом-музей В.И.Чапаева, самодеятельный театр. Книжный фонд библиотек насчитывает 570 тысяч экземпляров. Ежегодно более 700 специалистов выпускают Гидромелиоративный техникум и профессиональное училище. Школы города профессионально ориентированы и связаны с ВУЗами Саратова договорными отношениями. На базе Пугачевского гидромелиоративного техникума работают представительства Саратовского государственного аграрного университета и института предпринимательства и агробизнеса Саратовской государственной академии права, в которых обучается более 1500 студентов близлежащих районов Заволжья, а также соседних областей и Казахстана.

Возрождается вера, а с нею возвращается к людям понятие добра и справедливости. В 1996 году в Пугачеве была восстановлена мечеть. Сейчас ведутся работы по реставрации православного храма и звонницы в с. Давыдовка, монастыря в Мопре, открыта воскресная школа в Пугачеве.

ПОЛНАЯ КОЛЛЕКЦИЯ ИСТОРИЧЕСКИХ ФОТОГРАФИЙ ГОРОДА НАХОДИТЬСЯ В АЛЬБОМАХ «СТАРЫЕ ФОТО ГОРОДА» И «ВОСКРЕСЕНСКИЙ СОБОР» ФОТОГАЛЕРЕИ ЭТОГО САЙТА

 

Пугачев Емельян Иванович краткая биография

История России кратко

Емельян Пугачев родился предположительно в 1742 году в станице Зимовейской. Военную службу он начал в 1769-м. Пугачеву довелось поучаствовать в Семилетней и русско-турецкой войнах. В 1768 он получил звание хорунжего. После этого он решил выйти в отставку по болезни, но получил отказ.

Именно это событие стало первым в цепочке, сделавшей возможным восстание Емельяна Пугачева. Он самовольно покинул войска и долгое время выдавал себя за купца, скрываясь. Но, в Моздоке, в 1772 г. был арестован в результате доноса и приговорен к ссылке на каторгу в Сибирь. Через год, в 1773-м ему удалось бежать к Яицким казакам, где назвался Петром 3 и начал подготовку казацкого восстания. Первый отряд Пугачева был совсем небольшим, в него входили только 80 человек.

Небольшой городок на реке Яик восставшие казаки штурмовать не стали, поскольку не имели артиллерии и двинулись к Оренбургу. За время похода к Пугачеву присоединились крестьяне, работные люди, татары, калмыки и многие другие недовольные существующей ситуацией. Значительно увеличившийся отряд смог блокировать Оренбург 5 (16) октября 1773 года. На тот момент у Пугачева было 2,5 тыс. человек и 20 орудий.

Скоро слухи о пугачевском восстании спровоцировали волнения среди крестьян в Оренбургской губернии. Лагерь повстанцев постоянно пополнялся новыми людьми, фуражом, оружием. Значительное поражение нанес Пугачеву корпус Бибикова. В результате восставшие лишились орудий и вынуждены были отступить, оставив Оренбург, в Уральские горы. После этого началось формирование нового повстанческого войска.

В 1774 году Пугачев начал поход на Москву. 12 (23) июля он привел войско к Казани. Но, потерпел поражение не сумев взять город. Потеряв артиллерию, войско переправилось на правый берег Волги. Это вновь спровоцировало массовые крестьянские волнения, что только способствовало укреплению сил восставших. Теперь Пугачев со своим войском представлял серьезную угрозу для Москвы. Он опубликовал манифест об освобождении крестьян.

До конца 1774 года пугачевцы захватили: 31 июля – Курмыш; 3 августа – Алатырь; 7 августа – Саранск; 13 августа – Пензу; 15 августа – Петровск; 17 августа – Саратов. Только попытка штурма Царицына остановила череду побед. От армии Пугачева отделились калмыки и донские казаки. Пугачев, преследуемый корпусом Михельсона, начал отступление к Черному Яру. Пугачев после разгрома своей армии вынужден был бежать в степи Заволжья.

Последний значительный бой произошел у Солениковой ватаги 25 августа (1 сентября). Преданный своими сотниками, Пугачев был схвачен и доставлен в небольшой городок на Яике 15 (26) сентября.

8 – 10 января 1775 года в Москве проходил суд над Емельяном Пугачевым. Екатерина 2 утвердила приговор Сената. Пугачев казнен 10 (21) января на Болотной площади. Казнь Емельяна Пугачева не смогла стереть его деяний из народной памяти. Такова краткая биография Пугачева Емельяна Ивановича.

Сбежавший из России банкир Пугачев подтвердил личность дочерей Путина, выложив их подростковые фото

Пользователи соцсетей и журналисты обратили внимание на подростковые фотографии дочерей Путина Екатерины и Марии, выложенные некоторое время назад на сайте сбежавшего из России экс-владельца Межпромбанка Сергея Пугачева. Как отмечают «Открытые Медиа», тем самым Пугачев фактически подтвердил, что Мария Воронцова и Катерина Тихонова — действительно дочери президента.

Фотографии, судя по всему, выложены несколько лет назад: на сайте web.archive.org сохранилась копия страницы от апреля 2019 года, а в адресе всех снимков указан октябрь 2017-го — вероятно, именно тогда они и были опубликованы.

«МБХ медиа» пишет, что, по словам самого Пугачева, он выложил фотографии еще десять лет назад: «Я никаких фотографий сейчас не выкладывал, эти фотографии выложил лет десять назад».

Пугачев подписал одну из фотографий: «Детская дружба навсегда!!! «Александр Пугачев, Екатерина и Мария Путина, Виктор», 2000-е» (орфография и пунктуация автора сохранены — МЗ).

🔥  Появилось подтверждение, что Катерина Тихонова и Мария Воронцова действительно дочери Владимира Путина! Экс-владелец разорившегося Межпромбанка Сергей Пугачёв, который когда-то дружил с президентом, выложил на своём сайте архивные фото, где помимо… https://t.co/1JsruvPZFQ pic.twitter.com/5ZndJM16s2

— Открытые медиа (@OpenMedia_io) June 23, 2020

Как пишет The Bell, до конца 2000-х Пугачев считался бизнесменом, близким к Владимиру Путину, он также был членом Совета Федерации. В 2010 году Межпромбанк лишили лицензии, а против Пугачева возбудили дело по статье 160 УК (присвоение или растрата») и 201 УК (злоупотребление полномочиями). По версии следствия, банкир выводил кредиты посредством офшоров. В 2011 году Пугачев покинул Россию.

В 2015 году Reuters и Bloomberg назвали Тихонову дочерью Путина. В 2016 году The New Times писал, что Мария Воронцова — это дочь Путина. Официально эта информация не подтверждалась.

Обновлено в 20:15. Добавлена информация «МБХ медиа».

Характеристика героя Пугачев (Капитанская дочка Пушкин А.С.) :: Litra.RU

Есть что добавить? Присылай нам свои работы, получай litr`ы и обменивай их на майки, тетради и ручки от Litra.ru!

/ Характеристики героев / Пушкин А.С. / Капитанская дочка / Пугачев -Вариант 1 -Вариант 2 -Вариант 3 -Вариант 4 -Вариант 5 -Вариант 6 -Вариант 7     Пугачев Емельян – вождь антидворянского восстания, называющий себя «великим государем» Петром III.     Этот образ в повести многогранен: П. и злобен, и великодушен, и хвастлив, и мудр, и отвратителен, и всевластен, и зависим от мнений окружения.     Образ П. дан в повести глазами Гринева – незаинтересованного лица. По мысли автора, это должно обеспечить объективность подачи героя.     При первой встрече Гринева с П. внешность бунтаря ничем не примечательна: это 40-летний мужик среднего роста, худощавый, широкоплечий, с проседью в черной бороде, с бегающими глазами, приятным, но плутоватым выражением лица.     Вторая встреча с П., в осажденной крепости, дает иной образ. Самозванец восседает в креслах, затем гарцует на лошадях в окружении казаков. Здесь он жестоко и беспощадно расправляется с защитниками крепости, не присягнувшими ему на верность. Создается ощущение, что П. играет, изображая «настоящего государя». Он, с царской руки, «казнит так казнит, милует так милует».     И только во время третьей встречи с Гриневым П. раскрывается полностью. На казачьем пиру исчезает свирепость вождя. П. поет свою любимую песню («Не шуми, мати зеленая дубровушка») и рассказывает сказку об орле и вороне, которые отражают философию самозванца. П. понимает, какую опасную игру он затеял, и какова цена в случае проигрыша. Он не доверяет никому, даже своим ближайшим сподвижникам. Но все-таки надеется на лучшее: «А разве нет удачи удалому?» Но надежды П. не оправдываются. Его арестовывают и казнят: «и кивнул ему головою, которая через минуту, мертвая и окровавленная, показана была народу».      П. неотделим от народной стихии, он ведет ее за собою, но в то же время зависит от нее. Неслучайно первый раз в повести он появляется во время снежного бурана, среди которого он легко находит дорогу. Но, в то же время, он уже не может свернуть с этого пути. Усмирение бунта равнозначно смерти П., что и происходит в финале повести. / Характеристики героев / Пушкин А.С. / Капитанская дочка / Пугачев

Смотрите также по произведению «Капитанская дочка»:

Верховный суд постановил, что трасты, принадлежащие «банкиру Путина» Пугачеву, являются «фикцией»

Ранее в этом месяце в Высоком суде г-н судья Бирсс постановил, что трасты, принадлежащие российскому бизнесмену Сергею Пугачеву, на самом деле были «фиктивными». Это привело к тому, что любые активы в трастах были доступны для принудительного исполнения по умолчанию.

Определение А

В недавнем деле Snook v London and West Riding Investments Ltd (2017) лорд-судья Диплок определяет юридическое понятие «фиктивного» траста как действие, направленное сторонами на создание у третьих сторон или суда видимости создание иных юридических прав и обязанностей по сравнению с теми, которые стороны фактически намерены создать.Стороны должны иметь общее намерение не создавать юридические права и обязанности, которые первоначально представлены.

Фон

Согласно приговору, Пугачев является «человеком огромного состояния», владеющим многочисленной недвижимостью в Лондоне, на Красной площади в Москве, французской торговой сетью, тремя роскошными яхтами на общую сумму 65 миллионов долларов, двумя частными самолетами и вертолетом. Гражданин Франции покинул Великобританию в 2014 году, вскоре после того, как якобы обнаружил в своих автомобилях устройства слежения.

Существование пяти трастов в Новой Зеландии стало известно после отдельного разбирательства по раскрытию информации, в котором в настоящее время находится г-н Пугачев, после того, как Российское агентство по страхованию вкладов (АСВ) передало дело в суд в 2014 году. Г-н Пугачев утверждал, что трасты были установлены с намерением, чтобы все активы, находящиеся в них, были в пользу его жены Александры Толстой и их троих детей, Алексея, Ивана и Марии Пугачевых.

Иск о том, что тресты были фиктивными, выдвинули АСВ, выступавшие в роли ликвидатора, и Межпромбанк.АСВ утверждало, что Пугачев, соучредитель Межпромбанка, осуществлял систематическую схему по выманиванию денег из компании в свою пользу и в пользу других до ее краха в 2010 году. АСВ подало многочисленные судебные иски как в России, так и в Великобритании в попытке вернуть эти активы. Фирма считала, что г-н Пугачев должен активов на сумму более 1 миллиарда долларов в результате краха банка. Истцы начали с того, что в 2014 году добились вынесения постановления о замораживании активов на общую сумму 1 фунт стерлингов. 1000000000.

Судебное решение

Аргумент о том, что трасты были созданы в интересах семьи г-на Пугачева, был отвергнут судьей Бирссом, который заявил, что «цель трастов заключалась не в том, чтобы передать контроль над активами кому-то другому; это должно было скрыть его власть над ними». Таким образом, суд установил, что г-н Пугачев использовал вид своей семьи, чтобы поддерживать вид, что имущество и активы в доверительном управлении ему не принадлежат. Судья Бирсс добавил к этому, заявив, что, хотя г-н Пугачев считал себя «защитником» трастов, это было просто его «средством осуществления контроля» и что действия «не должны приниматься».В постановлении отмечалось, что в некоторых моментах общая сумма активов, находящихся в пяти трастах, составляла более 95 миллионов долларов.

Представитель г-на Пугачева высказался по поводу судебного решения, отметив, что «сама просьба о признании г-на Пугачева бенефициарным владельцем трастов является абсурдной». Хотя г-н Пугачев был основным ответчиком в судебном деле, он не был уведомлен о судебном разбирательстве в Высоком суде, и ни он, ни его адвокаты не участвовали в разбирательстве.

Значение постановления

Аргумент о том, что трасты являются «фиктивными», признанными в Великобритании, демонстрирует снижение терпимости Высокого суда к любому лицу, которое пытается держать счета или активы в офшорной зоне в попытке уклониться от кредиторов.Более широкие последствия этого, безусловно, могут быть значительными для крупных бракоразводных, семейных или налоговых дел, когда активы обычно хранятся в офшорах в трастах.

В настоящее время г-н Пугачев находится за пределами Великобритании, где имеется ордер на его арест. По возвращении ему грозит двухлетний тюремный срок из-за нарушения двенадцати постановлений Верховного суда в связи с различными судебными разбирательствами, которые в настоящее время ведутся против него.

Чтобы прочитать приговор полностью, нажмите здесь. Дополнительные недавние постановления о трастах см. ниже.Для получения информации о самих трастах посетите эту страницу.

Реструктуризация МИБ Пугачева вызвала критику со стороны держателей облигаций, несмотря на поддержку Центрального банка

Эта статья предоставлена ​​читателям FT.com Debtwire — самой информированной новостной службой, доступной для финансовых специалистов на рынках с фиксированным доходом по всему миру. www.debtwire.com

—————————————————————————————————

Балтийский завод Сергея Пугачева может строить атомные ледоколы, но его предложение заложить верфь для погашения просроченной задолженности другой портфельной компании, Международного промышленного банка (МИБ), еще не охладило отношения с разгневанными кредиторами.

МИБ не выплатил на прошлой неделе облигации на сумму 200 млн евро со сроком погашения — это первый такой дефолт российского банка по еврооблигациям с кризисных 1998-1999 годов — что привело к кросс-дефолту по еще одной еврооблигации на сумму 200 млн долларов США со сроком погашения в 2013 году. Пугачев одновременно объявил об урегулировании задолженности МИБ перед центральным банком России в размере 32 млрд руб. (1,03 млрд долл. США) и попросил инвесторов отказаться от дефолта и временно отложить выплату процентов.

Государственная поддержка, подразумеваемая в реструктуризации долга МИБ, придает предложению банка значительный импульс.Тем не менее решение российского финансиста не консультироваться с иностранными инвесторами до его дефолтного предложения может иметь неприятные последствия, разжигая оппозицию, сообщили три источника, знакомые с ситуацией.

МИБ опубликовал уведомления о дефолте по обеим облигациям на прошлой неделе, но только начал запрос согласия держателей 2010-х годов, стремясь отменить дефолт и отложить выплату процентов в размере 18 миллионов евро до тех пор, пока запрос согласия не вступит в силу.

Банк также попросил держателей облигаций 2010-х годов продлить срок погашения на один год в обмен на значительно увеличенный пакет ценных бумаг. Несколько держателей утверждали, что предлагаемые гарантии не отвечают требованиям, и в ответ потребовали, чтобы Пугачев также предоставил часть своих угольных активов в качестве залога, сказал один из держателей облигаций.

Полностью исключив владельцев более старых 2013, МИБ также мобилизовал блок инвесторов, чтобы бороться за их угол, сказали три источника. «Оба выпуска — 2010-е и 2013-е — находятся в дефолте, и нормальная рыночная практика — реструктурировать весь долг по такому сценарию», — сказал один из источников.

Помимо законности, держатели облигаций 2013 года не в завидном положении, признал второй держатель краткосрочных облигаций. «Такое впечатление, что они смотрят, как уходит поезд, и пытаются попасть в последний вагон», — сказал он.

МИБ не видит экономического смысла в обращении к держателям 2013-х, поскольку считает, что его проблемы с ликвидностью краткосрочны и 2013-е не нуждаются в переносе, заявил на прошлой неделе банкир, близкий к ситуации

Согласие Начатое в начале прошлой недели ходатайство о выкупе облигаций МИБ на сумму 200 млн евро, выпущенных в 2010 г. , предоставляет этим держателям совместную гарантию от девяти компаний, зарегистрированных на Британских Виргинских островах, через которые Пугачев контролирует Балтийский завод и еще один завод под названием «Северная верфь».Доходы от продажи акций обоих заводов, о которой, по словам МИБ, уже ведутся переговоры, будут использованы для погашения просроченной эмиссии в течение 20 дней после завершения. В свою очередь, МИБ хочет условный дополнительный год для погашения облигации, первоначально подлежащей погашению 6 июля.

Эта договоренность фактически превратит облигации 2013 года в размере 200 миллионов евро в субординированный долг, утверждал источник, знакомый с ситуацией, который далее задавался вопросом, просуществует ли банк до 2013 года без всеобъемлющего соглашения о реструктуризации.По его словам, держатели облигаций 2013 года имеют веские правовые основания для ускорения выпуска.

Основной аргумент

Обе облигации ничтожны по сравнению с обязательствами МИБ перед центральным банком России, и уведомление об ускорении выставит держателей 2013 года против ЦБ, сказал источник в банке. «Я не думаю, что это лучший вариант для них», — сказал он, добавив, что МИБ намерен оставаться в курсе этого вопроса, произведя выплату процентов по своим 11%-ным обязательствам в 2013 году со сроком погашения в августе.

В начале прошлой недели ЦБ согласовал реструктуризацию долга с МИБ, чтобы продлить долг банка до января 2011 года.По словам первого держателя облигаций, который утверждал, что видел график погашения ЦБ РФ, МИБ должен будет ежемесячно выплачивать 2,5 млрд руб., а оставшуюся часть — по истечении срока.

Что бы ни решили сделать дальше более воинственные держатели долгосрочных еврооблигаций банка, им придется делать это быстро. Крайний срок подачи предварительных инструкций для ходатайства о согласии на 2010 год наступает в среду (14 июля), а собрание держателей облигаций запланировано на 21 июля. Если держатели 2013 г. не смогут собрать необходимый им 25-процентный пакет до 21 июля, а держатели 2010 г. примут внеочередное решение, МИБ может утверждать, что случай дефолта урегулирован, заявили второй держатель облигаций и первый источник, знакомый с ситуацией.

Теоретически держатели облигаций также могут оспорить МИБ на том основании, что он нарушил требования ЦБ РФ в отношении ликвидности, но банк утверждает, что в ближайшее время исправит их. И хотя в местной прессе широко сообщалось, что 99% кредитов МИБ просрочены, это отражает техническую классификацию, примененную ЦБ РФ ко всем кредитам банка после того, как 16 июня он не выплатил 9,6 млрд руб. финансирования ЦБ РФ и дополнительно 2 млрд руб. срок до 23 июня.

Агент по привлечению клиентов Credit Suisse отказался комментировать процесс реструктуризации.

Играя в уголь

Держатели 2010-х могут быть в лучшем положении, чем инвесторы 2013-го, но не все из них счастливы. Некоторые запросили у МИБ дополнительный пакет обеспечения в виде 20-процентной доли в угольных активах Пугачева после заявлений ЦБ на прошлой неделе о том, что он имеет залог Балтийских верфей в качестве обеспечения долга МИБ.

Credit Suisse и МИБ отклонили требования ЦБ РФ как неточные во время разговоров с иностранными кредиторами на прошлой неделе, сказал первый держатель облигаций.

Последнее встречное предложение держателей облигаций предполагает, что дополнительная гарантия по угольным активам должна вступить в силу только в том случае, если ожидаемые продажи верфи не осуществятся к декабрю 2010 года, продолжил держатель облигаций. По его словам, в то время как держатели 2013 года работают над ускорением, группа держателей 2010 года собирает поддержку, чтобы получить необходимый блок одной трети, чтобы встать на пути запроса согласия, если их требования не будут выполнены.

—————————————————————————————————

Для получения дополнительной информации или запроса о пробной версии, пожалуйста, напишите по электронной почте продажи@debtwire.com или звоните Америка: +1 212-686-5374 Европа: +44 (0)20 7059 6113 Азиатско-Тихоокеанский регион: +852 2158 9731

«Заложник своего окружения»: Путин «не супермен», и его положение может не будьте уверены, говорят бывшие союзники

Breadcrumb Trail Links

1. Мир
2. Новости

Некоторые из бывших союзников Путина, те, кто впал в немилость за 15 лет его правления, говорят, что его империя «хрупка» и рушится

Дата публикации:

08 октября 2015 г.  •  8 октября 2015 г.  •  5 минут чтения  •  Присоединяйтесь к беседе Алексей Никольский, РИА-Новости, Кремлевский пул Фото через AP

Содержание статьи

ПАРИЖ, 8 октября — Владимиру Путину исполнилось 63 года на этой неделе с его уже традиционным проявлением спортивного мастерства и объявлением о том, что российские военно-морские корабли запустили волну ракет против Исламского государства в Сирии.

Объявление

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

Российский лидер никогда не казался более уверенным в себе, а его власть никогда не была так прочна. За последние два года он переиграл Запад в Крыму, на востоке Украины и в Сирии. Западные санкции, по-видимому, не смогли погасить его амбиции.

Но некоторые из бывших союзников Путина, впавших в немилость за 15 лет его правления, рисуют другую картину: они говорят, что положение Путина как российского лидера может быть гораздо менее стабильным.

«Путин — заложник своего окружения», — заявил в интервью Рейтер в Париже Сергей Пугачев, который когда-то считал главу Кремля близким другом семьи.

Вражда между Пугачевым и российским правительством хорошо задокументирована. Пугачев говорит, что его бизнес-империя стоимостью 15 миллиардов долларов, охватывающая судостроение, уголь и недвижимость, была экспроприирована конкурентами Кремля. Он судится с Россией на 12 миллиардов долларов. Тем временем Россия добивается ареста Пугачева за растрату и незаконное присвоение активов, обвинения, которые Пугачев отрицает.

Объявление

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

Учитывая секретность путинского Кремля, подтвердить версию Пугачева было невозможно. Но интервью с другими российскими бизнесменами и иностранными дипломатами рисовали аналогичную картину, хотя и частично.

Описания могут предложить редкую информацию из первых рук о путинском дворе и некоторые подсказки к вопросу, который занимал олигархов, западные правительства и даже советников Путина: как долго Путин останется верховным лидером России?

Для Пугачева ключами к разгадке являются представления Путина о своей личной безопасности, поиск преемника и клановые сражения за трофеи бывшей сверхдержавы.

«Пока он не найдет пути к договоренности, обеспечивающей его безопасность, он останется у власти», — сказал Пугачев.

Объявление

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

«Он больше не доверяет своему ближайшему окружению, и я бы на его месте тоже не доверял им: то, что они говорят ему в лицо и то, что они говорят, когда его нет, — это совсем другое».

Фото АП/РИА Новости, Дмитрий Астахов, пресс-служба правительства, дело

На вопрос о комментариях Пугачева пресс-секретарь Путина Дмитрий Песков сказал: «Мы рассматриваем их как слова гражданина, находящегося в розыске.

С тех пор как 31 декабря 1999 года Борис Ельцин назначил Путина исполняющим обязанности президента, его по-разному называли царем, реформатором, тайным полицейским и самым богатым человеком России.

В дипломатических депешах, опубликованных WikiLeaks в 2010 году, американские дипломаты изображали Путина как российского автократа, который правит, позволяя коррумпированным чиновникам и шпионам воровать. Кремль назвал эту идею смешной.

Объявление

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

Друзья и враги представили Путина как лидера, пытающегося объединить современную Россию с ее советским сверхдержавным прошлым и мистическими традициями дореволюционных православных царей.

Кремль показал, как Путин борется с амурским тигром, а его сторонники в этом году установили в его родном городе бюст, изображающий его в образе современного Цезаря. The New York Review of Books написал об «Императоре Владимире».

(Алексей Никольский/РИА-Новости, фото из пула Кремля через AP)

Но описание Пугачевым менее надежного лидера перекликается со взглядами Михаила Ходорковского, когда-то самого богатого человека России, который был арестован в 2003 году до того, как его бизнес-империя ЮКОС была разорвана на части. а его основные производственные подразделения перешли к «Газпрому» и «Роснефти».

«Что бы ни говорила пиар-машина и пропаганда Кремля, президент Путин — не супермен», — заявил Ходорковский, освобожденный в 2013 году после десяти лет в российских тюрьмах, выступая перед аудиторией в Лондоне в феврале.

Объявление

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

«Российский бизнес и правящая элита все больше тревожатся в ответ на политический курс Путина; даже тех, кто ему верен.Очевидно, что для Путина наступила осень».

По мнению Пугачева, более грубые интерпретации власти Путина упускают из виду лежащую в основе нестабильность постсоветской России: Путин должен с осторожностью вести хаотичную клановую битву за богатство.

«Эти люди, они такие, будут служить любому, кто защищает их корыстные интересы», — сказал 52-летний Пугачев о кланах вокруг Путина.

Алексей Никольский / РИА-Новости, Кремлевский пул Фото через AP

«Эти люди — заложники своих преступлений — по сути, весь истеблишмент — и им нужен кто-то, кто как минимум будет представлять их интересы.Если ситуация изменится и они посчитают, что Путин недостаточно защищает их интересы, то, я думаю, может случиться все, что угодно».

Объявление

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

За патриотической чванливостью богатых москвичей, согласно этому анализу, скрывается опасность для Путина: падение цен на нефть и западные санкции за его войну в Украине уменьшили прибыль этого денежного класса.

Источник в дипломатических кругах на Западе сообщил, что Путин был плохо информирован и неясно, как долго он будет оставаться у власти, учитывая экономические проблемы России. Рубль упал вдвое по отношению к доллару США с 2012 года, когда Путин был избран на третий срок.

«В таких ситуациях вы ничего не видите, а потом вдруг все уходит», — сказал дипломат.

Он доверился ястребам, но безуспешно. Сам он не лидер ястребов, но за 15 лет мигрировал между разными кругами

Влиятельный российский бизнесмен на условиях анонимности из-за российского табу на обсуждение будущего Путина сказал: «Экономика очень плохой.”

Объявление

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

«Эти ситуации невозможно предсказать, но они могут измениться очень быстро. Когда это происходит, это происходит очень быстро», — сказал россиянин. Он использовал русское слово «хрупкий», чтобы описать текущую экономическую и политическую ситуацию.

Пугачев сказал, что переход Путина к конфронтации с Западом из-за Украины проистекает из его зависимости от руководства сторонников жесткой линии внутри Кремля.

«Он доверял ястребам, и у него не было успеха. Сам он не лидер ястребов, но за 15 лет он мигрировал между разными кругами», — сказал он.

1. National Post Мнение: Влад сошел с ума

2. В свой 63-й день рождения Путин провел телевизионный хоккейный матч с бывшими игроками НХЛ. Он забил семь мячей

3. Леонид Бершидский: Европа обеспечила Путину еще одну победу в Украине

Реклама

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

Содержание статьи

Другой российский бизнесмен, хорошо осведомленный о Кремле, назвал Путина изолированным лидером, который понимает, что никогда не оставит власть.

«Никто не говорит ему правду», — сказал русский, который говорил на условиях анонимности. «Он не может уйти. Он это знает. Он верит в заговоры.

Однако один русский эмигрант предостерег от переоценки внутренней оппозиции.

«Да, Владимир Путин должен учитывать интересы различных заинтересованных сторон», — сказал Сергей Гуриев, экономист, бежавший из России во Францию ​​в 2013 году.

«Однако в нынешней системе — безусловно, после дела ЮКОСа — никто в российской элите не мог даже приблизиться к нему по силе и авторитету. Если он лично решит сделать X, никакие кланы или элитные группировки не смогут этому помешать».

Так Путин останется у власти на всю жизнь?

«Мне трудно сказать, чем все это кончится», — сказал Пугачев. «Я думаю, что застой, вероятно, здесь надолго».

Поделитесь этой статьей в своей социальной сети

Реклама

Это объявление еще не загружено, но ваша статья продолжается ниже.

NP Опубликовано

Подпишитесь на получение ежедневных главных новостей от National Post, подразделения Postmedia Network Inc. в любое время, нажав на ссылку отказа от подписки в нижней части наших электронных писем. Постмедиа Сеть Inc. | 365 Bloor Street East, Торонто, Онтарио, M4W 3L4 | 416-383-2300

Спасибо за регистрацию!

Приветственное письмо уже в пути.Если вы его не видите, проверьте папку нежелательной почты.

Очередной выпуск NP Posted скоро будет в вашем почтовом ящике.

Комментарии

Postmedia стремится поддерживать живой, но вежливый форум для обсуждения и призывает всех читателей поделиться своим мнением о наших статьях. Комментарии могут пройти модерацию в течение часа, прежде чем они появятся на сайте. Мы просим вас, чтобы ваши комментарии были актуальными и уважительными.Мы включили уведомления по электронной почте — теперь вы будете получать электронное письмо, если получите ответ на свой комментарий, появится обновление ветки комментариев, на которую вы подписаны, или если пользователь, на которого вы подписаны, прокомментирует. Посетите наши Принципы сообщества для получения дополнительной информации и подробностей о том, как изменить настройки электронной почты.

Александра Толстая, чей бывший олигарх был известен как «банкир Путина», хвастается своим домом в Оксфордшире

Графиня Александра Толстая предложила заглянуть в свой уютный коттедж в Оксфордшире, где она живет взаперти — спустя несколько месяцев после того, как ее «выселили» из лондонского дома принадлежит ее бывшему российскому миллиардеру.

Красавица-аристократка, которая делит детей Алешу, Ивана и Марию с финансистом Сергеем Пугачевым, сменила городскую жизнь на более спокойные дни, наполненные загородными прогулками, выпечкой и домашним обучением.

Фотографии, размещенные в Instagram, где Александра может похвастаться более чем 75 000 подписчиков, показывают деревенскую семейную кухню, спальни со скошенными потолками и коваными железными кроватями, а также характерную гостиную с ревущим огнем.

В отличие от некоторых инфлюенсеров, Александра, происходящая из длинной русской дворянской семьи, не чурается фотографировать реалии семейной жизни и с удовольствием публикует фотографии кучи белья, захламленных столешниц и обеденного стола, заваленного домашними заданиями.

Титул Александры происходит от ее прапрадеда, прадеда ее отца, Павла Толстого-Милославского, который был назван графом за свои услуги в качестве камергера последнего императора Николая II сразу после Первой мировой войны.

57-летнего Пугачева когда-то называли «кремлевским банкиром», и он был близок к Владимиру Путину, пока не впал в немилость. Теперь российский президент считает его «предателем».

После прибытия в Великобританию в 2011 году его обвинили в выкачивании состояния из его финансового дома Межпромбанк. Государственные кредиторы в Москве преследовали его в британских судах, утверждая, что он присвоил сотни миллионов.

Олигарх бежал во Францию, где и остается, и был приговорен к двум годам заочно судьей Высокого суда в 2016 году за нарушение судебных постановлений, касающихся якобы украденных сотен миллионов наличных денег.

Повседневная жизнь за городом! Графиня Александра Толстая предложила заглянуть в уютный коттедж в Оксфордшире, где она проводит изоляцию со своими тремя детьми.Ее бывший — российский миллиардер Сергей Пугачев, 57 лет, который живет в изгнании

Аристократическая красавица, которая делит детей Алешу, Ивана и Марию с финансистом Сергеем Пугачевым, сменила городскую жизнь на более спокойные дни, наполненные загородными прогулками, выпечкой и домашним обучением. На фото внешний вид дома

Семейная жизнь: мать троих детей Александра демонстрирует освежающе обычную кухню с захламленными столешницами

Старомодное благо: дочь Александры, Мария, устроилась в постели в одной из трех спален наверху в собственности

Организованный хаос: В отличие от некоторых инфлюенсеров, Александра не стесняется запечатлеть на своих фотографиях груды белья

Личные сокровища: Дом украшен десятками украшений и мягкой мебелью из узорчатых тканей

У Александры трое детей от 57-летнего Сергея Пугачева, которого когда-то называли «кремлевским банкиром» и который был близок к Владимиру Путину, прежде чем впал в немилость. Теперь российский президент считает его «предателем». На снимке пара вместе

Пугачев отрезал Александру и их детей в финансовом отношении, утверждает она, и семья была выселена из семейного особняка Пугачева на юге Лондона стоимостью 12 миллионов фунтов стерлингов в разгар пандемии после того, как, как сообщается, российские власти уведомили об этом всего за 12 дней. Правительство, которое изъяло имущество.

Насколько известно, Александра с тех пор переехала в другой дом в Лондоне, но решила провести время в своем идиллическом загородном доме, который она купила в 2004 году.

Кто такая Александра Толстая?

До знакомства с Сергеем Александра была замужем за нищим казаком по имени Шамиль Галимзянов. Пара познакомилась во время путешествия по Шелковому пути верхом в 1999 году. 

Толстой впервые встретил Сергея, тогдашнего российского сенатора и доверенного друга Путина, который расстался со своей женой, когда его попросили давать ему уроки английского, пока она жила в Москве. с Галимзяновым.

Через год они снова встретились на церемонии награждения, на которой присутствовал президент России.Через несколько месяцев Толстой и забеременела от Сергея. У них было трое детей — Алексей, известный как Алеша, Иван и Мария.

Александра — старшая из четырех детей англо-русского историка и писателя Николая Толстого. Она выросла в Оксфордшире, прежде чем поступить в Эдинбургский университет, чтобы изучать философию. Год перерыва она провела в России.

Когда-то Пугачев владел двумя крупными верфями, крупнейшим в мире рудником и крупными участками недвижимости в Москве и Санкт-Петербурге, а также Межпромбанком, соучредителем которого он был в 1990-х годах.

Пара познакомилась в 2008 году, когда Сергей нанял Александру, чтобы она помогла улучшить его английский, когда они оба жили в России, где Сергей когда-то дружил с Путиным.

Говоря об их отношениях в документальном фильме, вышедшем в эфир в прошлом году, Александра сказала: «Когда я встретила Сергея, это было наэлектризовано. Это было удивительно. Я так влюбилась в него. Я никогда не чувствовал такой связи с кем-либо».

В течение года знакомства у них родился ребенок и еще один в пути, и они жили роскошной жизнью в Лондоне, Москве и Париже.

Александра сказала: «Это было невероятно, он давал мне свою кредитную карту, и я ходила по магазинам, у меня был частный самолет. Мне просто нужно было собрать чемодан, и я мог идти».

Семья переезжала из одного дома в другой, включая семейный дом стоимостью 12 миллионов фунтов стерлингов в Баттерси, загородное поместье площадью 200 акров в Хартфордшире и виллу на берегу моря стоимостью 40 миллионов фунтов стерлингов в Сент-Бартсе.

Но в 2008 году у банка Сергея возникли проблемы, и российский банк выручил его, предоставив кредит в 1 миллиард долларов.

Сергей, покинувший Россию в 2011 году, утверждает, что после охлаждения отношений между ним и Путиным Кремль попытался захватить или разрушить его бизнес-империю.

Затем русские обвинили его в получении прибыли от огромных сумм денег налогоплательщиков, переданных Межпромбанку российским центральным банком в разгар экономического кризиса 2008 года.

Российские власти заморозили его активы, объявили в розыск Интерпола и добились судебного решения в Великобритании, обязывающего его сдать паспорта.

Графиня Александра Толстая ранее рассказала, что плакала, когда ее выселили из ее многомиллионного лондонского дома с тремя детьми (на фото) с роскошным текстилем

Многозадачность: как и многие родители, Александра совмещает свою работу с домашним обучением своих детей за кухонным столом Снимок Instagram

Тихая ночь в: Гостиная может похвастаться большим открытым камином, низкими потолками и полной характером

КТО ТАКОЙ СЕРГЕЙ ПУГАЧЕВ?

Сергею Пугачеву когда-то принадлежали две крупные верфи, крупнейший в мире рудник и большие участки недвижимости в Москве и Санкт-Петербурге, а также Межпромбанк, соучредителем которого он был в 1990-х годах.

У него были близкие отношения с Владимиром Путиным, и в 2008 году, когда у банка Сергея возникли проблемы, российское государство выручило его, предоставив кредит в 1 миллиард долларов.

Сергей накопил огромное состояние благодаря своим компаниям и вел роскошный образ жизни, прежде чем стать врагом российского государства

Сергей, покинувший Россию в 2011 году, утверждает, что отношения между ним и Путиным охладились из-за его отношений с российским лидером назвав его «предателем» за то, что он встречается с «англичанкой» Александрой, Кремль пытался захватить или разрушить его бизнес-империю.

Затем русские обвинили его в получении прибыли от огромных сумм денег налогоплательщиков, переданных Межпромбанку российским центральным банком в разгар экономического кризиса 2008 года.

С тех пор он преследует Сергея Пугачева через Высокий суд, утверждая, что он незаконно выкачивал сотни миллионов фунтов из государственной помощи Межпромбанку.

Власти заморозили его активы, объявили его в розыск Интерпола и добились судебного решения в Великобритании, принуждающего его сдать паспорта.

К 2015 году он делил свое время между Францией и семейным домом в Лондоне и считался третьим в расстрельном списке Кремля.

Г-н Пугачев отрицает обвинения и утверждает, что Москва пытается украсть его активы на сумму 11 миллиардов фунтов стерлингов, включая две верфи и крупнейший в мире рудник.

Ранее он был признан виновным в неуважении к суду, и ему грозит два года тюремного заключения, если он вернется в эту страну.

Последние пять лет он жил во Франции после того, как в 2014 году ему приказали сдать паспорта.

В Ницце его посетили представители АСВ, которые потребовали вернуть долг в миллиард долларов и угрожали его семье, говоря, что они могут «отрезать палец его сыну и вернуть его ему».

Он также утверждает, что в Великобритании на его жизнь были совершены «заслуживающие доверия покушения».

Магнат ведет очередную судебную тяжбу с Россией в Гааге, где он судится с Федерацией на 11 миллиардов фунтов стерлингов.

Он утверждает, что его преследуют из-за того, что он знает государственную тайну.

Сергей сказал, что у него была «очень близкая» дружба с президентом России Владимиром Путиным, прежде чем он поссорился, когда политик назвал Сергея «предателем» за то, что он встречался с «англичанкой». спит, в то время как семья находится в сельской местности Оксфордшира

Быть занятым! Александра пробует свои силы в выпечке на карантине на одной из фотографий, опубликованных в ее аккаунте в Instagram. обувь и верхняя одежда для прогулок по окрестностям 

К 2015 году он делил свое время между Францией и семейным домом в Лондоне и претендовал на третье место в расстрельном списке Кремля.

Государственные кредиторы в Москве преследовали его в британских судах, утверждая, что он присвоил сотни миллионов.

Пугачев бежал во Францию ​​до решения Высокого суда 2016 года по делу, возбужденному Российским агентством по страхованию вкладов, в котором он был осужден за 12 нарушений судебных постановлений, связанных с постановлением о замораживании, наложенным на него в связи с попытками вернуть наличные.

В решении Высокого суда от февраля 2016 года не было вынесено никакого решения по обвинениям в хищении денежных средств, и Пугачев заявил суду, что он «не украл никаких денег». В своем решении о заключении его в тюрьму г-жа судья Роуз отметила, что он «действительно опасается, что его жизнь находится в опасности со стороны агентов российского государства».

Анн-Джессика Фор, адвокат г-на Пугачева, заявила, что судебного решения, устанавливающего финансовые правонарушения с его стороны, не поступало.

По распоряжению Верховного суда семейный дом был выставлен на продажу, и Александра заключила сделку с российским правительством, чтобы отказаться от претензий на его состояние.

Алекс ранее поделилась в Instagram фотографиями своего любимого лондонского дома, который опустошает упаковочная компания, и увидела груды коробок на кухне и в гостиной.

Александра поделилась этой фотографией элегантной гостиной дома, сказав что она пыталась наслаждаться каждой последней минутой, оставшейся в ее доме (слева).Графиня за работой за своим столом, выступает перед учениками в своей альма-матер Даун-Хаус (справа)

Александра поделилась фотографиями уборки своих комнат до и после и призналась, что это «так странно»

Александра сидит в Уголок для чтения многомиллионной собственности в Южном Лондоне в именной футболке

Александра выставила на продажу вертикальное пианино Yamaha, на котором тренируются ее дети. Снимок, опубликованный в Instagram, показал стены, украшенные изображением таксидермических бабочек и симпатичных деревянных фигурок, сидящих сверху (слева). Режим расхламления! Александра убрала игровую комнату за три недели до того, как ей пришлось переехать, сказав, что она полна решимости иметь чистое место для их последних дней в доме (справа)

Александра поделилась задумчивой фотографией груды коробок в своем доме с потрясенным лицо

ОАО «Международный Промышленный Банк и Анор в Пугачев и Орс» | [2017] EWHC 1972 (Ch) | Высокий суд Англии и Уэльса (канцелярия) | решение | Закон

МИСТЕР СУДЬЯ БИРСС:

1.Это еще один аспект общего дела, которым я занимаюсь в последнее время, по иску Межпромбанка, предъявленного, в том числе, Сергею Пугачеву, бывшему, кажется, владельцу банка. Среди других сторон — его малолетние дети от их матери Александры Толстой, которая представляет их как своего друга по судебным тяжбам.

2. Дело, которым я занимаюсь, было описано как Претензия о трастах, потому что вопрос, который необходимо решить, по сути, касается действительности некоторых новозеландских трастов, которые в конечном итоге учредил г-н Пугачев. Это дискреционные трасты, трое детей которых являются, по крайней мере, некоторыми дискреционными бенефициарами. То, что я сказал в качестве резюме, не наносит ущерба многим подробным аргументам, возникающим в связи с иском о трастах.

3. Суд начался. После его начала г-н Пугачев, который до сих пор не играл никакой роли в этом аспекте судебного разбирательства, хотя он был вовлечен во многие другие аспекты общего спора, который рассматривался судами в этой юрисдикции и других странах, проинструктировал солиситоров и адвокатов. появиться, чтобы подать то, что превратилось в два заявления в суд.

4. Наиболее важным является первый, это заявление об отложении судебного разбирательства. Вторым было заявление об отмене заочного решения, вынесенного судьей Генри Карром около года назад.

5. Основа обоих приложений была одинаковой. От имени г-на Сергея Пугачева следует отметить, что суд не имел юрисдикции в отношении него, поскольку не было подано ходатайство о разрешении на рассмотрение дела за пределами юрисдикции в соответствующее время, и не было дано разрешение на вручение Пугачев вне юрисдикции. В это время он находился во Франции.

6. В день поступления заявлений в суд, по сути без уведомления, я решил, что разобраться с ними тут же не представляется возможным. Я прервал их на пару дней для более упорядоченной беседы с адвокатом г-на Пугачева и адвокатом по делу. Это произошло, и в конце концов я решил, что заявки будут рассмотрены сегодня, 26 июля, но к этому приказу были приложены условия.

7. Условия заключались в том, что г-н Пугачев (1) перечислит на клиентский счет своих адвокатов сумму, по существу являющуюся обеспечением расходов истцов и ответчиков с 12-го по 14-й в связи с этими заявлениями, и (2 ) предоставит письменные показания с указанием источника финансирования его судебных расходов в этой юрисдикции.

8. Предысторией второго аспекта было то, что в отношении г-на Пугачева действует всемирный приказ о замораживании, который включает положения, предусматривающие, что если он должен потратить деньги на судебные издержки, он должен раскрыть источник этого финансирования.

9. Другим важным аспектом решения, которое я дал по этому заявлению, которое, должно быть, было сделано 12 или 13 июля, было то, что заявления были подкреплены свидетельскими показаниями г-на Дженкинса из Хьюманса, адвокатов г-на Пугачева.Это объясняет, что на основании инструкций, полученных г-ном Дженкинсом, г-н Пугачев узнал об этом иске о доверительном управлении только в последние несколько недель или, возможно, месяц или около того; Кажется, была упомянута дата мая 2017 года. Важность этих доказательств заключалась в том, чтобы оправдать крайнюю задержку с подачей заявлений.

10. В решении, которое я вынес 13 июля, я обнаружил, что, основываясь на представленных мне доказательствах, были веские доводы в пользу того, что инструкции, которые г-н Пугачев дал своим адвокатам, были нечестными, естественные выводы заключались в том, что они были ложными и были сделаны для того, чтобы, среди прочего, попытаться сорвать это разбирательство.Это произошло потому, что имелись явные доказательства того, что г-н Пугачев и те, кто с ним работал, были полностью уведомлены об этих разбирательствах более чем за год до этого, в том числе признание заслуг Натальей Дозорцевой, что произошло в июне 2016 года. Г-жа Дозорцева была одной из люди, инструктирующие Хьюманса от имени г-на Пугачева.

11. Следующее, что произошло с моей точки зрения, это то, что вчера я обнаружил, что не получил никаких комплектов слуховых аппаратов для этих заявлений. Мой секретарь связался с адвокатами г-на Пугачева, чтобы узнать, почему, и обнаружил, что адвокаты г-на Пугачева, то есть Хьюманс и адвокат, были перед Норрисом Дж. в апелляционном суде.

12. Совершенно верно, больше я об этом ничего не знал. Больше мне об этом никто ничего не сказал. Я мог или не мог сделать различные выводы о том, что, по моему мнению, могло происходить, но важным аспектом того, как ведется наше разбирательство, является то, что солиситоры и адвокаты могут подавать заявления такого рода другому судье в соответствующих обстоятельствах. .

13. Ночью мне сообщили, что г-н Самек, который был ведущим адвокатом, представлявшим г-на Пугачева, а также его младший адвокат и Хьюманс, сегодня не будут представлять г-на Пугачева по заявлениям.

14. Я также получил базовый аргумент, касающийся заявлений от г-на Аккуха для Межпромбанка, в котором излагались пункты по существу. Я вообще не оцениваю достоинства ходатайства о юрисдикции, но замечу, что скелет г-на Аккуха включает в себя доводы, которые, по крайней мере, излагают на первый взгляд то, что может быть вполне заслуживающим доверия доводом, почему ходатайство г-на Пугачева о юрисдикции не является надлежащим. основан. Таким образом, дело вовсе не в том, что все достоинства ходатайства г-на Пугачева о юрисдикции сводятся в его пользу.

15. Но основной аргумент г-на Аккуха также сообщил мне, что, хотя г-н Пугачев перечислил деньги на счет клиента Хьюманса, как того требовало постановление, истцы утверждали, что он не представил письменных показаний об источнике средств и, следовательно, был в нарушение приказа. Таким образом, представление заявителей заключалось в том, что эти заявления должны быть признаны недействующими на основании постановления, которое я издал 13 июля.

Прямое сообщение от г-на Пугачева

16.Следующее, что произошло, это то, что ночью я получил электронные письма непосредственно от г-на Пугачева, которые включали различные документы. Эти документы включали письмо ко мне от самого г-на Пугачева, свидетельские показания г-на Пугачева, касающиеся этих вопросов, и копию письма французского нотариуса с переводом с французского на английский язык, а также нотариально заверенную копию аффидевита, в котором излагается , или намеревается указать источник финансирования в соответствии с моим распоряжением.

17.Когда сегодня утром было назначено слушание, у меня не было возможности ознакомиться с материалами, кроме беглого беглого просмотра. Я сообщил сторонам, что отложу рассмотрение дела примерно на час, чтобы попытаться переварить материал г-на Пугачева и решить, что с ним делать. Мне также нужно было время, чтобы переварить некоторые дополнительные материалы, которые стороны разумно представили в отношении слушания. Поэтому слушание было отложено до 14:00.

18. Затем я смог прочитать материал г-на Пугачева и увидел, что в нем он по существу выдвигает следующие доводы.Он говорит, что пытался выполнить сделанное мной распоряжение, чтобы предоставить доказательства, указывающие на источник средств, но его объяснение, почему это не произошло вовремя, или, по крайней мере, не произошло в течение очень короткого времени срока, который был заказан, должен быть возложен на дверь его британских поверенных, Хьюманса. Мне не нужно вдаваться в подробности, но это, по сути, то, что делает г-н Пугачев.

19. Также справедливо сказать, что, когда я читал материалы г-на Пугачева, он, кажется, предположил, что я прочитал свидетельские показания его бывшего адвоката, г-на Дженкинса, которые на самом деле были свидетельскими показаниями, которые использовал Хьюманс. по их заявлению перед г-ном судьей Норрисом о снятии протокола.Именно это произошло вчера перед судьей Норрисом. Я должен сказать, что г-н судья Норрис удовлетворил ходатайство и сделал заявление о том, что Хьюманс и адвокат больше не получают указаний от г-на Пугачева. Я не читал и не видел этого свидетельского показания.

20. Некоторые материалы в материалах г-на Пугачева включали, как я уже сказал, ссылки на эти показания, и мне действительно казалось, что, по крайней мере, возможно, что часть того, что он дал мне, была привилегированным материалом, хотя ничего очень неожиданно сказано.

21. Тем не менее, я решил, что на этом этапе правильным будет предоставить копии материалов, которые были отправлены мне юристам, действующим от имени истцов, то есть британским юристам, Hogan Lovells London и их адвокату, а также г-ну Малеку, королевскому адвокату, адвокату подсудимых с 12-го по 14-й, и их адвокатам. В настоящее время все это будет основываться на клубе конфиденциальности, ограничивающем распространение этого материала и его использование, так что он должен находиться только у британских адвокатов и адвокатов.

22. Должен сказать, что в присланных мне материалах г-н Пугачев просил распространять материал только на этом основании. В своих материалах он просил меня учредить такой клуб конфиденциальности, говорит, что раскрытие источников средств поставило бы этих людей под угрозу со стороны российского государства.

23. Здесь я ссылаюсь на вывод Роуз Дж. в ее решении относительно неуважения г-на Пугачева к суду и приговора к максимальному сроку лишения свободы за неуважение к суду, согласно которому страх г-на Пугачева перед риском насилия действительно его.Это помещает в контекст его замечания мне о страхе перед насилием.

24. Часто случается так, что истец лично пишет прямо в суд и не копирует свое сообщение другой стороне. Часто суд выявляет, что в общении тяжущиеся стороны говорили вещи, которые выглядят так, как будто они являются потенциально привилегированным материалом. Суд очень часто принимает прагматичный и соразмерный курс, связываясь с тяжущейся стороной лично и предлагая им повторно представить свои материалы в форме, которую тяжущая сторона принимает, будет предоставлено их противнику, потому что суд не готов действовать на основе материал иначе.

25. Это курс, который проводится с неискушенными тяжущимися лично. Я брал себя в прошлом, особенно в Патентном суде округа / Суде по делам предприятий интеллектуальной собственности. Однако г-на Пугачева нельзя назвать бесхитростным участником судебного процесса. Он явно хотел, чтобы я принял материал во внимание. Поэтому я решил, имея в виду главную цель и тот факт, что его оппоненты не видели этого материала, правильным будет предоставить его им на этой ограниченной основе, что я и сделал сегодня около 2 часов.

Сообщение от французского адвоката г-на Пугачева

26. Кроме того, сегодня утром я получил сообщение от французского адвоката г-на Пугачева, г-жи Фор, в которой говорилось, что она желает прислать мне дополнительные материалы от имени г-на Пугачева. После того, как пришло это сообщение, я решил отложить предоставление материала, который я получил от г-на Пугачева, непосредственно сторонам, пока я не увижу, что хотела сказать г-жа Форе, на случай, если она что-нибудь скажет по этому поводу.

27. Материалы, предоставленные г-жой Форе, прибыли примерно без 5 минут 2 часа.В нем ничего не сказано о непредоставлении материала, который г-н Пугачев предоставил напрямую, другим сторонам в этом деле. Вместо этого он содержит дополнительные материалы, которые, насколько я могу судить по тому очень короткому времени, которое мне пришлось его просмотреть, предназначены для поддержки жалоб г-на Пугачева на поведение адвокатов Хьюманса.

28. Мне еще предстоит решить, необходимо или уместно ли взять этот материал и предоставить его истцам и их адвокатам или ответчикам с 12-го по 14-й и их адвокатам.На первый взгляд кажется, что материал французского юриста действительно не имеет отношения ни к одному из вопросов, которые мне предстоит решить.

Г-н Пугачев нуждается в надлежащем совете от британского адвоката

29. В этом месте я упомяну заявление, сделанное г-ном Малеком в ходе сегодняшних дневных слушаний, с которым я полностью согласен. То есть г-ну Пугачеву необходимо получить надлежащую консультацию у квалифицированных юристов Великобритании. Я не критикую его французских юристов, но английская правовая система и французская правовая система не одно и то же, и я подозреваю, что г-н Пугачев поступил бы намного лучше, если бы у него были советы британских юристов относительно того, что ему нужно делать.Может быть, с точки зрения французского юриста, отправить материалы, которые они прислали мне, в том виде, в котором они это делают, не является чем-то таким необычным, как в английском суде.

Что делать?

30. Вопрос, что делать. Г-н Аккух, выступающий от имени истцов, делает четыре заявления о том, что мне следует делать сегодня днем. По сути, доводы г-на Малека были направлены на то, чтобы помочь суду, и он позаботился о том, чтобы, по моему мнению, не обязательно возражать против конкретных моментов, высказанных г-ном Аккухом, а представить суду вопросы, которые необходимо было принять во внимание, и в целом предоставить помощь.

31. Первое заявление г-на Аккоуха состоит в том, что в материалах, которые теперь были предоставлены адвокатам и адвокатам заявителей, содержатся самые разнообразные утверждения, которые, по мнению его клиентов, являются полностью ложными и непристойными. Поэтому он утверждает, что я должен расширить сферу деятельности любого клуба конфиденциальности или вообще снять любые ограничения конфиденциальности, по крайней мере, на некоторые материалы, предоставленные мне г-ном Пугачевым. Основная причина этого, по его словам, заключается в том, что есть утверждения, которые непристойны и не соответствуют действительности, и его клиенты должны иметь возможность опровергнуть эти утверждения, что потребует от них получения инструкций.

32. Я не сомневаюсь, что в представленных мне материалах есть утверждения, которые клиенты г-на Аккуха назвали бы непристойными и ложными. Если они имеют отношение к чему-то, это будут вопросы, которые его клиенты будут иметь право опровергнуть, но мне не ясно, что только потому, что из этого не следует никаких сомнений, это обязательно правильно сделать на данном этапе в этом разбирательстве, ослабить этот режим конфиденциальности на данный момент.

33. Г-н Малек отметил, что, возможно, суду следует провести различие между письменными показаниями под присягой в соответствии с моим приказом, который может рассматриваться как нечто, не являющееся конфиденциальным, и другими материалами.

34. Я вижу силу в представлении г-на Малека, но я также вижу силу в другом представлении г-на Малека. Это последнее замечание г-на Малека, которое нашло отклик у меня, состоит в том, что в обстоятельствах, когда тяжущаяся сторона только что перестала быть представлена ​​британскими юристами, важно, чтобы поговорка о том, что правосудие должно не просто вершиться, но должно быть замечено быть сделано, имеет значение. В этот момент суду не следует действовать поспешно, что истец может ошибочно истолковать как не уделение должного внимания вопросам, которые он пытается поставить передо мной.

35. Вернусь к режиму конфиденциальности.

36. Следующее заявление, сделанное г-ном Аккухом, заключается в том, что я должен сейчас же издать приказ в соответствии с CPR PD 5A — Часть 5 и Практической инструкцией, касающейся доступа к судебным документам, разрешая его клиентам доступ к свидетельским показаниям г-на Дженкинса. который был вчера перед судьей Норрисом.

37. Я вполне удовлетворен тем, что не должен делать этот заказ на данном этапе. Г-н Аккух и его команда делали мне замечания относительно того, почему я должен отдать этот приказ сегодня в любом случае, до того, как увидел материалы от г-на Пугачева.Однако в любом случае передо мной не было заявки, чтобы сделать этот заказ. Я говорю это не в качестве критики, учитывая скорость, с которой развивались события. Однако это приложение поднимает некоторые важные вопросы. Заявление такого рода требует надлежащего рассмотрения, и я не в состоянии заниматься им сейчас.

38. Как указал г-н Малек, заявление солиситора о выдаче приказа о том, что он перестал быть солиситором или прекратил регистрацию, является одним из моментов, на которые особо обращается внимание в PD 5A, параграф 4.2А как исключение из общего перечня документов, которые сторона судебного разбирательства может получить из материалов дела. Это, очевидно, так из-за потенциально привилегированного или иным образом откровенного характера того, что солиситор может пожелать сказать суду, чтобы суд сделал заявление такого рода.

39. Я не пытаюсь нанести ущерб заявлению истцов, если они хотят его продолжить. Но сейчас не время отдавать такой приказ без дальнейшего рассмотрения.Возможность, которую я рассматривал, и я скажу не более чем как возможность, заключается в том, что даже если г-н Пугачев не желает отвечать на заявление такого рода или делать замечания по этому поводу, может случиться так, что сами Хьюманы пожелают представить материалы в ответ на это заявление.

40. Поскольку никто не имел возможности ответить на него, я совершенно уверен, что было бы в принципе неправильно с моей стороны издавать приказ, требующий, чтобы эти свидетельские показания были представлены клиентам г-на Аккоу.Я знаю, что они очень хотели бы увидеть, что в нем. Это, в частности, потому, что они подозревают, и они могут быть правы, а могут и ошибаться, но, безусловно, есть заслуживающий доверия случай, что он может содержать доказательства об источнике средств, доступных г-ну Пугачеву. Это имеет большое значение для заявителей, принимая во внимание всемирный порядок замораживания и все обстоятельства. Я признаю это, но это не является основанием для принятия такого приказа на данном этапе разбирательства.

41. Другой вопрос, с которым меня просят разобраться, заключается в том, чтобы заявить, что г-н Пугачев нарушает постановление от 13 июля на том основании, что он не выполнил пункт 3. Г-н Акку утверждает, что я должен сделать это заявление, но в то же время обеспечить, чтобы это не наносило ущерба любому заявлению об освобождении от санкции. Кроме того, я должен установить срок для любого ходатайства г-на Пугачева об освобождении от санкции.

42. Во многих отношениях это экстраординарный набор процедур.Одним из необычных аспектов является то, что г-н Пугачев, с одной стороны, явно очень искушенный человек, у которого есть все необходимое для того, чтобы обучать юристов и получать юридические консультации. С другой стороны, иногда г-н Пугачев действует как истец лично и делает то, что часто делают наивные истцы лично. Я имею в виду еще одну общую черту некоторых сторон в процессе: они пытаются манипулировать событиями, инструктируя и деинструктируя своих адвокатов, но, несмотря на все сложности в этом деле, я не верю, что выход Хьюманса из печати был спланирован г-ном Пугачевым. в его пользу.

43. Общим при личном общении с тяжущимися сторонами является то, что суд должен интерпретировать действия, которые тяжущиеся стороны совершают лично, и которые не совсем то, что сделал бы квалифицированный юрист. Я не пытаюсь быть эллиптическим. Я говорю о том, как мне интерпретировать те материалы, которые мне уже прислал господин Пугачев. Его можно интерпретировать как попытку выполнить приказ, изложенный в пункте 3, и, по сути, не что иное, как ходатайство о продлении срока, или можно интерпретировать его как ходатайство об освобождении от санкции.В любом случае на самом деле происходит то, что г-н Пугачев явно пытается общаться с судом и считает эти заявления важными.

44. Тем не менее, что поразительно в материалах г-на Пугачева, так это то, что ни один из них не делает никаких попыток опровергнуть замечание, которое я сделал в своем решении от 13 июля, о том, что доказательства в поддержку этого заявления, которые г-н Пугачев имел только что стало известно о трастовом требовании было не просто ложным, а нечестным. Это имеет отношение к тому, что я должен делать сейчас.

45. По моему мнению, я не должен позволять этому аспекту спора занимать какое-либо дополнительное время между настоящим моментом и окончанием Доверительного Суда. Совершенно ясно — и у г-на Пугачева теперь была полная возможность, если он пожелает сделать это, представить мне материалы, чтобы опровергнуть это, — что г-н Пугачев знал об этом Доверительном суде в течение очень значительного периода времени и мог, если бы он пожелал, предпринял шаги намного раньше, чтобы каким-либо образом вмешаться или подать заявление об отсрочке или что-либо еще.

46.Это означает, что сегодня я больше не должен тратить время на эти приложения. Вопрос в том, что мне делать с выполнением приказа от 13 июля. Я не убежден, что должен просто заявить, что г-н Пугачев нарушает приказ. Ясно, что приказ не был выполнен в течение предусмотренного им срока, но также ясно, что от имени г-на Пугачева можно многое сказать о том, почему письменные показания под присягой не были вручены в это время. Я не могу предсказать, что суд сделал бы в этих обстоятельствах.

47. Соответственно, то, что я собираюсь сделать, это отложить оба заявления со свободой обращения к любому причастному, то есть, включая г-на Пугачева, других ответчиков, истцов, Хьюманов, и я не могу думать ни о ком другом, но если они хотят прийти в суд и объяснить, почему нужно сделать что-то еще, они имеют на это разрешение.

48. Отсрочка окончена до вынесения моего решения по тресту. Очевидно, что предстоит многое сделать для этой передачи, но мне кажется, что это лучший способ справиться с этим.Если г-н Пугачев считает, в конечном счете, что он был предубежден тем фактом, что его жалобы не были разрешены до окончания судебного разбирательства по делу о доверительном управлении, то, как я уже сказал, объяснение этому состоит в том, что я удовлетворен доказательствами, насколько это возможно. , а г-н Пугачев теперь имел возможность опровергнуть это, и он этого не сделал, что он знал об этом Доверительном суде вполне достаточное время, благодаря чему он мог бы сделать заявления такого рода гораздо раньше.

49. Но это значит, что я не исключаю господина Пугачева.У него будет возможность так или иначе сказать мне то, что он хочет сказать по поводу этих приложений. Возможно, в конечном итоге часть или все из них увенчаются успехом. Я не буду заявлять, что он нарушает приказ, и я не собираюсь предрешать, правильно ли смотреть на это как на запоздалое продление срока или как ходатайство об освобождении от санкции.

50. Мне кажется, что, принимая во внимание, что, по крайней мере, вчера около 17:00 г-н Пугачев был истцом лично, и я думаю, около 11 часов, он тогда использовал французских адвокатов для подачи своих заявлений. перед этим судом, это правильный и справедливый способ разбирательства.Я это делаю, наверное, повторяюсь, чтобы подчеркнуть, что в этом суде важно, чтобы даже такой человек, как г-н Пугачев, который является нечистым современником, был бы выслушан, если он сделает соответствующие заявления и будет вести себя должным образом в этом процессе. .

51. Это подводит меня к вопросу, что делать с клубом конфиденциальности. Я не убежден, что на данном этапе я должен ослабить положения о конфиденциальности. Мне кажется, что предоставленный материал относится к этим заявлениям, и нет веской причины, по которой — по крайней мере, не имея возможности услышать какие-либо представления от кого-либо еще — я должен ослабить этот клуб конфиденциальности.Я говорю это, в частности, имея в виду, что г-н Пугачев попросил меня произвести этот материал с такими ограничениями.

52. Можно подумать, что суд слишком мягок по отношению к тому, кто является нечистым нарушителем неуважения к суду и, похоже, относится к этим разбирательствам и юрисдикции суда лишь с пренебрежением. Тем не менее, даже если это уместный взгляд на г-на Пугачева, он по-прежнему имеет право на надлежащее судебное разбирательство. Как я уже говорил, Роуз Дж. признал, что его страх был искренним убеждением с его стороны, но было ли оно обоснованным, это другой вопрос.Однако при таких обстоятельствах, поскольку я не знаю, почему мне необходимо срочно решить какой-либо вопрос клуба конфиденциальности, я не должен делать этого на данном этапе, не имея возможности выслушать г-на Пугачева.

53. Это мое мнение.

химерная желтая лихорадка 17D-зика Вирус (Chimerivax-Zika) как живой ослабленный вирус Vika Vaccine

, ^# , ^# , ^{# 1} , ¹ , ² , ² , ^{1, 4} , ^1, , ⁵ , ⁵ , ¹ , ² , ¹ , ¹ , ² , ¹ , ² , ³ и ¹

Марианн Гил-Молони

¹ Санофи Пастер Исследования и разработки, Кембридж, Массачусетс, США

Ана П.Goncalvez

¹ Санофи Пастера Исследования и разработки, Кембридж, MA USA

John Catalan

John Catalan

¹ Sanofi Pasteur Исследования и разработки, Кембридж, MA USA

Valerie Lecouturier

² Sanofi Pasteur Research & Development, Марси-л’Этуаль, Франция

Ив Жирер-Шамба

² Санофи Пастер Исследования и разработки, Марси-л’Этуаль, Франция

Фернандо Диас

¹ Санофи Исследования и разработки, Кембридж MA & Pasteur Research, США

⁴ Текущий адрес: VL46 Inc. , Cambridge, MA USA

Francisco Maldonado-Arocho

¹ Sanofi Pasteur Research & Development, Cambridge, MA USA

⁵ Текущий адрес: Kanyos Bio, Cambridge, MA USA

4 Raul C. Gomila 90 50004 90 Raul C. Gomila 90 1

Санофи Пастер, отдел исследований и разработок, Кембридж, Массачусетс, США

Мари-Клотильда Бернар

² Санофи Пастер, отдел исследований и разработок, Марси-Л’Этуаль, Франция

Рэй Оомен

^{6 Санофи Пастер, отдел исследований и разработок 1 9 , Кембридж, Массачусетс, США}

Саймон Делагрейв

¹ Санофи Пастер, отдел исследований и разработок, Кембридж, Массачусетс, США

Николя Бурден

² Санофи Пастер, отдел исследований и разработок, Марси-л’Этуаль, 9004 Коль 0003, Франция

¹ Санофи Пастер Исследования и разработки, Кембридж, Массачусетс, США

Николас Джексон

² Санофи Пастер Резе Arch & Development, Марси-л’Этуаль, Франция

Jon Heinrichs

³ Sanofi Pasteur Research & Development, Свифтуотер, Пенсильвания, США

Константин В.

Pugachev

¹ Санофи Пастер, отдел исследований и разработок, Кембридж, Массачусетс, США

¹ Санофи Пастер, отдел исследований и разработок, Кембридж, Массачусетс, США

² Санофи Пастер, отдел исследований и разработок, Франция, Марсили-л’Этуа, 3 9000

³ Sanofi Pasteur Research & Development, Swiftwater, PA USA

⁴ Текущий адрес: VL46 Inc., Cambridge, MA USA

⁵ Текущий адрес: Kanyos Bio, Cambridge, MA USA

905 authording .

^# Внесли поровну.

Поступила в редакцию 18 июня 2018 г .; Принято 17 августа 2018 г.

Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International License, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или в любом формате при условии, что вы укажете оригинал. автор(ы) и источник, предоставьте ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной строке материала.Если материал не включен в лицензию Creative Commons статьи, а ваше предполагаемое использование не разрешено законом или превышает разрешенное использование, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Вирус Зика (ZIKV) представляет собой новый переносимый комарами патоген, представляющий глобальную проблему для здравоохранения. Это было связано с микроцефалией плода и другими врожденными дефектами и неврологическими расстройствами у взрослых.Санофи Пастер занимается разработкой инактивированной вакцины ZIKV, а также живой химерной вакцины-кандидата ChimeriVax-Zika (CYZ), которая может стать предпочтительной вакциной в зависимости от будущей эпидемиологии ZIKV. В этом отчете основное внимание уделяется кандидату CYZ, который был сконструирован путем замены генов премембраны и оболочки (prM-E) в геноме живого аттенуированного вакцинного вируса желтой лихорадки 17D (YF 17D) генами из ZIKV с получением жизнеспособного химерного вируса CYZ. Скорость репликации CYZ в клеточном субстрате Vero повышали с помощью гибридной сигнальной последовательности YF 17D-ZIKV для белка prM.CYZ был сильно аттенуирован как у мышей, так и у человека в моделях in vitro (нейробластома человека и клетки-предшественники нейронов), без необходимости дополнительных аттенуирующих модификаций. Он показал значительно сниженную вирусную нагрузку в органах по сравнению с ZIKV дикого типа и полное отсутствие нейроинвазии после инокуляции иммунодефицитных мышей A129. Однократная доза CYZ вызывала высокие титры ZIKV-специфических нейтрализующих антител как у иммунокомпетентных мышей, так и у мышей A129, а также у животных, защищенных от заражения ZIKV.Данные показывают, что CYZ является многообещающим кандидатом на вакцину против ZIKV.

Введение

Вирус Зика (ZIKV) представляет собой флавивирус, передающийся преимущественно комарами Aedes spp. Генетически он принадлежит к группе флавивирусов спондвени, которая отличается от четырех основных серокомплексов флавивирусов: желтой лихорадки, японского энцефалита (ЯЭ), лихорадки денге и клещевого энцефалита (КЭ) ¹ . ZIKV был впервые выделен в Уганде в 1947 году от макаки-резус с лихорадкой и до 2007 года циркулировал только в Африке и Азии, при этом было очень мало описано случаев легкой болезни, похожей на лихорадку денге, у людей.Клинические проявления включали лихорадку, недомогание, головную боль, головокружение, анорексию, ретроорбитальную боль и пятнисто-папулезную кожную сыпь. Однако недавнее распространение вируса в Тихоокеанском регионе и Америке сопровождалось беспрецедентным увеличением скорости передачи и связывало инфекцию ZIKV с микроцефалией и другими врожденными дефектами у младенцев от матерей, инфицированных во время беременности, а также с неврологическими расстройствами у взрослых, в основном Синдром Гийена-Барре (СГБ) ² . Помимо передачи комарами, на которую приходится подавляющее большинство инфекций, хорошо задокументирована передача половым путем ³ .

Первая вспышка ZIKV за пределами Африки и Азии произошла в 2007 г. на острове Яп, Микронезия, когда было зарегистрировано 919 случаев (затронувших 18% населения острова) легкой формы заболевания. За этим последовала вспышка во Французской Полинезии в 2013–2014 гг., когда было зарегистрировано около 8 750 случаев симптоматической инфекции, в том числе 42 случая СГБ, сопровождавшихся энцефалитом, менингитом, парестезиями, лицевым параличом и/или миелитом. Бразилия сообщила о своем первом случае Зика в мае 2015 года, а пик вспышки пришелся на начало 2016 года, когда, по оценкам, был зарегистрирован 1 случай.3 миллиона случаев заболевания и примерно 3500 случаев с подозрением на микроцефалию, включая 46 случаев смерти в 20 штатах ⁴ . ZIKV впоследствии распространился на другие страны Латинской Америки и на юг континентальной части США. Несмотря на недавнее снижение числа случаев, ZIKV остается важным новым патогеном ⁵ .

Как и другие флавивирусы, ZIKV представляет собой небольшой (50 нм в диаметре) оболочечный РНК-вирус с положительной цепью ⁶ . Флавивирусные частицы содержат нуклеокапсид, состоящий из вирусной РНК и капсидного белка (С), окруженный липидной оболочкой, содержащей оболочечный гликопротеин (Е) и мембранный белок (М).Геномная РНК (длиной около 11 000 нуклеотидов) кодирует одну открытую рамку считывания (ORF), окруженную 5′- и 3′-нетранслируемыми областями (UTR). ORF транслируется в полипротеиновый предшественник, кодирующий три структурных белка (C, предшественник prM для зрелых M и E) и неструктурных (NS) белков NS1–NS5, необходимых для репликации вируса в цитоплазме инфицированных клеток. Полипротеин расщепляется клеточными и вирусными (NS2B/NS3) протеазами с образованием индивидуальных белков. Потомство вирионов отпочковывается в просвете эндоплазматического ретикулума (ЭР) и транспортируется на клеточную поверхность путем экзоцитоза ⁷ . Белок Е является основным иммуногеном, вырабатывающим нейтрализующие антитела, которые считаются основным коррелятом защитного иммунитета против флавивирусной инфекции. Вирусспецифический ответ цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) является другим ключевым признаком иммунитета. Множественные эпитопы CD8+ и CD4+ CTL были охарактеризованы в различных структурных и неструктурных белках флавивирусов ⁸ . Все задокументированные штаммы ZIKV представляют собой один серотип, поэтому вакцина на основе одного штамма должна быть эффективной против других циркулирующих штаммов.

Флавивирусные вакцины, которые использовались в течение десятилетий, представляют собой либо живые аттенуированные вакцины (LAV), полученные путем эмпирической аттенуации (вакцина 17D против желтой лихорадки и вакцина SA14-14-2 против ЯЭ), либо инактивированные вирусные вакцины (INV), доступные для ЯЭ и клещевого энцефалита ⁹ . INV требуют нескольких доз для прайминга, за которыми следуют периодические бустеры для поддержания иммунитета, в то время как основное преимущество LAV заключается в том, что им обычно требуется очень мало доз для получения стойкого защитного иммунитета без необходимости использования адъюванта. Например, YF 17D считается одним из самых сильных когда-либо разработанных иммуногенов, обеспечивающим защиту после однократной дозы, которая считается пожизненной. Он продемонстрировал безопасность для детей, начиная с 9-месячного возраста, и для взрослых, при этом серьезные побочные эффекты возникают крайне редко. Основываясь на теоретических опасениях, вакцинация ЖЛ 17D не рекомендуется во время беременности и кормления грудью, но, по данным ВОЗ, ее можно вводить во время эпидемий ЖЛ, связанных с высоким риском передачи инфекции.В прошлом было вакцинировано большое количество беременных женщин без каких-либо признаков неблагоприятного воздействия на плод ¹⁰ .

Санофи Пастер разработала новую химерную платформу LAV, ChimeriVax, предназначенную для вирусов денге, ЯЭ и Западного Нила (ЗН). Вакцины ChimeriVax-JE и -DEN в настоящее время являются лицензированными вакцинами для человека (IMOJEV™ и Dengvaxia®). Вакцины ChimeriVax создаются путем замены генов оболочечных белков prM-E в геноме YF 17D гетерологичными флавивирусными генами prM-E, что приводит к получению высокоаттенуированных и иммуногенных химерных вирусов с измененной антигенной специфичностью. Ряд исследований на животных и людях продемонстрировал безопасность и иммуногенность вакцин на основе ChimeriVax. Кроме того, подобно вирусу YF17D, который утратил способность передаваться комарами, вакцины ChimeriVax не передаются комарами-переносчиками ^{9 , 11 , 12} .

Для разработки эффективной вакцины против Зика используются различные стратегии, такие как INV, LAV, кандидаты на основе вирусных векторов, рекомбинантных белков и нуклеиновых кислот ^{5 , 13 – 17} .Поскольку вакцина против Зика должна быть безопасной для беременных женщин и их плода, в настоящее время предпочтительными являются подходы, не основанные на репликации вируса. Тем не менее, в зависимости от характеристик ЖАВ, а также будущей эпидемиологии ЗИКВ, ЖАВ может стать предпочтительнее, например, если будет доказана безопасность ЖАВ для беременных женщин или для всеобщей вакцинации детей до начала половой жизни для получения длительного иммунитета после однократная доза, аналогичная живой вакцине против краснухи. Здесь мы сконструировали кандидата ChimeriVax-Zika (CYZ), который эффективно реплицируется в клетках Vero (установленный субстрат для продукции LAV), и оценили его аттенуацию и тканевой тропизм по сравнению с ZIKV дикого типа (wt), а также его иммуногенность и защитную эффективность в как in vitro , так и мышиные модели.

Результаты

Конструирование кандидатов ChimeriVax-Zika (CYZ)

Вакцинные вирусы CYZ были сконструированы с использованием генной кассеты prM-E штамма ZIKV Французской Полинезии-2013, который был выбран на основе филогенетического анализа, демонстрирующего, что этот штамм принадлежит к азиатско-американской линии ZIKV ¹⁸ и потому, что его аминокислотная последовательность prM-E идентична недавним штаммам, выделенным в Бразилии (2015 г.), Гаити (2014 г.), Мартинике (2015 г.) и Пуэрто-Рико (2015 г.).Был создан вариант CYZ-yfs, который содержит гены ZIKV prM-E, встроенные в остов YF 17D таким же образом, как и в других ранее сконструированных вакцинных вирусах ChimeriVax ⁹ , между расщеплением сигналазой C/prM и E/NS1. места. Таким образом, сигнальная последовательность белка prM в этом вирусе происходит от YF 17D. Подобно вирусу YF 17D, вероятность расщепления в сайте сигналазы C/prM CYZ-yfs относительно низка, как определено с помощью программы SignalP3.0 ¹⁹ (http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-3.0) (рис. ). Было высказано предположение, что неэффективное расщепление сигналазой в сайте C/prM является предпосылкой эффективной репликации флавивирусов на основании исследований с использованием вирусов YF 17D и энцефалита долины Мюррей ^{20 – 22} . Интересно, что вероятность расщепления на этом участке ZIKV дикого типа оказалась значительно выше, чем у YF 17D (рис. ). Чтобы оценить, как увеличение предсказанной эффективности расщепления повлияет на репликацию химеры, был сконструирован вариант CYZ-hs, содержащий гибридный сигнал prM YF 17D/ZIKV, который увеличивал вероятность расщепления до уровня ZIKV (рис.). Неожиданно анализ кривой роста показал, что в то время как обе химеры эффективно реплицировались в клетках Vero, вариант CYZ-hs генерировал в несколько раз более высокие пиковые титры [≥8 log ₁₀ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/мл при множественности инфекции (MOI ) 0,01 и 0,001 БОЕ/клетку] по сравнению с CYZ-yfs (рис.  ). Оба варианта образовывали четкие бляшки, которые были больше, чем бляшки родителя YF 17D (рис. ), и было показано, что они генетически стабильны при секвенировании на пассажах P2 (исследовательские запасы) и P5.Контрольные химеры, обозначенные YF/Senegal-1894 и YF/Cambodia-2010, также были сконструированы с генами prM-E из африканских и азиатских штаммов ZIKV, Senegal-1984 (DAKAR 41519) и Cambodia-2010 (FSS 13025), содержащих YF 17D- специфическая сигнальная последовательность prM. Эти штаммы не связаны с недавними вспышками в Тихоокеанском регионе и Америке. Полученные химеры реплицировались так же эффективно, как CYZ-yfs в клетках Vero (данные не показаны).

CYZ-yfs и CYZ-hs (ведущие) кандидаты. ( A ) Расчетные показатели расщепления сигналазой с помощью SignalP3.0 для родительских вирусов, YF 17D и wt ZIKV, а также химер CYZ. ZIKV-специфические остатки выделены жирным шрифтом. Было сконструировано несколько дополнительных вариантов CYZ, содержащих дополнительные аттенуирующие генетические модификации, такие как варианты CYZ-dC (3-аминокислотная делеция в C) и CYZ-dg (дегликозилированный белок E) на основе CYZ-hs (подробности см. в тексте). ( B ) Морфология бляшек CY-yfs, CYZ-hs и родительского вируса YF 17D в клетках Vero. Бляшки окрашивали кристаллическим фиолетовым на 5-й день после заражения.( C ) Кривые роста вирусов CYZ-yfs и CYZ-hs в бессывороточной культуре клеток Vero при указанных MOI.

Поскольку профили аттенуации CYZ-yfs и CYZ-hs химерных вирусов были неизвестны, другие варианты CYZ также были сконструированы параллельно с дополнительными аттенуирующими модификациями, включая 3 аминокислотные замены в белке Е, соответствующие 3 аттенуирующим JE SA14-14- 2 специфических для вакцины изменения, которые были включены в вакцину ChimeriVax-WN02 (E-107 L на F, E-316 A на V и E-440 K на R ^{23 , 24} , Asn на Gln мутация в остатке E-154, удаляющая мотив N-связанного гликозилирования Asn-X-Ser/Thr в белке E (вариант CYZ-dg; на основе CYZ-hs с гибридным сигналом prM), и небольшие делеции в YF 17D-специфическом Белок C (вариант CYZ-dC с делецией остатков PSR в аминокислотах 40–42 белка C; на основе CYZ-hs) и 3’UTR (делеция CAGGT в нуклеотидах 256–260 3’UTR). Другие модификации в этих элементах генома оценивались на предмет их способности повышать аттенуацию различных флавивирусных вакцин-кандидатов ^{16 , 25 – 29} . Недавно было показано, что дегликозилирование белка Е в контексте цельного ZIKV дикого типа вызывает некоторую аттенуацию, которая, однако, была сочтена недостаточной для кандидата на безопасную вакцину ³⁰ . Дополнительно сконструированные варианты CYZ исследовали на репликацию в клетках Vero (как правило, они вырастали до титров до 10-кратно ниже по сравнению с родительскими химерами CYZ) и некоторые на аттенуацию/иммуногенность in vitro и in vivo (например,г., см. ниже, а данные не показаны).

Аттенуация CYZ (после инокуляции ИК) и иммуногенность у иммунокомпетентных мышей широко используется при оценке других вакцин ChimeriVax

³¹ . Пятидневным мышам-сосункам ICR инокулировали вирусы внутримозговым (IC) путем и наблюдали за признаками заболевания и смертности в течение 21 дня. Варианты CYZ вызывали лишь несколько спорадических смертей при некоторых испытанных дозах (предполагаемые дозы составляли от -1 до 4 log ₁₀ БОЕ), что было похоже на сильно ослабленный контроль ChimeriVax-JE ³² . Напротив, YF 17D вызывал смертность дозозависимым образом, как и ожидалось, с IC LD50, равным 0,44 log ₁₀ БОЕ (рис. ). Основываясь на значениях IC LD ₅₀ , вирусы CYZ (IC LD ₅₀  > 4 log ₁₀ БОЕ) более чем в 3500 раз менее нейровирулентны в этой модели по сравнению с эталоном YF 17D ( P  = 0.012; тест Манна-Уитни) и так же сильно ослаблены, как и ChimeriVax-JE.

Аттенуация вариантов CYZ-yfs и CYZ-hs в тесте на нейровирулентность грудных мышей по сравнению с эталонным контролем вакцины YF 17D. 5-дневным мышам-сосункам ICR внутрикожно инокулировали градуированные дозы вирусов (предполагаемые дозы составляли от -1 до 4 log ₁₀ БОЕ для CYZ и wt Пуэрто-Рико-2015 ZIKV, от 1 до 3 log ₁₀ БОЕ для ChimeriVax- JE и от -1 до 2 log ₁₀ PFU для YF 17D). Группе Mock control инокулировали разбавитель MEM с добавлением FBS.Показана смертность при дозах, определенных обратным титрованием инокулятов. Значения LD ₅₀ CYZ по сравнению с YFV-17D статистически отличались ( P  = 0,012; критерий Манна-Уитни).

Штамм A wt ZIKV Puerto Rico-2015 также использовали в этом эксперименте. Этот вирус имеет идентичные последовательности белков M и E с CYZ (Французская Полинезия-2013), и он не был адаптирован к мышам путем серийных пассажей от мозга к мозгу. Это также вызвало низкую смертность (рис. ), и, таким образом, эта модель не оптимальна/применима для дифференциации LAV, по крайней мере, от некоторых, например.g., неадаптированные мозговые мыши, штаммы ZIKV дикого типа. Однако следует отметить, что баллы патологии для вирусов CYZ были ниже, чем для ZIKV Пуэрто-Рико-2015, на основании наблюдаемых клинических признаков, в частности, сгорбленной позы, взъерошенной шерсти, потери веса и неврологических проявлений (данные не показаны). Напротив, высокоадаптированный к мозгу мыши штамм Uganda-1947 (MR766) ZIKV, введенный в дозе 4 log ₁₀ PFU, вызывал 100% смертность в тесте на нейровирулентность у мышей ICR в возрасте 3,5 недель, которые менее восприимчивы к IC. инфекции, чем у мышей-сосунков (данные не показаны).

Иммуногенность вакцин-кандидатов CYZ оценивали на 3,5-недельных мышах ICR (8 животных в группе), которые были иммунизированы на 0-й и 28-й день внутрибрюшинно (ВБ) 5 log ₁₀ БОЕ CYZ-yfs и Варианты CYZ-hs, контрольные химеры YF/Сенегал-1894 и YF/Камбоджа-2010 или штаммы ZIKV дикого типа Мексика-2016 (I-44), Камбоджа-2010, Сенегал-1984 и Уганда-1947 [в этом исследовании использовались две дозы поскольку ранее было показано, что ZIKV дикого типа не эффективно заражает иммунокомпетентных мышей ³³ , и, таким образом, мы не знали, будут ли контрольные CYZ и ZIKV инфицировать мышей ICR, вызывая обнаруживаемый иммунный ответ после одной дозы].Ответы нейтрализующих антител оценивали после каждой дозы, чтобы оценить, будут ли варианты CYZ и другие вирусы быть иммуногенными у мышей ICR после одной/двух доз. Все животные оставались здоровыми на протяжении всего исследования. После введения первой дозы (день 27) сыворотки мышей, иммунизированных вариантами CYZ, и контрольные химеры демонстрировали устойчивые титры ZIKV-специфических нейтрализующих антител (N Ab), определенные против штаммов ZIKV Пуэрто-Рико-2015 и Уганды-1947 (MR766) (PRNT _{). 50} GMTs 1282–7389, которые статистически не отличались от двух штаммов ZIKV; P  > 0.5 с помощью однофакторного дисперсионного анализа) (таблица), причем вариант CYZ-hs, в частности, является наиболее иммуногенным. wt штаммы ZIKV вызывали переменные титры N Ab, которые, по-видимому, не коррелировали с их географическим положением или годом выделения, или были ли они адаптированы к мышам (таблица). После второй дозы (день 49) GMT NAb увеличились до ≥10 000 в большинстве групп, за исключением сыворотки мышей, иммунизированных CYZ-yfs, титрованной против ZIKV Uganda-1947 (GMT 2000), и сыворотки от мышей, иммунизированных ZIKV Uganda-1947, титрованной против ZIKV Puerto Rico-2016 (1047 по Гринвичу).

Таблица 1

Иммуногенность однократной дозы вариантов CYZ и контрольных вирусов у иммунокомпетентных мышей ICR*.

18

7

18

7

Immunogen	PRNT	GMT ± SD против Zikv Puerto Rico-2015	PRNT 50 GMT ± SD против Zikv Uganda-1947
Cyz-YFS	1868 ± 1739	1282 ± 1165
CYZ-hs	7389 ± 8630	3774 ± 1796
2998 ± 1480	1562 ± 1040
YF/Сенегал-1984 контр.	1421 ± 1352	2079 ± 1701
вес ZIKV Мексика-2016	727 ± 1956	392 ± 531
вес ZIKV Камбоджа-2010	117 ± 55	329 ± 290
мас ZIKV Сенегал-1984	2558 ± 3980	2528 ± 1607
мас ZIKV Уганде тысяча девятьсот сорок семь	160 ± 435	1551 ± 722
Тестовая модель (МЕМ)	<100	<100

Для оценки защитной эффективности, обеспечиваемой иммунизацией CYZ, был проведен пилотный эксперимент на интактных мышах ICR для создания модели заражения ZIKV. Приблизительно 6-месячным мышам ICR внутривенно (в/в) вводили 2 log ₁₀ PFU штаммов Uganda-1947 (MR766) или Puerto Rico-2015 wt ZIKV. Виремию измеряли в сыворотке на 1, 2 и 5 дни после инокуляции. Интересно, что, несмотря на то, что штамм Uganda-1947 (MR766) в высокой степени адаптирован к мышам, ни у одного животного, получившего этот вирус, не было выявлено виремии, обнаруживаемой с помощью RT-qPCR. Напротив, у 4 из 5 мышей, которым вводили штамм Пуэрто-Рико-2015, наблюдалась определяемая виремия (вирусная РНК) в дни 1 и 2 в диапазоне 1.от 1 × 10 ³ до 2,8 × 10 ⁴ геномных эквивалентов (GE)/мл. Чтобы оценить защиту, опосредованную CYZ, мышей ICR, которые были иммунизированы 2 дозами варианта CYZ-hs, внутривенно заражали Пуэрто-Рико-2015 ZIKV через 7 месяцев после иммунизации. У иммунизированных CYZ-hs животных с помощью ОТ-ПЦР не было выявлено постинфекционной виремии, что свидетельствует о долговременной защите, в то время как у 3 из 6 плацебо-иммунизированных мышей развилась виремия, обнаруженная на 1–3-й день после заражения в титрах до 5. 9 × 10 ³ ГЭ/мл.

Аттенуация, иммуногенность и защитная эффективность CYZ у мышей A129 с дефицитом рецепторов IFN-α/β после периферической инокуляции зависимая мода. В частности, 100% смертность была зарегистрирована у 3-недельных мышей A129, в то время как 5-недельные мыши были частично восприимчивы, и все изученные 11-недельные мыши пережили периферическую инфекцию ZIKV

³³ .Также было продемонстрировано, что ZIKV вызывает сильный ответ N Ab у мышей A129 ¹⁶ . Поэтому мы использовали мышей A129 для оценки аттенуации, иммуногенности и эффективности кандидата CYZ-hs.

Для измерения периферической вирулентности молодым мышам A129 в возрасте 3–4 недель вводили 5 log ₁₀ БОЕ варианта CYZ-hs, ZIKV Puerto Rico-2015 или YF 17D подкожным (п/к) путем. ЗИКВ Пуэрто-Рико-2015 вызывал неврологические признаки инфекции, значительное снижение массы тела (рис.) и смертность 87,5% (рис. ). Напротив, было обнаружено, что вирус CYZ-hs является сильно аттенуированным, поскольку не наблюдалось потери веса, болезни или смерти, как это наблюдалось в контрольной группе с ложным инфицированием. Также было обнаружено, что YF 17D сильно ослаблен в этой модели [различия между ZIKV и всеми другими группами были статистически значимыми, P  = 0,0002 по логарифмическому ранговому тесту (Мантела-Кокса)] (рис. ).

Аттенуация CYZ-hs у мышей A129. ( A , B ) Мышей A129 в возрасте 3–4 недель подкожно инокулировали 5 log ₁₀ БОЕ CYZ-hs, ZIKV Puerto Rico-2015, YF 17D или Mock (разбавитель MEM) и массу тела ( A ) и выживаемость ( B ).Различия между ZIKV и всеми другими группами были статистически значимыми, P  = 0,0002 по критерию Log-rank (Mantel-Cox). ( C , D ) 8-недельным мышам A129 подкожно инокулировали 5 log ₁₀ БОЕ вирусов CYZ-hs или ZIKV Puerto Rico-2015, и вирусные РНК-нагрузки в указанных органах определяли с помощью RT-qPCR. в дни 5 ( C ) и 26 ( D ). Различия между CYZ-hs и ZIKV были статистически значимыми ( P  < 0,0001, двусторонний ANOVA).

Тканевой тропизм (биораспределение), который является еще одним показателем аттенуации, а также иммуногенность и защитная эффективность вакцин-кандидатов, исследовали на старых 8-недельных мышах A129. После подкожной инокуляции животных (как самцов, так и самок) 5 log ₁₀ БОЕ CYZ-hs или ZIKV Puerto Rico-2015 на 5-й и 26-й дни определяли вирусную РНК-нагрузку в селезенке, печени, головном мозге и яичках (из самцы) с использованием RT-qPCR у 3 животных на группу/момент времени. На 5-й день во всех этих органах наблюдались высокие вирусные нагрузки ZIKV Puerto Rico-2015 с концентрацией РНК ~4.5–6,5 log ₁₀ ГЭ/мг полученных тканей. Напротив, CYZ-hs был значительно ослаблен, поскольку вирусная нагрузка была примерно на 2,5 порядка ниже в селезенке, печени и яичках, и, что важно, вирус CYZ-hs не был обнаружен в головном мозге (рис. ). На 26-й день ZIKV Puerto Rico-2015 обнаруживался во всех органах с особенно высокой нагрузкой РНК в семенниках и головном мозге (~6 и 4 log ₁₀ ГЭ/мг соответственно), в то время как РНК CYZ-hs обнаруживалась только в низкая концентрация в селезенке (рис. ). Различия в нагрузках РНК CYZ-hs и ZIKV были статистически значимыми в оба дня ( P  < 0,0001, двусторонний ANOVA). Все мыши оставались здоровыми на протяжении всего эксперимента.

У инокулированных 8-недельных мышей A129 одна доза варианта CYZ-hs вызывала высокие ответы N Ab, измеренные в сыворотке на 26-й день против штаммов ZIKV Puerto Rico-2015 и MR766 (PRNT ₅₀ GMTs 1,354 и 2,995, соответственно) (таблица). Иммуногенность CYZ-hs была сопоставима с таковой вируса Пуэрто-Рико-2015.В этом эксперименте также исследовали иммуногенность вариантов CYZ-dg и CYZ-dC с дополнительными аттенуирующими генетическими модификациями (с дегликозилированным Е и 3-аминокислотной делецией в С соответственно). Модификации снижали нейтрализующие титры в несколько раз по сравнению с CYZ-hs, хотя варианты оставались довольно иммуногенными, с титрами PRNT ₅₀ , исчисляемыми сотнями, и считались на защитном уровне (таблица). Титры, определенные против двух штаммов ZIKV, статистически не отличались во всех группах ( P  > 0. 5; однофакторный дисперсионный анализ).

Таблица 2

ZIKV-специфические ответы нейтрализующих антител у мышей A129*.

502323 9900 ± 2573 9092 <20

Immunogen	PRNT	GMT ± SD против Zikv Puerto Rico-2015	PRNT 50 GMT ± SD против Zikv Uganda-1947
Cyz-HS	2284 ± 885	2995 ± 2701
Cyz-DC (Удаление 3 AA в C)	480 ± 420	850 ± 227
Cyz-DG (de-glycosylated E)	353 ± 210	70823
Wt Zikv Puerto Rico-2015	3900 ± 2573	3793	3792 ± 9823
Mock (Mem)	<20	<20

Для оценки защиты мышей были оспорены СК на 31 день с 3 лог. ₁₀ БОЕ wt ZIKV Пуэрто-Рико-2015.Виремию после заражения (вирусная РНК) измеряли с помощью RT-qPCR в сыворотке, собранной в дни 1, 3, 4, 5, 7 и 9. Животные, иммунизированные CYZ, были защищены, поскольку у некоторых животных обнаруживались только очень низкие уровни РНК, что не было неожиданным, учитывая высокую чувствительность RT-qPCR, которая позволяла обнаруживать неинфекционные (нейтрализованные) вирусные частицы, в том числе из контрольного инокулята. Напротив, высокая виремия после заражения наблюдалась у ложно иммунизированных контролей, достигая пика ~7 log ₁₀ GE/мл на 5-й день (для плацебо против иммунизации).Группы CYZ в дни 3–9, P  = 0,0002 по однофакторному дисперсионному анализу (ANOVA) (рис. ).

Защита мышей A129, иммунизированных CYZ, от заражения ZIKV. Мышей A129 в возрасте 8 недель иммунизировали подкожно 5 log ₁₀ БОЕ вариантов CYZ и на 31-й день подкожно заражали 3 log ₁₀ БОЕ ZIKV Puerto Rico-2015 дикого типа. Вирусную РНК после заражения в сыворотке (виремию) измеряли с помощью RT-qPCR. Для групп Mock vs. CYZ в дни 3–9 P = 0,0002; однофакторный дисперсионный анализ.

Аттенуация CYZ

in vitro в моделях культур клеток нейронов человека YF17D в культурах нейробластомы человека (SK-N-SH) и клеток-предшественников нейронов человека (hNPC) при множественности инфекций 0.01 БОЕ/клетку. Штаммы ZIKV дикого типа эффективно росли как в клетках hNPC, так и в клетках нейробластомы, достигая пиковых титров от ~7 до >8 log ₁₀ БОЕ/мл (рис. , соответственно). Контроль YF 17D был значительно ослаблен по сравнению с ZIKV в отношении репликации в hNPC, но не в клетках нейробластомы. Оба варианта CYZ-yfs и CYZ-hs продемонстрировали значительное, ~ 100- и 40-кратное снижение пиковых титров в культурах hNPC и нейробластомы, соответственно, по сравнению с ZIKV дикого типа (рис. ). Достоверных различий в индукции цитопатического эффекта (ЦПЭ) вирусами в обеих клеточных линиях не наблюдалось.

Репликация вариантов CYZ-yfs и CYZ-hs и ZIKV дикого типа (Пуэрто-Рико-2015 и Уганда-1947) и контролей YF17D в ( A ) клетках-предшественниках нейронов человека (hNPC) и ( B ) человека клетки нейробластомы SK-N-SH. МВД 0,01 БОЕ/клетку. Показаны репрезентативные данные одного из двух независимых экспериментов.

Обсуждение

В этом исследовании мы применили подход ChimeriVax к разработке химерной вакцины-кандидата LAV против Зика. Основное преимущество LAV заключается в том, что они дают возможность обеспечить длительную защиту после однократной дозы без какого-либо адъюванта, подобно эмпирически аттенуированной вакцине YF 17D.Разработка эмпирически аттенуированной вакцины на основе ZIKV не считается практичной из-за уникальных особенностей репликации и патологии ZIKV у людей, особенно врожденного синдрома Зика (микроцефалия и другие тератогенные эффекты) и передачи половым путем, а также сложности установления надежного трансляционного модели для обеспечения безопасности эмпирических кандидатов LAV, например для плода у беременных. Подход ChimeriVax является одним из рациональных подходов LAV к вакцине против Зика, которые в настоящее время разрабатываются (например,г. ^{16 , 17 , 34} ).

Хотя основное внимание в этом исследовании уделялось разработке вакцины против Зика, наши эксперименты дали интересную информацию о молекулярной биологии флавивирусов, в частности о влиянии расщепления сигналазы C/prM на репликацию вируса. Было высказано предположение, что относительно неэффективное расщепление сигналазой в этом стыке (ниже расщепления вирусной протеазой в C) способствует включению нуклеокапсида во время почкования вируса и, таким образом, является важной предпосылкой для эффективной репликации флавивирусов.Было показано, что усиление этого расщепления в YF 17D прерывает репликацию ^{20 – 22} . Однако в ZIKV прогнозируемый показатель расщепления сигналазы C/prM довольно высок по сравнению с YF 17D. Кроме того, увеличение вероятности расщепления путем замены специфического сигнала prM YF 17D в химере CYZ-yfs гибридным сигналом prM YF 17D/ZIKV неожиданно привело к варианту CYZ-hs, который реплицировался более эффективно, чем CYZ-yfs в клетках Vero. Это указывает на то, что требование неэффективного расщепления сигналазой prM не обязательно верно для всех флавивирусов.Однако предсказанная эффективность расщепления должна быть экспериментально подтверждена в дальнейших исследованиях.

Вариант CYZ-hs вырос до самых высоких титров в клетках Vero среди других вариантов (например, более 8 log ₁₀ БОЕ/мл при МВД 0,001 БОЕ/клетку), что является важным фактором для коммерческого производства. По этой причине, а также благодаря его благоприятному профилю ослабления и наблюдению за тем, что он вызывает самые высокие иммунные ответы у мышей, мы выбрали CYZ-hs в качестве ведущего кандидата на вакцину.

Для обеспечения безопасности флавивирусных LAV нейровирулентность у мышей и нечеловеческих приматов (NHP) не должна превышать таковую у вируса YF 17D, который используется в качестве стандартного эталонного компаратора. YF 17D является нейровирулентным для иммунокомпетентных мышей, в то время как ранее сконструированные вакцины ChimeriVax-JE, -WN и -DEN типов 1–4 не были нейровирулентными для взрослых мышей, хотя степень нейровирулентности, зависящая от дозы и возраста, наблюдалась у более чувствительные мышата-сосунки при дозах ИК на несколько порядков выше, чем YF 17D ^{9 , 11 , 23 , 32} . У 5-дневных иммунокомпетентных (ICR) мышей-сосунков IC инокуляция CYZ-hs привела к небольшому количеству смертей и наблюдаемым клиническим признакам (аналогично контролю ChimeriVax-JE), с IC LD ₅₀  > 4 log ₁₀ PFU, и химера была более чем в 3500 раз менее нейровирулентна, чем YF 17D (IC LD ₅₀ из 0,44 log ₁₀ БОЕ), таким образом, удовлетворяя требованию высокой аттенуации в этом стандартном анализе. Однако этот тест не подходил для четкой дифференциации CYZ-hs от неадаптированного к мышам контроля ZIKV Puerto Rico-2015, который также вызывал низкую смертность.Этот результат не был неожиданным, так как большинство изолятов ZIKV дикого типа не являются нейровирулентными для мышей, если они не адаптированы к мозгу мышей путем серийных пассажей от мозга к мозгу ³⁵ . Например, мы обнаружили, что адаптированный к мозгу мыши штамм Uganda-1947 был летальным для мышей ICR в возрасте 3,5 недель (100% смертность при дозе IC 4 log ₁₀ БОЕ).

Более четкая дифференциация CYZ-hs (и CYZ-yfs) по сравнению с ZIKV дикого типа в отношении репликации в нейронных клетках была получена путем сравнения роста вируса in vitro с использованием культур нейробластомы человека и hNPC.Репликация в клетках нейробластомы считается предиктором патологии/аттенуации нейротропных флавивирусов ^{36 , 37} мозг ^{38 – 40} . Значительное снижение репликации CYZ, наблюдаемое в этих клетках (пиковые титры в 40–100 раз ниже) по сравнению со штаммами ZIKV Puerto Rico-2015 и Uganda-1947, указывает на значительное ослабление репликации кандидатов CYZ в ткани головного мозга человека.Пониженная репликация в головном мозге снизит риск невропатологических нежелательных явлений после вакцинации взрослых и детей и, возможно, аномалий головного мозга у плода вакцинированных беременных женщин, и, таким образом, является весьма желательной характеристикой ЖАВ Зика.

При периферической инокуляции штаммы ZIKV дикого типа реплицируются в различных органах и могут вызывать заболевание у мышей с дефицитом рецептора IFN (A129, AG129, Ifnar) в зависимости от дозы, штамма мыши и возраста ^{33 , 41 , 42} . Эти штаммы мышей использовались в исследованиях аттенуации/патогенеза других флавивирусов, например вакцины YF 17D и вирусов денге ^{43 , 44} . Поэтому мы дополнительно оценили аттенуацию варианта CYZ-hs у мышей A129 с дефицитом рецептора IFN-α/β после подкожной инокуляции. CYZ-hs не вызывал признаков заболевания и смертности у молодых (3-4-недельных) мышей A129, восприимчивых к ZIKV дикого типа ³³ . Это отличалось от штамма wt ZIKV Puerto Rico-2015, который вызывал клинические признаки, потерю веса и высокую смертность.Затем исследовали биораспределение у более старых (8-недельных) мышей A129. Высокие уровни вирусной РНК ZIKV Пуэрто-Рико-2015 (~4,5–6,5 ГЭ/мг) наблюдались на 5-е сутки после СК-инфекции в селезенке, печени, головном мозге и яичках, тогда как нагрузки РНК CYZ-hs составляли не менее 2,5 порядков. ниже. Более того, в отличие от CYZ-hs, ZIKV Puerto Rico-2015 сохранялся, особенно в яичках и головном мозге, о чем свидетельствуют высокие концентрации РНК в этих органах на 26-й день. эта модель.Отсутствие CYZ-hs в яичках на 26-й день указывает на то, что химера утратила способность к длительной персистенции в этом органе, что снижает риск передачи вакцинного вируса CYZ половым путем после вакцинации. Важно отметить, что CYZ не является нейроинвазивным, о чем свидетельствует отсутствие вирусной РНК в мозге мышей как на 5-й, так и на 26-й день. вероятно для вакцинации беременных женщин.Эти данные свидетельствуют о том, что NS-белки ненейроинвазивного вируса YF 17D делали химеру неспособной проникать в мозг в этой модели, а также персистировать в семенниках. Аналогичный эффект на нейроинвазивность NS-белков ненейроинвазивного вируса был ранее зарегистрирован для химерного вируса денге 4/КЭ LAV, поскольку его исходный вирус КЭ дикого типа (донор генов prM-E) был летальным для мышей после периферической инокуляции, в то время как химера, основанная на основе ненейроинвазивного вируса денге типа 4, не была ⁴⁵ .Наши данные в этом исследовании также предполагают, что NS-белки ZIKV играют значительную роль в тропизме/патологии тканей ZIKV.

Наконец, однократная доза CYZ-hs показала высокую иммуногенность у мышей ICR и A129 с титрами PRNT ₅₀ в сыворотке (GMT) в диапазоне от ~1300 до 7000. Для сравнения ранее было замечено, что у мышей Balb/c, иммунизированных инактивированной вакциной-кандидатом против Зика с квасцовым адъювантом, титры N-Ab составили 15, что было определено с помощью анализа микронейтрализации (хотя значения следует сравнивать с осторожностью из-за различий в анализах). использовал).Этого уровня N-АТ было достаточно для защиты животных от суррогатного заражения ZIKV внутривенным путем ¹³ . Важно отметить, что нейтрализующие титры у животных, иммунизированных CYZ, были эквивалентны при определении как против недавних американских (Пуэрто-Рико, 2015 г.), так и исходных африканских (Уганда, 1947 г.) изолятов, что указывает на то, что вакцина CYZ, вероятно, в целом защищает от генетически отдаленных штаммов ZIKV. циркулирующих в разных географических регионах. Мыши, иммунизированные ICR и A129, были защищены от заражения ZIKV на основе измерения вирусной РНК в сыворотке после заражения. Мыши ICR были защищены от заражения через 7 месяцев после иммунизации, что свидетельствует о том, что CYZ может обеспечить длительную защиту.

Описанные здесь данные указывают на то, что ведущий кандидат CYZ-hs является сильно аттенуированным, сохраняя при этом сильную иммуногенность и способность эффективно реплицироваться в клетках Vero. В совокупности эти данные подтверждают дальнейшие исследования на других моделях, включая NHP, и позволяют предположить, что вакцина может быть пригодна для оценки в клинических испытаниях на людях и для производства в промышленных масштабах.Стандартных моделей NHP, использовавшихся ранее для других вакцин ChimeriVax, должно быть в значительной степени достаточно для получения дополнительных необходимых доклинических доказательств безопасности и эффективности этого LAV для взрослых (за исключением беременных женщин) и подростков до начала половой жизни. Для сексуально активных взрослых может потребоваться применение дополнительных доклинических или клинических моделей, чтобы убедиться в отсутствии передачи вакцины CYZ половым путем. Недавно на основе экспериментов in vitro и на мелких животных возникла теоретическая озабоченность усилением инфекции или патологии ZIKV из-за уже существующих антител против других флавивирусов.Нет никаких доказательств того, что такое улучшение происходит у людей, и доступные данные NHP говорят об обратном ^{46 , 47} . Тем не менее, может быть необходимо клинически продемонстрировать отсутствие усиления инфекции вакцины CYZ перекрестно-реактивными антифлавивирусными антителами и, таким образом, безопасность вакцины не будет скомпрометирована у предиммунизированных субъектов. Наконец, если предполагаемая целевая группа будет включать беременных женщин, необходимо будет продемонстрировать безопасность вакцины CYZ для плода, предпочтительно на соответствующей надежной модели NHP.

Материалы и методы

Штаммы ZIKV дикого типа и контрольные вакцинные вирусы

Штаммы ZIKV дикого типа, используемые в этом исследовании: MR766 (Уганда-1947), I-44 (Мексика-2016), FSS 13025 (Камбоджа-2010), и DAK AR 41519 (Сенегал-1984), полученный от доктора Роберта Теша, Всемирного справочного центра новых вирусов и арбовирусов (WRCEVA, UTMB, Галвестон, Техас), и PRVABC59 (Пуэрто-Рико-2015) из Центров по контролю и профилактике заболеваний. (CDC, Атланта, Джорджия). Вирусы размножали и титровали аналогично химерам CYZ, как описано ниже.Химера ChimeriVax-JE была описана ранее ³² .

Конструирование и

характеристика in vitro вариантов CYZ

Вставка генов ZIKV prM-E (штамм Французской Полинезии-2013; регистрационный номер GenBank {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«текст» :»KJ776791″,»term_id»:»1061065316″,»term_text»:»KJ776791″}}KJ776791) в основу YF 17D в малокопийном одноплазмидном векторе на основе pBeloBac11 ⁴⁸ и других генетических модификации были сделаны с использованием генного синтеза (с помощью DNA2.0, Inc., Менло-Парк, Калифорния, или блоки генов от Integrated DNA Technologies, Скоки, Иллинойс) и стандартные подходы к клонированию. Гены prM-E из репрезентативной Азии (Камбоджа-2010, инвентарный номер GenBank {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»JN860885″,»term_id»:»380036385″,»term_text «:»JN860885»}}JN860885) и африканские (Сенегал-1984, регистрационный номер GenBank {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»HQ234501″,»term_id»:»345132146″ ,»term_text»:»HQ234501″}}HQ234501) Штаммы ZIKV также использовали для конструирования контрольных химер.

Полученные плазмиды линеаризовали с помощью рестриктазы Xho I и in vitro , транскрибировали с использованием наборов Amplicap SP6 High Yield Message Maker (Cellscript, Madison, WI). In vitro транскрибированная РНК была затем трансфицирована в клетки Vero для получения инфекционных вирусов CYZ. Все выделения вируса, дальнейшие пассажи и анализы кривых роста в клетках Vero выполняли с использованием бессывороточной среды VPSFM (11681–020; Gibco, Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) при 37 °C, 5.0% CO ₂ . Запасы вирусов дополняли 10% сорбитом и хранили при -80 °С. Титры вирусов определяли в клетках Vero либо с помощью стандартного анализа бляшек на 5-й день после заражения с окрашиванием кристаллическим фиолетовым ^{24 , 32} , либо с помощью иммунного окрашивания очагов, как описано ранее ⁴⁹ с анти-ZIKV Белок Е MAb 0502156 (Aalto Bioregents, Дублин, Ирландия) и вторичное антитело, конъюгированное с мышиным IgG Fc-HRP (31437; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Генетическая стабильность была подтверждена серийным пассажем в клетках Vero до пассажа 5 (P5) при контролируемой множественности множественности 0,01–0,001 БОЕ/клетку с последующей ОТ-ПЦР и консенсусным секвенированием генов prM-E и дополнительных областей генома, где это необходимо, таких как как ген С и 3’UTR вариантов с модификациями этих элементов или полные геномы.

Ослабление репликации CYZ в нейрональных клетках человека оценивали in vitro путем анализа кривых роста в клетках нейробластомы человека и hNPC и сравнения с ZIKV дикого типа и контролями YF 17D.Клетки нейробластомы человека SK-N-SH (Американская коллекция типовых культур/ATCC, Манассас, Вирджиния) поддерживали в среде Eagle’s MEM (ATCC), разработанной ATCC, с добавлением 10% FBS. hNPC (ATCC) выращивали в среде DMEM F12 с добавками набора Neural Progenitor Cell Expansion (ATCC). Клетки, выращенные в колбах Т-25 или 6-луночных планшетах для тканевых культур (в случае hNPC), инфицировали вирусами при указанных MOI и инкубировали при 37 °C, 5,0% CO ₂ . Титры вируса определяли в аликвотах сред, собираемых ежедневно.

Исследования на мышах

Все процедуры проводились в соответствии с утвержденными протоколами IACUC в соответствии с требованиями Национального института здравоохранения к гуманному обращению с лабораторными животными. Пути/дозы инокуляции и дни процедур были такими же, как описано в разделе «Результаты».

Тесты на нейровирулентность мышей

Иммунокомпетентные (ICR) мыши были получены от Charles River (Charles River Laboratories International, Inc., Уилмингтон, Массачусетс, США). Мышам-сосункам в возрасте 5 дней в группах от 9 до 12 (1 самка на группу; мышей-сосунков, рандомизированных между группами) инокулировали внутрикожным путем ZIKV, CYZ, LAV дикого типа и имитации контроля в указанных дозах в 20  мкл MEM, содержащий 0.25% сывороточный альбумин человека с использованием шприца Hamilton объемом 0,5 мл и микроигл 27G ¼ дюйма. За инокулированными мышами наблюдали в течение 3 недель на наличие симптомов энцефалита, включая взъерошенные волосы, сутулость спины, паралич и смерть. Умирающие животные были гуманно усыплены.

Оценка иммуногенности у иммунокомпетентных мышей, а также аттенуации и иммуногенности у иммунодефицитных мышей A129

3,5-недельных мышей ICR дважды иммунизировали (дни 0 и 28) внутрибрюшинным путем указанными тестируемыми препаратами и контролями (8 животных на группа).Титры ZIKV-специфических нейтрализующих антител определяли после первой и второй доз (дни 27 и 53) в образцах сыворотки, инактивированной нагреванием, с использованием стандартного анализа PRNT ₅₀ ⁴⁹ против штаммов ZIKV дикого типа Пуэрто-Рико-2015 и Уганды. -1947 г. (MR766). Животных внутривенно заражали примерно через 7 месяцев после иммунизации с помощью 2 log ₁₀ PFU Пуэрто-Рико-2015 ZIKV, и виремию после заражения измеряли в сыворотке на 1–5 дни с помощью RT-qPCR с использованием праймеров/зондов, специфичных для ген ZIKV E.

Для измерения аттенуации у мышей с иммунодефицитом 3-4-недельным мышам A129 (с дефицитом рецептора IFN-α/β; Marshall BioResources, North Rose, NY, USA), которые восприимчивы к ZIKV, прививали 5 log ₁₀ БОЕ CYZ или указанных контрольных вирусов подкожным путем с последующим наблюдением неврологических признаков инфекции, потери веса и смертности.

Для оценки тканевого тропизма, а также иммуногенности и защитной эффективности старшим 8-недельным мышам A129 (как самцам, так и самкам) подкожно инокулировали CYZ и контрольные вирусы.Биораспределение определяли на 5-й и 26-й дни путем измерения нагрузки вирусной РНК в селезенке, печени, головном мозге и яичках с использованием RT-qPCR у 3 животных на группу/момент времени. ZIKV-специфические ответы антител измеряли в сыворотке на 26 день с помощью PRNT ₅₀ . Животных заражали подкожно на 31-й день 3 log ₁₀ БОЕ ZIKV Puerto Rico-2015 дикого типа. Виремию после заражения измеряли с помощью RT-qPCR в сыворотке, собранной в дни 1–9.

Статистические анализы

Расчеты конечных титров и статистические анализы проводились с использованием GraphPad Prism 6 (GraphPad Prism Software, Inc., Сан-Диего, Калифорния).

Благодарности

Авторы выражают благодарность коллегам из Санофи Пастер Н. Мантель, В. Барбан, Ф. Буде, Э. Олоо, Т. Стругнелл, Дж. Хамбергер, Х. Эрнандес, Т. Фогель, Г. Равель, Э. Данве-Шери, Э. Рише, Э. Наварро-Санчес, К. Селлин, Ф. Норьега, Г. Аньес, Л. Багльос, Дж. Л. Клавель, М. Л’Азу, М. Бонапарт, В. Делор, П. Коммандер, Л. Герентес, А. Киффер, К. Одук, А. Хромава, С. Гайарду, Ф. Вердье, Дж. Мозер, С. Дж. Вей, Н. Даррикаррер, Р. Рудиселл, Б.Смолл, Г. Зили, А. Румянцев и К. Левин за полезные обсуждения и/или вклад в эксперименты, сотрудники центров исследований на животных Санофи Пастер Кембридж и Марси-л’Этуаль за помощь с мышами, а также д-р Роберт Теш, World Справочный центр новых вирусов и арбовирусов (WRCEVA), UTMB, Галвестон, Техас, за предоставление нескольких штаммов ZIKV. Эта работа финансировалась Санофи Пастер.

Вклад авторов

М.Г.-М., Дж.К., Ф.Д., Ф.М.-А. и Р.К.Г. проводили эксперименты.М.Г.-М., А.П.Г., В.Л., Ю.Г.-К., М.-К.Б., Р.О., С.Д., Н.Б., Х.К., Н.Дж., Дж.Х. и К.В.П. спроектировал исследование. К.В.П. и А.Г. подготовили основной текст рукописи. Все авторы критически рассмотрели и одобрили рукопись.

Примечания

Конкурирующие интересы

Авторы являются нынешними или бывшими сотрудниками Санофи Пастер и могут владеть акциями компании.

Сноски

Примечание издателя: Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Марианн Гил-Молони и Ана П. Гонсалвес внесли равный вклад.

Ссылки

1. Monath, T.P. & Heinz, F.X. In Fields Virology (eds Fields, B.N., Knipe, D.M. & Howley, P.M.) 961–1034 (Lippincott-Raven, 1996).

2. Фаучи А.С., Моренс Д.М. Вирус Зика в Америке – еще одна угроза арбовируса. N Engl J Med. 2016; 374: 601–604. doi: 10.1056/NEJMp1600297. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3. Мид П.С., Хиллз С.Л., Брукс Дж.Т. Вирус Зика как возбудитель, передающийся половым путем.Curr Opin Infect Dis. 2018;31:39–44. doi: 10.1097/QCO.0000000000000414. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Эпидемиологическое обновление: неврологический синдром, врожденные аномалии и вирусная инфекция Зика. (Вашингтон, округ Колумбия, 2016 г.).

5. Дурбин А., Уайлдер-Смит А. Обновленная информация о разработке вакцины против Зика. Эксперт Rev Вакцины. 2017; 16: 781–787. doi: 10.1080/14760584.2017.1345309. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

7. Lindenbach, B.D., Thiel, H.-J. и Rice, C.M. In Fields Virology Vol.1 (редакторы Knipe, DM & Howley, PM) Ch. 33, 1101–1152 (Вольтерс Клювер, 2007).

8. Гублер Д., Куно Г. и Маркофф Л. In Fields Virology Vol. 1 (редакторы Knipe, DM & Howley, PM) Ch. 34, 1153–1252 (Вольтерс Клювер, 2007).

9. Пугачев К., Гиракху Ф., Трент Д. и Монат Т. In New Generation Vaccines (изд. Левин, М. М.) 557–569 (CRC Press, 2009).

10. Монат, Т.П., Гершман, М., Эрин Стейплс, Дж. и Барретт, А.Д.Т. В вакцинах (ред. Плоткин, С.А., Оренштейн, В. А. и Оффит, П. А.) 870–968 (Эльзевир Сондерс, 2013).

11. Гай Б. и др. Доклиническая и клиническая разработка химерных вакцин на основе YFV 17D против вирусов денге, Западного Нила и японского энцефалита. вакцина. 2010; 28: 632–649. doi: 10.1016/j.vaccine.2009.09.098. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Виллар Л. и соавт. Эффективность четырехвалентной вакцины против лихорадки денге у детей в Латинской Америке. N Engl J Med. 2015; 372:113–123. doi: 10.1056/NEJMoa1411037. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14.Аббинк П. и соавт. Защитная эффективность нескольких вакцинных платформ против заражения вирусом Зика у макак-резусов. Наука. 2016; 353:1129–1132. doi: 10.1126/science.aah6157. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]15. Моджаррад К. и др. Предварительные совокупные данные о безопасности и иммуногенности получены в результате трех испытаний очищенной инактивированной вакцины-кандидата против вируса Зика: фаза 1, рандомизированные, двойные слепые, плацебо-контролируемые клинические испытания. Ланцет. 2018; 391: 563–571. doi: 10.1016/S0140-6736(17)33106-9.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]17. Ли XF и др. Разработка химерной вакцины против Зика с использованием лицензированной живой аттенуированной флавивирусной вакцины в качестве основы. Нац коммун. 2018;9:673. doi: 10.1038/s41467-018-02975-w. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]18. Guindon S, Gascuel O. Простой, быстрый и точный алгоритм для оценки больших филогений по максимальному правдоподобию. Сист биол. 2003; 52: 696–704. doi: 10.1080/106351503

520. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19.Bendtsen JD, Nielsen H, von Heijne G, Brunak S. Улучшенное предсказание сигнальных пептидов: SignalP 3.0. Дж Мол Биол. 2004; 340: 783–795. doi: 10.1016/j.jmb.2004.05.028. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Stocks CE, Lobigs M. Расщепление сигнальной пептидазы на стыке флавивируса C-prM: зависимость от вирусной протеазы NS2B-3 для эффективного процессинга требует наличия детерминант в C, сигнальном пептиде и prM. Дж Вирол. 1998;72:2141–2149. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]21. Lee E, Stocks CE, Amberg SM, Rice CM, Lobigs M.Мутагенез сигнальной последовательности белка prM вируса желтой лихорадки: усиление расщепления сигналазой In Vitro летально для продукции вируса. Журнал вирусологии. 2000; 74: 24–32. doi: 10.1128/ОВИ.74.1.24-32.2000. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]22. Лобигс М., Ли Э. Неэффективное расщепление сигналазой способствует эффективному включению нуклеокапсида в мембраны почкующихся флавивирусов. Журнал вирусологии. 2003; 78: 178–186. doi: 10.1128/ОВИ.78.1.178-186.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]23.Арройо Дж. и др. Живая аттенуированная вакцина против вируса ChimeriVax-West Nile: доклиническая оценка безопасности, иммуногенности и эффективности. Дж Вирол. 2004;78:12497–12507. doi: 10.1128/ОВИ.78.22.12497-12507.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]25. Уайтман М.С. и др. Разработка и характеристика негликозилированных мутантных вирусов E и NS1 в качестве потенциальной вакцины-кандидата против вируса Западного Нила. вакцина. 2010;28:1075–1083. doi: 10.1016/j.vaccine.2009.10.112. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26.Дурбин А.П. и соавт. rDEN4delta30, живой аттенуированный вирус денге-кандидат 4 типа, является безопасным, иммуногенным и высококонтагиозным для здоровых взрослых добровольцев. J заразить дис. 2005; 191:710–718. дои: 10.1086/427780. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. Пирс К.К. и др. Живая аттенуированная химерная вакцина против вируса Западного Нила, rWN/DEN4Delta30, хорошо переносится и иммуногенна у пожилых добровольцев, ранее не подвергавшихся флавивирусам. J заразить дис. 2017; 215:52–55. doi: 10.1093/infdis/jiw501. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]28.Mandl CW и соавт. Спонтанные и искусственные делеции в 3′-некодирующей области вируса клещевого энцефалита: конструирование высокоаттенуированных мутантов флавивируса. Дж Вирол. 1998;72:2132–2140. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]29. Кофлер Р.М., Heinz FX, Mandl CW. Капсидный белок С вируса клещевого энцефалита устойчив к большим внутренним делециям и является благоприятной мишенью для ослабления вирулентности. Дж Вирол. 2002;76:3534–3543. doi: 10.1128/ОВИ.76.7.3534-3543.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]30.Fontes-Garfias CR, et al. Функциональный анализ гликозилирования белка оболочки вируса Зика. Cell Rep. 2017; 21:1180–1190. doi: 10.1016/j.celrep.2017.10.016. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]31. Монат Т.П. и др. Тестирование безопасности на нейровирулентность новых живых аттенуированных флавивирусных вакцин: новорожденные мыши обеспечивают точную замену тесту на обезьянах. Биопрепараты. 2005; 33: 131–144. doi: 10.1016/j.biologicals.2005.03.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Гиракху Ф. и др.Иммуногенность, генетическая стабильность и защитная эффективность рекомбинантного химерного вируса желтой лихорадки-японского энцефалита (ChimeriVax-JE) в качестве живой аттенуированной вакцины-кандидата против японского энцефалита. Вирусология. 1999; 257:363–372. doi: 10.1006/viro.1999.9695. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Шан С и др. Однодозовая живая аттенуированная вакцина предотвращает передачу вируса Зика во время беременности и повреждение яичек. Нац коммун. 2017;8:676. doi: 10. 1038/s41467-017-00737-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]35.Дик ГВ. Вирус Зика. II. Патогенность и физические свойства. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1952; 46: 521–534. doi: 10.1016/0035-9203(52)-6. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Румянцев АА, Мерфи Б.Р., Плетнев АГ. Переносимый клещами мутантный вирус Лангата, чувствительный к температуре, круг хозяев которого ограничен клетками нейробластомы и не обладает нейроинвазивностью для мышей с иммунодефицитом. Дж Вирол. 2006; 80: 1427–1439. doi: 10.1128/ОВИ.80.3.1427-1439.2006. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]37.Румянцев А.А., Чанок Р.М., Мерфи Б.Р., Плетнев А.Г. Сравнение живых и инактивированных вирусных вакцин против клещевого энцефалита по безопасности, иммуногенности и эффективности у макак-резусов. вакцина. 2006; 24:133–143. doi: 10.1016/j.vaccine.2005.07.067. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Данг Дж. и др. Вирус Зика истощает нейронные предшественники в органоидах головного мозга человека посредством активации врожденного иммунного рецептора TLR3. Клеточная стволовая клетка. 2016;19:258–265. doi: 10.1016/j.stem.2016.04.014. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]39.Ханнерс Н.В. и др. Западный вирус Зика в эмбриональных нейронах-предшественниках человека сохраняется в течение длительного времени с частичным цитопатическим и ограниченным иммуногенным действием. Cell Rep. 2016; 15: 2315–2322. doi: 10.1016/j.celrep.2016.05.075. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]40. Гарсез П.П. и др. Вирус Зика нарушает рост нейросфер и органоидов головного мозга человека. Наука. 2016; 352:816–818. doi: 10.1126/science.aaf6116. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]43. Мейер К.С., Гарднер К.Л., Хоретоненко М.В., Климстра В.Б., Райман К.Д.Мышиная модель для изучения висцеротропного заболевания, вызванного вирусной инфекцией желтой лихорадки. PLoS Патог. 2009;5:e1000614. doi: 10.1371/journal.ppat.1000614. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]45. Плетнев А.Г., Брей М., Хаггинс Дж., Лай С. Дж. Конструирование и характеристика химерных вирусов клещевого энцефалита/денге 4 типа. Proc Natl Acad Sci USA. 1992; 89: 10532–10536. doi: 10.1073/pnas.89.21.10532. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]46. Томас СДж. Вакцины против вируса Зика — Полное поле и поиск лучших вариантов.N Engl J Med. 2017; 376:1883–1886. doi: 10.1056/NEJMcibr1701402. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]47. Маккракен М.К. и др. Влияние предшествующего иммунитета к флавивирусам на вирусную инфекцию Зика у макак-резусов. Плос Патог. 2017;13:e1006487. doi: 10.1371/journal.ppat.1006487. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]49. Румянцев А.А. и соавт. Характеристика платформы RepliVax для дефектных по репликации флавивирусных вакцин. вакцина. 2011;29:5184–5194. doi: 10.1016/j.vaccine.2011.05.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

ExecutedToday.com » 1775: Емельян Пугачев

10 января 2008 г. Палач

В этот день в 1775 году российская императрица Екатерина Великая приказала изрубить в Москве казачьего мятежника Емельяна Пугачева за то, что он поддержал крупное восстание, последствия которого будут преследовать Россию в последующие десятилетия.

Пугачевский бунт был самым ярким образцом в многолюдной генеалогии крестьянских восстаний XVIII века.

Большинство таких волнений были локальными и в принципе не угрожающими. Пугачева не было ни тем, ни другим.

Казачий полководец поднял восстание на Урале в 1773 году, назвав себя давно потерянным царем, которого Екатерина свергла десять лет назад.

Екатерина не сразу увидела смысл, но этот тычинский самозванец создал государственную бюрократию и начал издавать указы на царя — и по их содержанию легко понять, чем он привлек следующих:

Всем бывшим крестьянам и в подчинении у помещиков даруем вместе с Нашим монаршим и отеческим состраданием … владения землей и лесами и сенокосами и промыслами и солеными озерами, без выкупа и без оброк , и всех означенных освобождаем от злодейских дворян и от мздоимцев в городе — чиновников, облагавших крестьян и весь народ налогами и прочими обременениями… враги Нашей власти и нарушители империи и угнетатели крестьянства, и их надо ловить, казнить и вешать, обращаться с ними так же, как поступали они, не имеющие христианства, с вами, крестьянами.

Восстание быстро давало метастазы, и к тому времени, когда были брошены силы, достаточные для его подавления, оно растянулось от Урала до Волги.

Александр Пушкин использовал историю бунта Пугачева для Капитанская дочка (текст на английском | русском), который несколько раз был экранизирован — последний раз в 2000 году.

Екатерина Великая, со своей стороны, была глубоко потрясена этим делом, и «просвещенный деспот», поддерживая связь с либеральным интеллектуальным брожением эпохи, решительно выступила против всякой реформы крепостничества.Выбор Екатерины, подкрепленный ее преемниками, поддерживать свою безопасность только с помощью репрессий поддерживал русское крепостное право до 1861 года в ошеломляющих масштабах — якорь, тянущий вниз экономику, точно так же, как индустриализация Западной Европы открыла разрыв в развитии, последствия которого сохраняются и по сей день.

В этот день..

• 1848: Томас Сейл, игра — 2020
• 1868: Хели Фреймонд, последний обезглавленный мечом в Швейцарии — 2019
• 1917: Маргерит Франсильяр, швея и шпион — 1032 1038 9002 Джон Грегсон, пьяный и хулиганский — 2017
• 1946: Ласло Бардоши, бывший премьер-министр — 2016
• 1430: Десять мужчин обезглавлены, одиннадцатый мужчина женился — 2015
• 2013: Чжан Юнмин, труп каннибала — 2014
  0 9010 Охотник в трагедии Хантера-Армстронга — 2013
• 1937: Мартемьян Рютин, за его дело — 2012
• 2010: Командир повстанцев Аль-Шабааб — 2011
• 1645: Уильям Лауд, отданный дьяволу — 2010
• 19314: Маринус ван дер Люббе, для пожара Рейхстага — 2009

Заявка подана в категории: 18 век, Искусство и литература, Обезглавление, Смертная казнь, Смертная казнь, Расчленение, Казнь, Известные, Ужасные методы, История, Популярная культура, Претенденты на трон, Публичные казни, Революционеры, Россия, Солдаты, Измена

Теги: 1770-е, 1775, александр пушкин, казаки, 10 января, москва, петр 3, восстание пугачева, крепостное право, уральские горы, река волга, емельян пугачев

.