Классицизм в драматургии Комедия «Недоросль» Фонвизина (Недоросль Фонвизин)

1. Конфликт комедии «Недоросль».
2. Традиции классицизма и новаторство Д. И. Фонвизина.
3. «Недоросль» — реалистическая комедия.

Литература XVIII века во время всеобщего национального подъема сформировала в обществе гражданское сознание. Классицисты пропагандировали идеи равенства людей, гуманизм, принцип общей пользы, ответственности властей перед народом. Они считали своим долгом принести пользу отечеству. Классицисты стремились к правдивому изображению жизни, говорили об актуальных проблемах общества, им присущи гражданский пафос, патриотизм. Но драматургия того времени обогащалась и произведениями, выходящими за рамки классицизма. Такова комедия Д. И. Фонвизина «Недоросль». Комедия была завершена в 1781 году. Пафос ее определила политическая острота и привер­женность Фонвизина идеалам свободы человека.

Главная тема комедии, ее конфликт обозначен автором уже в самом начале, это — произвол помещиков и бесправие крепостного. Борьба прогрессивного дворянства с крепост­никами—драматический конфликт «Недоросля». На сторо­не передового дворянства выступают Правдин и Стародум, крепостники — Простаковы и Скотинины. Фонвизин убеж­дает нас, что крепостничество губительно, с ним надо бо­роться. Оно развращает самих крепостников, которые те­ряют свои человеческие качества в обращении с крепост­ными, чувствуют себя всесильными. Автор хотел показать в своем произведении поступки и мораль крепостников, по­рожденные крепостным правом. Именно крепостнический произвол, а не борьба за руку Софьи — главная тема «Недо­росля». Изображение претендентов на ее руку — еще один случай внимательно рассмотреть представителей «благо­родного сословия», изображенных в комическом свете. Лю­бовный сюжет, по мнению Фонвизина, не может быть осно — вой драматического произведения. Его основой стал кон­фликт эпохи.

Литературовед Г. П. Макогоненко считает, что «Недо­росль» — политическая комедия, так как новаторские чер­ты в ней определили именно политические убеждения ав­тора. Здесь есть сюжет, передающий реальный историчес­кий конфликт; положительные герои с чертами дворян­ских просветителей.

Пьеса продолжает традиции классицизма. По мнению Г. А. Гуковского, художественное мышление Фонвизина все­гда «сохраняло явственный отпечаток этой школы». «Недо­росль» — явление позднего русского классицизма, который испытал влияние просветительской идеологии. Это произ­ведение сочетает в себе трогательное и комическое, разрушает привычные жанровые формы. Характеры героев сложны, противоречивы, отсутствует их деление только на положительных и отрицательных, как того требовали принципы классицизма. Но положительные герои, следуя канонам классицизма, в «Недоросле» имеют одну характерную черту. Власть традиций классицизма сохранилась в говорящих фамилиях героев, в сохранении симметрии в распределении отрицательных и положительных персонажей. Речь героев в пьесе передает характеры действующих лиц, но герой-резонер, в классицистических произведениях — носитель мнения автора, тоже присутствует, это благородный Стародум. Главная идея классицизма — идея просвещения. В «Недоросле» же она получает иную трактовку: просвещение важно, но добродетель важнее ума. Триединство времени, места и действия нарушено: вместо одной проблемы автор затрагивает целый ряд одинаково важных.

Фонвизинский реализм — правдивость, историческая конкретность образов, особенно ярко проявил себя в создании характеров Еремеевны и Простаковой, показав сложность их натуры. Образы Стародума и Правдина — тоже живые характеры, читатели даже «узнавали» их прототипов, дворянских просветителей. Реализм помог Фонвизину отойти от литературных штампов, автор первым сделал шаг к созданию героя-передового деятеля. Стародум, Правдин и Милон выписаны в общих чертах, без подробностей биографии, внутреннего мира. Но образ Стародума в этом плане более значителен.

Фонвизин создал новый тип реалистической комедии: положил не готовый сюжет в ее основу, а реальный исторический конфликт, который затрагивает всех героев. Конфликты в доме, по мысли автора, — это отражение конфликтов в стране. Поведение Простаковой, например, исходит из указа о вольности дворянской. Осуждение ее значит то, что в ее лице осуждается крепостничество. Но высокое содержание не означает для автора отказ от комического. Но это комедия обличительная, а порой и с горькой иронией. С «Недоросля» начинается русская общественная комедия. Фонвизин придал комедии социальную глубину и резкую сатирическую направленность. Автор обличает порок — крепостническую практику, дворянское «злонравие» и стремится показать его причины: неправильное воспитание, невежество людей.

По словам Г. А. Гуковского, «Недоросль» — «полукомедия, полудрама». Жанровое своеобразие произведения в том, что основа пьесы — классицистическая комедия, обновленная серьезными и трогательными сценами: беседой Правдина со Стародумом, разговорами Стародума с Софьей и Милоном. Финал сочетает морализаторство и трогательность. Простакову постигло наказание, но ее жалко.

Традиции Фонвизина продолжили его последователи — А. С. Грибоедов со своим «Горем от ума» и Н. В. Гоголь с «Ревизором». Гоголь называл комедии Фонвизина и Грибоедова самыми яркими произведениями: «В них уже не легкие насмешки над смешными сторонами общества, но раны и болезни нашего общества… Обе комедии взяли две разные эпохи. Одна поразила болезни от непросвещения, другая — от дурно понятого просвещения».

Краткий пересказ пьесы Недоросль Фонвизина: кто написал, цитаты Простаковой и письмо Митрофану

Так в царской России 17 века называли юношу дворянского происхождения, который не достиг совершеннолетия, а потому не может быть принят на службу….

Но это слово имело и второй смысл. Недорослем называли того, кто достиг шестнадцати лет, но не проявлял желания учиться, недалекого умом, ленивого маменькиного сыночка. Основная проблема комедии состоит в осуждении традиций воспитания дворянских детей, особенно провинциальных.

Название «Недоросль» автор связал с указом, изданным Петром I. По указу царя «недорослей», которые не получили документов об образовании, не разрешалось принимать на службу, оформлять брак.

О подобном молодом человеке рассказал Фонвизин в своей комедии. Митрофан был туповатым, не стремился учиться.

Кто написал это бессмертное и актуальное по нынешний день произведение? Комедия написана Денисом Ивановичем Фонвизиным в конце 1781 года. Она имеет пять действий.

Содержание

Краткое описание сюжета

Действие пьесы происходит в поместье помещиков Простаковых, которые отличаются дремучим невежеством и дикими нравами. В доме, конечно, с точки зрения материальной, есть все. Но нет здесь любви, доброты и правды. Дом, как пустая коробочка.

Внимание! Герои представляют различные слои российского общества XVIII столетия: служащий, дворянин, крепостной, учитель.

Основными персонажами являются Митрофанушка с матерью. Эта властная и грубая женщина управляет хозяйством, командует слугами, мужем, руководит воспитанием и образованием сына. Хотя последним его мать себя не особо обременяет, а только старается исполнять модные в то время моральные и нравственные условности.

План произведения

События происходят в имении Простаковых. Первым действием освещаются такие события:

1. Тришка сдает свой работу: кафтан для Митрофанушки.
2. Сон любимого сына хозяйки.
3. Планы Скотинина о женитьбе на Софье.
4. Послание от Стародума.
5. Богатую наследницу матушка мечтает сделать невестой Митрофана.
6. Приезд в деревню солдат на постой.

В следующем действии события примерно таковы:

1. Разговор Правдина с Милоном.
2. Встреча Милона со своей любимой Софьей.
3. Софье стало известно о планах Скотинина насчет ее.
4. Скотинин с Митрофанушкой ссорятся, поскольку оба желают получить в жены Софью.
5. Как занимается Митрофанушка.
6. Ссора между Простаковой и Еремеевной.

События третьего действия:

1. Драка.
2. Решается судьба Софьи.
3. Простакова хвалится Стародуму своим сыном.
4. Кутейкин и Цифиркин.
5. Учитель Вральман.
6. Насколько грамотен Митрофанушка.

В четвертом действии:

1. Софья читает книгу о воспитании светских дам.
2. На сцене снова жених. На этот раз Скотинин.
3. Простакова заботится об отдыхе Стародума.
4. Экзамен Митрофана.
5. Отказ Стародума отдать Софью за Митрофана.

В последнем действии происходит:

1. Софьи беседует с дядей о нравственных устоях.
2. Дядя дает согласие на брак Софьи и Милона.
3. Стародуму становится известно, что госпожа Простакова намеревалась насильно обвенчать сына и Софью, тайком от всех.
4. Правдин оглашает документ об опеке над имением Простаковых.
5. Стародум узнает во Вральмане своего кучера.
6. Стародум, его племянница и Милон отъезжают.
7. Разочарование Простаковой.

Для более подробного знакомства необходимо изучить краткий сюжет по действиям.

Содержание

Действие 1

Комедию начинает сцена, в которой хозяйка отчитывает Тришку за плохо сшитый кафтан для ее сына. Тришка отвечает, что сообщал ей о неумении делать эту работу. Барыня собирается наказать портного. Скотинин вмешивается в скандал, защищая Тришку, но портного прогоняют.

Далее происходит разговор с Митрофаном и том, как он спал ночью. Потом Митрофан убегает к голубям, а Скотинин с Простаковыми обсуждают что нужно выдать Софью за Скотинина.

У девушки никого, кроме дядюшки нет. Но тот уехал в Сибирь, не дает знать о себе. В беседе обнажается корыстная сущность Скотинина. Ему нужны свиньи в селах, принадлежащих Соне, и достаток.

Софья приходит с посланием от дяди. Простаковы пытаются убедить девушку, что письмо не мог написать Стародум. Когда Софья пытается их убедить в обратном, прочитав письмо самостоятельно, оказывается, что участники разговора не умеют читать. Письмо поручают прочесть вошедшему гостю, Правдину. Из этого послания становится известно, что Софья богата.

В этот момент слуга сообщает о расположившихся в деревне солдатах с командиром Милоном.

Действие 2

Оказывается Милон с Правдиным друзья. Они рассказывают друг другу о целях своего приезда.

Правдин приехал сюда по поручению государя сбить спесь с матушки недоросля. Милон едет в столицу на встречу с любимой, которую не видел несколько лет, поскольку ее забрали под опеку родственники после того, как ее родители умерли.

В это время мимо них проходит Соня. Именно она есть возлюбленная Милона. Девушка жалуется, что Простаковы хотят отдать ее замуж за глупого Митрофана.

Мимо проходят Митрофан и Еремеевна. Няня убеждает воспитанника учиться.

Действие 3

Приезжает Стародум, ему Правдин рассказывает о планах Простаковых относительно Софьи.

Тут подходит племянница, она рада встрече с дядей. За этот период произошла драка между Простаковой и Скотининым.

Простакова видит Стародума и дает указание Еремеевне позвать сына с мужем. Все семейство с напускной радостью приветствует дядюшку Софии, льстиво обнимают его. Митрофанушка повторяет слова матери.

Стародум сообщает, что забирает племянницу, чтобы выдать замуж. Простакова вместе со Скотининым пытаются убедить дядю, что лучше племянницу оставить здесь. Госпожа утверждает, что у них в семье учеба не уважаема, но Митрофанушка усердно занимается. Правдин говорит что гостю нужно отдохнуть. Все уходят по своим делам.

Остаются учителя Митрофана. Они беседуют о том, что Митрофан не желает обучаться ничему.

Входит Митрофан с матерью, которая упрашивает сына хоть немного позаниматься. Но когда Цифиркин задает задачи Митрофану, мать решает их за сына, но по-своему. А как только Кутейкин приступает к обучению юноши грамоте, приходит Вральман, начинает убеждать Митрофана в ненужности такого обучения. Его поддерживает мать.

Действие 4

Стародум беседует с племянницей. Дядя поясняет ей, что знатность и должна не по делам начисляться, а по тому, кто и сколько для отечества сделал. Говорит он о семье: муж с женой обязаны понимать и поддерживать друг друга.

В этом действии происходят события, которые приводят Стародума к решению выдать Софью за Милона.

Действие 5

Логический конец пьесы: Простаковым предстоит ответить за свои поступки и злодеяния.

Краткий пересказ Недоросля позволяет понять основную суть произведения даже тем, кто его не читал.

«Крылатые» высказывания Простаковой

Мать Митрофана сама малограмотна, не очень стремится к культуре речи. Она отрицательно влияет на воспитание сына. А цитаты из произведния говорят о ее характере. Вот, например, так она врет Стародуму о себе: «Отроду, батюшка, ни с кем ни бранивалась. У меня такой нрав».

Сына во время занятия с учителем арифметики она поучает так: «Нашел деньги, ни с кем не делись. Все себе возьми, Митрофанушка».

… «коли ученье так опасно для твоей головушки, так по мне перестань»

В результате ее любимый сынок вырос эгоистом, предает свою мать, показывая пример бессердечия.

Важно! Проблема воспитания всегда была и будет. Потому нынешнему читателю интересно и полезно будет изучить комедию. Она покажет, к каким последствиям может привести недостойное воспитание, заставит задуматься родителей и их детей.

Письмо Митрофану

Что бы написали современные школьники Митрофану? Попробуем привести один из примеров.

Здравствуй, Митрофан! Пишет тебе школьница из 2017 года. Я прочла комедию Недоросль и сделала вывод, что ты совершенно не стремишься ничего знать, не любишь учиться. Тебе неинтересна ни одна наука. Такое отношение к учебе недопустимо! В третьем тысячелетии без образования не прожить. Если ничего не знать и ничему не учиться, потом невозможно будет найти работу. А это не даст возможности заработать средства, чтобы можно было жить.

Таких глупых людей у нас не уважают. Да и в обществе невозможно будет адаптироваться. Я бы сказала тебе: «Учись, познавай мир. Это ведь так интересно!».

Комедия Фонвизина является знаковым произведением, показавшим острые проблемы общества, современного автору. В пьесе противопоставлены образованность, воспитание, принципы морали тупому невежеству, своенравным и злобным поступками помещиков. Тонкая сатира Фонвизина, его умение показать проблемы общества, позволяет даже сейчас с удовольствием читать комедию.

Краткое содержание, Недоросль

Денис Фонвизин, Недоросль

Вывод

В комедии Недоросль автор умело подводит к мысли, что заработать богатство можно, не теряя своей чести и человечности. А таким, как мать Митрофанушки все равно приходится платить за зло, которое они причинили другим.

Самая опасная игра: полное изложение сюжета

На яхте, направляющейся в Рио-де-Жанейро, пассажир по имени Уитни указывает на остров-ловушку вдалеке, место, которое моряки боятся и избегают. Он и его друг Рейнсфорд — охотники на крупную дичь, направляющиеся на охоту в бассейн реки Амазонки. Пока яхта плывет в темноте, двое мужчин обсуждают, действительно ли их жертва испытывает страх. Рейнсфорд считает, что мир состоит только из хищников и добычи, хотя Уитни не так уверен. Заметив нервозность экипажа, Уитни хочет как можно скорее проплыть мимо загадочного острова. Он предполагает, что моряки могут чувствовать опасность и что зло исходит волнами, подобными свету и звуку.

Затем Уитни решает лечь спать, но Рейнсфорд некоторое время курит трубку на корме. Внезапно он слышит три выстрела вдалеке и подходит к перилам палубы, чтобы исследовать ситуацию. Поднявшись на перила, чтобы попытаться лучше рассмотреть, Рейнсфорд роняет трубку, теряет равновесие, пытаясь поймать ее, и случайно ныряет в воду. Его крики о помощи остаются без ответа, и яхта быстро исчезает в ночи.

Рейнсфорд решает плыть в направлении выстрелов. Он слышит визг животного в агонии и направляется прямо к нему, пока крики не прерываются выстрелом из пистолета. Измученный, Рейнсфорд достигает скалистого берега и тут же засыпает глубоким сном. На следующий день он просыпается и отправляется на поиски еды, вынужденный огибать густые заросли джунглей и идти вдоль берега. Вскоре он подходит к окровавленному, вырванному участку растительности, где билось большое животное. Рядом он находит пустой винтовочный патрон.

Он идет по следам охотника в сгущающейся темноте и в конце концов натыкается на роскошный замок на краю пропасти, круто обрывающейся в скалистый океан внизу. Сначала Рейнсфорд думает, что замок — это мираж, пока не открывает железные ворота и не стучит в дверь. Иван, крепкий мужчина с ружьем, отвечает и отказывается помочь Рейнсфорду, пока другой человек, генерал Заров, не появляется из замка и не приглашает Рейнсфорда внутрь.

Зарофф тепло приветствует Рейнсфорда и просит Ивана показать ему комнату, где он сможет одеться к ужину. В огромном роскошном обеденном зале представлены многочисленные чучела и конные головы, трофеи, которые Зарофф привез из своих многочисленных охотничьих приключений по всему миру. Когда двое мужчин едят борщ, красный русский суп из свеклы, Рейнсфорд хвалит экземпляры своего хозяина, отмечая, насколько опасной может быть охота на капских буйволов. Зарофф заявляет, что теперь он охотится на гораздо более опасную дичь на своем острове. Он вспоминает прошлые охоты, от своего детства в Крыму до охоты на крупную дичь по всему миру, но продолжает описывать, как этот вид спорта со временем стал слишком легким.

Зарофф намекает, однако, что он нашел новый вид животных для охоты, обладающих отвагой, хитростью и разумом. Первоначальное замешательство Рейнсфорда превращается в ужас, когда он постепенно понимает, что генерал теперь охотится на людей. Зарофф не понимает возмущения Рейнсфорда, но обещает, что его возмущение утихнет, как только он начнет охоту. Рейнсфорд отклоняет приглашение Зарофа присоединиться к охоте той ночью и ложится спать. После беспокойной ночи бессонницы и легкой дремоты ранним утром его будит звук далекого пистолетного выстрела.

Генерал Зарофф снова появляется в замке во время обеда, огорченный тем, что охота на людей его больше не удовлетворяет. Он сетует, что моряки, которых он заманивает на остров, представляют все меньше и меньше проблем. Рейнсфорд требует немедленно покинуть остров, но генерал отказывается и заставляет Рейнсфорда стать его новой добычей на следующей охоте, надеясь, что Рейнсфорд, как известный охотник на крупную дичь, бросит вызов, который он ищет.

Зарофф обещает освободить Рейнсфорда, если тот проживет следующие три дня. Рейнсфорд отправляется в джунгли, получив от Ивана еду, одежду и нож. Он прокладывает сложный извилистый путь через подлесок, чтобы сбить с толку Зарова, а затем забирается на дерево, чтобы дождаться наступления темноты.

Зарофф легко находит Рейнсфорда, но позволяет ему сбежать, чтобы продлить удовольствие от охоты. Обеспокоенный тем, что Зарофф нашел его так быстро, Рейнсфорд бежит в другую часть джунглей и делает мину-ловушку, называемую малайским ловцом людей, чтобы убить Зароффа. Ловушка только ранит Зарова, который возвращается в замок и обещает убить Рейнсфорда следующей ночью.

Рейнсфорд бежит часами, пока по ошибке не ступает в зыбучие пески. Ему удается вырваться, затем он роет яму в мягкой грязи в нескольких футах от зыбучих песков. Он выстилает дно ямы острыми деревянными кольями, застилает его листвой, а затем прячется в зарослях неподалеку. Одна из охотничьих собак Зарова срывает капкан и падает насмерть, вынуждая Зарова снова вернуться в замок.

На рассвете Рейнсфорд слышит лай гончих и замечает вдалеке Зарова и Ивана с небольшой сворой охотничьих собак. Рейнсфорд соорудил еще одну ловушку, привязав свой нож к молодому деревцу.

Ловушка убивает Ивана, но гончие продолжают наступление, загоняя Рейнсфорда в угол на краю обрыва. Вместо того, чтобы столкнуться с собаками, Рейнсфорд прыгает в скалистое море внизу. Ошеломленный и разочарованный, Заров возвращается в свой замок. Когда он включает свет в своей спальне, он потрясен, обнаружив Рейнсфорда, спрятанного за пологом кровати. Перед тем, как они сразятся, Зарофф заявляет, что собаки съедят одну из них той ночью, а другая будет спать в удобной кровати. Позже Рейнсфорд приходит к выводу, что он никогда не спал в более удобной постели.

Повышенная продукция рекомбинантного белка в непрерывных культурах клеток СНО в условиях ингибирования роста связана с остановкой клеточного цикла в фазе G1/G0

. 2022 14 ноября; 17 (11): e0277620.

doi: 10.1371/journal.pone.0277620. Электронная коллекция 2022.

Вероника Авелло ^{1 2} , Мауро Торрес ^{3 4} , Маурисио Вергара ¹ , Хулио Берриос ¹ , Норма А Вальдес-Крус ⁵ , Кристиан Асеведо

2 6 7 , Мария Молина Сампайо ⁸ , Алан Дж. Диксон ^{3 4} , Клаудия Альтамирано ^{1 9}

Принадлежности

• ¹ Escuela de Ingeniería Bioquímica, Папский католический университет Вальпараисо, Вальпараисо, Чили.
• ² Centro de Biotechnologia, Технический университет Федерико Санта-Мария, Вальпараисо, Чили.
• ³ Манчестерский институт биотехнологии, Факультет науки и техники, Манчестерский университет, Манчестер, Соединенное Королевство.
• ⁴ Факультет химического машиностроения, Группа биохимических и биотехнологических разработок, Манчестерский университет, Манчестер, Соединенное Королевство.
• ⁵ Департамент молекулярной биологии и биотехнологии, Институт биомедицинских исследований, Национальный автономный университет Мексики, Сьюдад-де-Мехико, Мексика.
• ⁶ Центр научно-технических технологий Вальпараисо CCTVal, Технический университет Федерико Санта-Мария, Вальпараисо, Чили.
• ⁷ Кафедра физики, Технический университет Федерико Санта-Мария, Вальпараисо, Чили.
• ⁸ Centro de InmunoBiotechnologia, Чилийский университет, Сантьяго, Чили.
• ⁹ Centro Regional de Estudio en Alimentos Saludables, R17A10001, Вальпараисо, Чили.

• PMID: 36374852
• PMCID: PMC9662745
• DOI: 10.1371/journal.pone.0277620

Бесплатная статья ЧВК

Вероника Авелло и др. ПЛОС Один. 2022 .

Бесплатная статья ЧВК

. 2022 14 ноября; 17 (11): e0277620.

doi: 10.1371/journal.pone.0277620. Электронная коллекция 2022.

Авторы

Вероника Авелло ^{1 2} , Мауро Торрес ^{3 4} , Маурисио Вергара ¹ , Хулио Берриос ¹

, Норма А Вальдес-Крус ⁵ , Кристиан Асеведо ^{2 6 7} , Мария Молина Сампайо ⁸ , Алан Дж. Диксон ^{3 4} , Клаудия Альтамирано ^{1 9}

Принадлежности

• ¹ Escuela de Ingeniería Bioquímica, Папский католический университет Вальпараисо, Вальпараисо, Чили.
• ² Centro de Biotechnologia, Технический университет Федерико Санта-Мария, Вальпараисо, Чили.
• ³ Манчестерский институт биотехнологии, Факультет науки и техники, Манчестерский университет, Манчестер, Соединенное Королевство.
• ⁴ Факультет химического машиностроения, Группа биохимических и биотехнологических разработок, Манчестерский университет, Манчестер, Соединенное Королевство.
• ⁵ Департамент молекулярной биологии и биотехнологии, Институт биомедицинских исследований, Национальный автономный университет Мексики, Сьюдад-де-Мехико, Мексика.
• ⁶ Центр научно-технических технологий Вальпараисо CCTVal, Технический университет Федерико Санта-Мария, Вальпараисо, Чили.
• ⁷ Кафедра физики, Технический университет Федерико Санта-Мария, Вальпараисо, Чили.
• ⁸ Centro de InmunoBiotechnologia, Чилийский университет, Сантьяго, Чили.
• ⁹ Centro Regional de Estudio en Alimentos Saludables, R17A10001, Вальпараисо, Чили.

• PMID: 36374852
• PMCID: PMC9662745
• DOI: 10. 1371/journal.pone.0277620

Абстрактный

Низкая температура и бутират натрия (NaBu) являются двумя наиболее часто используемыми стратегиями повышения продуктивности в культурах клеток CHO при производстве биофармацевтических препаратов. Хотя эти два подхода изменяют баланс взаимосвязи между ростом и продуктивностью клеток, мы не до конца понимаем механизмы их действия, кроме общего ингибирования роста клеток. Здесь мы использовали непрерывную культуру для оценки дифференциального эффекта низкой температуры и добавок NaBu на производительность клеток CHO и профиль экспрессии генов. Мы обнаружили, что увеличение продуктивности клеток в условиях ингибирования роста было связано с остановкой клеток в фазе G1/G0. Анализ транскриптома показал, что молекулярные механизмы, с помощью которых низкая температура и NaBu останавливали клеточный цикл в G1/G0, отличались друг от друга из-за нарушения регуляции различных контрольных точек и регуляторов клеточного цикла. Индивидуальные изменения транскриптома в паттерне, наблюдаемые в ответ на низкую температуру и NaBu, сохранялись при объединении этих двух стратегий, что приводило к аддитивному эффекту остановки клеточного цикла в фазе G1/G0. Представленные здесь результаты предлагают новое молекулярное понимание регуляции клеточного цикла во время биопроцессинга клеток CHO и его последствий для увеличения производства рекомбинантных белков. Эти данные служат основой для разработки клеточных линий CHO с повышенной производительностью для непрерывного производства.

Авторские права: © 2022 Avello et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Заявление о конфликте интересов

w3.org/1998/Math/MathML» xmlns:p1=»http://pubmed.gov/pub-one»> Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Цифры

Рис. 1. Схематическое изображение культуры…

Рис. 1. Схематическое изображение условий культивирования при непрерывном культивировании.

БМ и НБ…

Рис. 1. Схематическое изображение условий культивирования в непрерывных культурах.

BM и NB соответствуют базальной среде с бутиратом натрия и без него соответственно. HD-37C-BM представляет собой контрольную культуру.

Рис. 2. Параметры культуры клеток CHO…

Рис. 2. Параметры культивирования непрерывных культур клеток СНО.

( белый ) без NaBu и…

Рис. 2. Параметры культивирования непрерывных культур клеток СНО.

( белый ) без NaBu и ( черный ) с NaBu. А) Плотность жизнеспособных клеток. Б) Удельная скорость роста. C) титр hr-tPA. D) Специфическая продуктивность клеток. E) Скорость потребления глюкозы. F) Скорость производства лактата. Статистический анализ параметров культуры подробно описан в таблице 1. Экспериментальные значения представляют собой среднее значение двух биологических повторностей ± SEM. HD, высокая степень разбавления; LD, низкая скорость разбавления; ГЖХ, глюкоза; ЛАК, лактат; NaBu, бутират натрия, hr-tPA, человеческий рекомбинантный тканевый активатор плазминогена. Профили клеточных культур CHO в стационарном состоянии представлены на рис. S2 в файле S2.

Рис. 3. Взаимосвязь между удельным ростом клеток…

Рис. 3. Взаимосвязь между удельной скоростью роста клеток и продукцией hr-tPA в культурах клеток CHO.

Рис. 3. Взаимосвязь между удельной скоростью роста клеток и продукцией hr-tPA в культурах клеток CHO.

( справа ) Хемостатные культуры без бутирата натрия; ( оставил ) Хемостатные культуры с бутиратом натрия. Каждая точка соответствует одной биологической повторности. Рассчитана корреляция Пирсона.

Рис. 4. Анализ клеточного цикла CHO…

Рис. 4. Анализ клеточного цикла клеток CHO в непрерывной культуре.

A) Процент ячеек…

Рис. 4. Анализ клеточного цикла клеток CHO в непрерывной культуре.

А) Процент клеток в фазе G1/G0. B) Процент клеток в S-фазе. C) Процент клеток в фазе G2/M. Экспериментальные значения представляют собой среднее значение двух биологических повторов ± SEM.

Рис. 5. Связь между распределением клеточного цикла…

Рис. 5. Взаимосвязь между распределением клеточного цикла и продукцией hr-tPA в клетках CHO.

А) Население…

Рис. 5. Взаимосвязь между распределением клеточного цикла и продукцией hr-tPA в клетках CHO.

A) Популяция в фазе G1/G0 в зависимости от титра hr-tPA. B) Население в фазе G1/G0 по сравнению с q _P . C) Популяция в фазе S в зависимости от титра hr-tPA. D) Население в фазе S по сравнению с q _P . E) Популяция в фазе G2/M в зависимости от титра hr-tPA. F) Население в фазе G2/M по сравнению с q _Р . Каждая точка соответствует биологической повторности определенного состояния культуры. Корреляции Пирсона рассчитывали с учетом каждого гена-мишени и их относительного титра/q _P , соответствующих условиям контрольной культуры (HD-37C-BM).

Рис. 6. Тепловая карта дифференциально выраженного…

Рис. 6. Тепловая карта дифференциально экспрессируемых генов.

Уровни экспрессии мРНК показаны на…

Рис. 6. Тепловая карта дифференциально экспрессируемых генов.

Уровни экспрессии мРНК показаны в Log2FC. Зеленые и красные прямоугольники представляют гены с пониженной и повышенной экспрессией соответственно. Гены были сгруппированы в определенные биологические пути. Анализ транскриптома находится в файле S1.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• Комбинированная генная и экологическая инженерия предлагает синергетическую стратегию для увеличения производства r-белка в клетках яичников китайского хомячка.

  Торрес М., Диксон А.Дж. Торрес М. и соавт. Биотехнология Биоинж. 2022 фев; 119 (2): 550-565. дои: 10.1002/бит.28000. Epub 2021 6 декабря. Биотехнология Биоинж. 2022. PMID: 34821376

• Повышение продукции рекомбинантного человеческого белка IL-24 (rhIL-24) из сайт-специфических интегрированных сконструированных клеток CHO путем обработки бутиратом натрия.

  Hua J, Xu H, Zhang Y, Ge J, Liu M, Wang Y, Wei Y, Shi Y, Hou L, Jiang H. Хуа Дж. и др. Биопроцесс Биосист Инж. 2022 Декабрь; 45 (12): 1979-1991. doi: 10.1007/s00449-022-02801-0. Epub 2022 25 октября. Биопроцесс Биосист Инж. 2022. PMID: 36282328 Бесплатная статья ЧВК.

• Использование низкомолекулярных ингибиторов клеточного цикла для контроля роста клеток и улучшения удельной продуктивности и качества продукта рекомбинантных белков в культурах клеток СНО.

  Du Z, Treiber D, McCarter JD, Fomina-Yadlin D, Saleem RA, McCoy RE, Zhang Y, Tharmalingam T, Leith M, Follstad BD, Dell B, Grisim B, Zupke C, Heath C, Morris AE, Reddy П. Ду Зи и др. Биотехнология Биоинж. 2015 Январь; 112(1):141-55. дои: 10.1002/бит.25332. Epub 2014 2 сентября. Биотехнология Биоинж. 2015. PMID: 25042542 Бесплатная статья ЧВК.

• Тезисы презентаций на собрании Ассоциации ученых-клиницистов 143 ^rd Луисвилл, Кентукки, 11–14 мая 2022 г.

  [Нет авторов в списке] [Нет авторов в списке] Энн Клин Lab Sci. 2022 май; 52(3):511-525. Энн Клин Lab Sci. 2022. PMID: 35777803 Аннотация недоступна.

• Детальное понимание повышенной гипотермической продукции гамма-интерферона клетками яичника китайского хомячка.

  Fox SR, Tan HK, Tan MC, Wong SC, Yap MG, Wang DI. Фокс С.Р. и др. Биотехнология Appl Biochem. 2005 г., июнь; 41 (часть 3): 255–64. DOI: 10.1042/BA20040066. Биотехнология Appl Biochem. 2005. PMID: 15504103

Посмотреть все похожие статьи

Рекомендации

1. 1. Торрес М. , Диксон А.Дж. Комбинированная генная и экологическая инженерия предлагает синергетическую стратегию для увеличения производства r-белка в клетках яичников китайского хомячка. Биотехнология Биоинж. 2021; 550–565. дои: 10.1002/бит.28000 — DOI — пабмед
2. 1. Хуан Ю.М., Ху В.В., Рустанди Э., Чанг К., Юсуф-Макагиансар Х., Рилл Т. Максимизация продуктивности периодической культуры на основе клеток СНО с использованием химически определенных условий среды и типичного производственного оборудования. Биотехнологическая прог. 2010; 26: 1400–1410. дои: 10.1002/btpr.436 — DOI — пабмед
3. 1. Хуссейн Х. , Фишер Д.И., Эббот В.М., Рот Р.Г., Диксон А.Дж. Использование стратегии белковой инженерии для преодоления ограничений в производстве рекомбинантных белков, «трудно экспрессируемых». Биотехнология Биоинж. 2017; 114: 2348–2359. дои: 10.1002/бит.26358 — DOI — пабмед
4. 1. Орлова Н.А., Ковнир С.В., Габибов А.Г., Воробьев И.И. Стабильная экспрессия фактора VIII на высоком уровне в клетках яичника китайского хомячка в улучшенной системе на основе фактора элонгации-1 альфа. БМС Биотехнология. Биотехнология БМК; 2017; 17: 1–15. doi: 10.1186/s12896-017-0353-6 — DOI — ЧВК — пабмед
5. 1. Альтамирано С.