Дефектный Г ₁ КПП в ТКО МЭФ на облучение и эктопию р19 ^Арф экспрессия. ( A ) γ-облучение вызвало остановку G ₂ /M в Rb ^−/− p107 ^−/− и TKO MEF.Проценты G ₁ , S и G ₂ /M фаз клеточного цикла в необлученных и облученных (5,5 Гр) MEF были измерены с помощью анализа FITC-PI FACS и нанесены на график. как точечные диаграммы FL3-A (ось X ) – FL1-H (ось Y ). ( B ) Эктопическая экспрессия p19 ^Arf индуцирует зависимую от карманного белка G ₁ остановку. FACS-анализ GFP-позитивных Rb ^−/− , руб. ^−/− p107 ^-/- и TKO MEF, экспрессирующие векторную плазмиду, доминантно-негативный вариант CDK2, или p19 ^Arf (1. 0 или 5,0 мкг) вместе с конструкцией экспрессии гистона h3B-GFP в соотношении 10 : 1. Репрезентативные результаты трех независимых показаны опыты.

Наконец, мы спросили, чувствительны ли MEF с дефицитом семейства Rb к остановке G ₁ после эктопической экспрессии p19 ^ARF .Клетки подвергали электропорации и анализировали с помощью FACS. Во-первых, мы обнаружили, что введение CDK2 доминантно-негативного белка увеличивало в г ₁ населения на столько же в руб ^−/− , руб. ^−/− p107 ^-/- и TKO MEF (рис. 6B). Эктопическая экспрессия p19 ^ARF индуцировала подобную остановку G ₁ в клетках, лишенных pRB или как pRB, так и p107. Напротив, в TKO MEF остановка G ₁ лишь незначительно индуцировалась p19 ^ARF по сравнению с эффектом CDK2 ^dn (фиг. 6B). Вместе с наблюдением, что удаление семейства генов Rb вызывает иммортализацию, несмотря на нормальные уровни белков INK4A и функционального p53, этот результат указывает на то, что карманные белки являются важными медиаторами реакции старения на p19 ^ARF .

Инактивация карманных белков приводит к повышенному клеточному обороту в условиях ингибирования роста

Клетки TKO в значительной степени устойчивы к ингибированию роста p19 ^ARF .Поэтому мы исследовали поведение этих клеток в ряде других ингибирующих рост условий.

Истощение фактора роста

MEF были высеяны при низкой плотности, снабжены 0,1% сывороткой и проанализированы с помощью BrdU-FACS. Клетки Wt и Rb ^-/- сильно арестованы, о чем свидетельствует скопление клеток в G ₁ и блокирование синтеза ДНК (рис.7А). Ответ руб. ^−/− p107 ^-/- МЭФ был менее выражен, хотя уровень синтеза ДНК все же значительно снижался по сравнению с 10% сывороткой (см. также рис. 3А). Напротив, TKO MEF продолжали включать BrdU почти с той же скоростью, что и в условиях высокого содержания сыворотки. Удивительно, но в этих условиях увеличения числа клеток при длительном культивировании не наблюдалось (рис.7Б). Появление плавающих клеток в среде через 24 ч после нанесения низкой сыворотки свидетельствовало о том, что клетки стали апоптотический. Действительно, анализ PI-FACS выявил значительную суб-G ₁ популяцию в TKO MEF через 24 часа после добавления низкой сыворотки, увеличивающуюся до 10% популяции через 4 дня (рис. 7C). Опять же, руб. ^−/− p107 ^-/- показали промежуточный фенотип. Мы не наблюдали увеличения популяции многоядерных MEF, что указывает на то, что непрерывные Включение BrdU не происходило в результате эндоредупликации (данные не показаны).

Повышенный клеточный оборот в TKO MEF в условиях ингибирования роста. ( A ) Распределение фаз G ₁ , S и G ₂ /M указанных MEF при 0,1% FCS. ( B ) Кривые роста указанных MEF при 0,1% FCS. ( C ) Процент апоптотических клеток в указанных культурах MEF при 0.1% FCS, 24 ч (черный) и 96 ч (серый) после истощения факторов роста. Проценты были получены путем определения популяции sub-G ₁ на гистограмме FL3A-log. ( D ) Распределение фаз G ₁ , S и G ₂ /M указанных контактно-ингибируемых MEF. ( E ) Процент апоптотических клеток в контактно-ингибированных культурах MEF. Указаны средние значения трех независимых экспериментов. в процентах.Столбики погрешностей указывают на стандартные отклонения от среднего значения ( A,C,D,E ).

Блокировка контактов

Другим внеклеточным сигналом, который провоцирует остановку G ₀ /G ₁ в нормальных фибробластах, является межклеточный контакт при слиянии (Nilausen and Green 1965).Было показано, что это явление, известное как контактное ингибирование, сопровождается повышением уровня p27 ^KIP1 и снижением уровня циклина D1 (Polyak et al. , 1994; St. Croix et al., 1998). Кроме того, накапливались гипофосфорилированные изоформы pRb, указывая на то, что pRB необходим для остановки G ₁ . Для изучения роли карманных белков в контактном ингибировании MEF выращивали до слияния и культивировали в течение дополнительного времени. 4 д. Синтез ДНК измеряли с помощью BrdU-FACS. Опять же, делеция всех карманных белков выявила серьезный дефект в установлении a G ₀ /G ₁ арест (рис.7Д). Вместо этого TKO MEF продолжали включать BrdU и генерировать апоптотические клетки (фиг. 7E).

Условия неприлипания

Независимость от прикрепления является характеристикой большинства онкогенно трансформированных типов клеток и была приписана конститутивным циклин E- (Fang et al. 1996) или A- (Guadagno et al. 1993) зависимая активность CDK2.В незлокачественных клетках остановка роста в неадгезивных условиях была связана с потерей циклина. Активность E-CDK2 (Fang et al., 1996) и недофосфорилирование pRB и p107 (Schulze et al., 1996). Однако мы обнаружили, что TKO MEF, хотя и дают очень маленькие колонии, содержащие до 20 клеток, не способны к устойчивой пролиферации в мягком агаре. (Таблица 1). Это указывает на то, что абляция активности карманных белков недостаточна для роста в неадгезивных условиях и предполагает что потеря активности CDK2 может вызвать остановку роста, независимую от карманных белков.Эта точка зрения согласуется с нашим наблюдением что клеток TKO все еще могут быть заблокированы удалением активности CDK2 (фиг. 6B). Зависимость от якоря TKO MEF согласуется с их неспособностью расти под кожей голых мышей (не показано), демонстрируя, что эти клетки не трансформируется.

Immortal TKO MEF не растут самостоятельно

В заключение, полная аблация семейства генов Rb не делает возможным рост, не зависящий от привязки; однако он серьезно нарушает остановку клеточного цикла в ответ на истощение факторов роста и контактное ингибирование.В этих ингибирующих рост условиях клетки с дефицитом карманного белка подвергаются повышенный оборот клеток.

Обсуждение

Мы создали линию клеток ЭС, несущих инактивирующие нарушения во всех трех членах семейства генов ретинобластомы, и обнаружили что это сильно ограничивало их дифференцирующую способность. При MEF полная абляция семейства карманных белков серьезно скомпрометирован G ₁ контроль. Наиболее ярко это проявилось в обнаружении того, что MEF с тройным нокаутом были бессмертными и устойчивыми в непрерывном режиме. пролиферация и апоптоз в условиях ограничения роста.

Дифференциация

ES-клеток имеют очень высокую скорость пролиферации (время удвоения 7–8 ч), а в пролиферирующей популяции около 70% клеток были обнаружены в S-фазе (Savatier et al.1994). Саватье и др. (1996) сделали неожиданное наблюдение, что недифференцированные ЭС клетки не содержат обнаруживаемой активности циклина D1/CDK4 и являются нечувствителен к ингибированию роста p16 ^INK4A . Более того, ES клетки не экспрессируют p130 (LeCouter et al. 1996), тогда как pRB и p107 могут быть легко обнаружены (Robanus-Maandag et al. 1998). По-видимому, в ЭС клетках антипролиферативные эффекты pRB и p107 нейтрализованы, возможно, наличием Е1А-подобного активности (E1A-LA), как предполагалось ранее (Murray et al.1991). Резкое увеличение активности циклина D1/CDK4 при индукции дифференцировки, вероятно, отражает контроль pRB/p107/p130. пути становятся активными. Наши наблюдения полностью согласуются с этой точкой зрения: абляция семейства pRB не влияла на потенциал роста ЭС клеток, но серьезно нарушил их дифференцирующий потенциал. Таким образом, необходимы карманные белки. для дифференцировки ЭС клеток. Более того, поскольку как ЭС клетки с дефицитом pRB/p107 (данная работа), так и ЭС клетки с дефицитом p130 (не показан) показал нормальную мышечную и нейрональную дифференцировку при тератокарциномах, p130 может компенсировать отсутствие pRB и стр.107.

Несмотря на их ограниченную способность к дифференцировке при помещении под кожу бестимусных мышей, клетки TKO ES, введенные в бластоцисты, не демонстрировали неограниченную пролиферацию, но вместо этого были способны способствовать эмбриональному развитию. развитие по крайней мере до 15-го дня беременности, что позволяет получить ТКО МЭФ. Это наблюдение может свидетельствовать о том, что дифференцировка в определенные типы клеток, например, в фибробласты, не требует карманно-белковая функция.Более интригующей является возможность того, что дифференцировка клеток TKO в химерных эмбрионах направляется и контролируется окружающими клетками дикого типа. В любом случае в процессе разработки клетки, по-видимому, приобрели характеристики, которые, в отличие от их эмбриональных стволовых клеток-предшественников, препятствуют их росту. закрепление самостоятельно или под кожей голых мышей.

Увековечение

В первичных фибробластах человека и мыши длительное культивирование генерирует ингибирующий рост сигнал, который в конечном итоге приводит к состоянию репликативного старения, отражаемого увеличенной, уплощенной морфологией и отсутствием синтеза ДНК (Hayflick and Moorhead 1961; Todaro and Green 1963; Campisi 1997). Этот тип остановки роста сопровождается постепенным повышением уровней ингибиторов CDK2/4, p21 ^CIP и p16 ^INK4A , ингибитора клеточного цикла p19 ^ARF и p53 (Lloyd et al., 1997; Palmero et al. 1997; Зинди и др., 1997, 1998). p16 ^INK4A и p19 ^ARF кодируются одним генетическим локусом, Ink4a , при этом p19 ^ARF экспрессируется из альтернативной рамки считывания (Quelle et al. 1995). В то время как p16 ^INK4A , как было показано, действует выше pRB, способствуя остановке клеточного цикла (Serrano et al.1993), p19 ^ARF может физически взаимодействовать с p53 и/или MDM2, тем самым противодействуя функции MDM2 и стабилизируя p53 (Kamijo et al. 1998; Pomerantz et al. 1998; Zhang et al. 1998). Спонтанная иммортализация MEF обычно сопровождается делецией локуса Ink4a (Kamb et al., 1994; Nobori et al., 1994; Kamijo et al., 1997; Zindy et al., 1998) или потерей функции p53 (Harvey and Levine). 1991; Риттлинг и Денхардт, 1992). Кроме того, Ink4a ^−/− и стр.53 ^−/− MEF бессмертны.Эти наблюдения предполагают, что индукция белков INK4A и p53 причинно связана с индукцией старение. Однако мыши и MEF, лишенные только p19 ^ARF , показали фенотип, неотличимый от фенотипа, возникающего в результате разрушения локуса Ink4a , отменяющего как p16 ^INK4A , так и p19 ^ARF . Хотя последствия удаления одного p16 ^INK4A неизвестны, это предполагает, что путь p19 ^ARF /p53, а не p16 ^INK4A /pRB, отвечает за индукцию старения.

Теперь мы показываем, что MEF с дефицитом pRB, p107 и p130 бессмертны, не могут быть арестованы эктопической экспрессией p19 ^ARF и не поддерживают делеции локуса Ink4a или мутации в p53 при длительном пассировании. Кроме того, MEF с дефицитом pRB/p107 можно считать бессмертными: хотя они реагируют на супрафизиологические уровни p19 ^ARF при аресте G ₁ , после адаптации к культивированию in vitro они сохраняли умеренную, но постоянную скорость пролиферации при длительном проход.Эти наблюдения показывают, что как старение, индуцированное p19 ^ARF , так и остановка клеточного цикла требуют членов семейства pRB. Таким образом, остается вероятным, что оба продукта локус Ink4a участвует в индукции старения, p16 ^INK4A не является достаточным, но способствует активации карманных белков с помощью p19 ^ARF (Carnero et al. 2000). Как p19 ^ARF передает сигналы семейству pRB, остается неясным. Бессмертный фенотип p53 ^-/- MEFs предполагают, что этот путь зависит от p53.Однако p19 ^ARF -p53-индуцированное старение не реализуется через p21 ^CIP -индуцированное ингибирование циклина E/CDK2, как p21 ^−/− и стр. 21 ^−/− стр.27 ^-/- MEF все еще подвергаются старению и/или реагируют на сверхэкспрессию p19 ^ARF (Pantoja and Serrano 1999; Groth et al. 2000). Кроме того, наши данные показывают, что TKO MEF не блокируются в G ₁ сверхэкспрессией p19 ^ARF , хотя они все еще могут быть заблокированы ингибированием активности CDK2 при экспрессии доминантно-негативного действующий мутант CDK2.Таким образом, возникает картина, в которой p19 ^ARF индуцирует старение через семейство pRB, но независимо от p21 ^CIP , опосредованного ингибированием активности циклина E/CDK2. Является ли связь между р19 ^ARF и семейством генов Rb зависимой от р53, остается неясным. В отличие от одного отчета (Kamijo et al. 1997), в другом показано, что p19 ^ARF может вызывать остановку клеточного цикла у p53 . ^-/- MEF, которые могут быть ослаблены гиперэкспрессией E2F-1 или блокировкой функции p16 ^INK4A (Carnero et al. 2000). Эти данные свидетельствуют о том, что p19 ^ARF может нацеливаться на путь pRB независимо от p53. Единственной известной мишенью p19 ^ARF является MDM2, который может связывать p53, но также и pRB (Xiao et al. 1995) и, таким образом, может быть кандидатом на опосредование соединения p19 ^ARF /pRB.

Роль карманных белков в онкогенной трансформации

Экспрессия так называемых трансформирующих онкогенов, таких как онкогенный RAS (Palmero et al.1998) и v-Abl (Radfar et al. 1998) сильно повышает уровень p19 ^ARF . Это активирует p53-зависимую контрольную точку, которая защищает клетки от аномальной митогенной передачи сигналов, индуцируя репликативную арестовать. MEF, лишенные функции p19 ^ARF или p53, больше не восприимчивы к этому типу защиты; они избегают репликативного старения и становятся онкогенно трансформируется (Harvey and Levine 1991; Harvey et al. 1993; Kamijo et al.1997). Было показано, что избыточная экспрессия другого класса онкогенов, таких как MYC, аденовирус E1A и E2F-1, в MEF усиливает пролиферацию. но также и апоптоз (Lowe and Ruley 1993; Hermeking and Eick 1994; Wagner et al. 1994; Qin et al. 1994; Querido et al. 1997). Апоптоз значительно усиливается при лишении клеток внеклеточных факторов выживания (Evan et al., 1992; Lowe and Ruley, 1993) и зависит от функционального пути p19 ^ARF -p53, который не включает функцию p21 ^CIP (Lowe et al.1994 год; Вагнер и др. 1994 год; Бейтс и др. 1998 год; Де Станчина и др. 1998 год; Зинди и др. 1998). Поведение клеток, экспрессирующих MYC или E1A, очень напоминает поведение клеток с тройным нокаутом: абляция карманного белка повышала пролиферативную способность клеток, но и их чувствительность к апоптозу: в частности, в условиях низкая сыворотка или высокая плотность. Вырисовывается картина, что p19 ^ARF действует как сенсор аномальной или противоречивой митогенной передачи сигналов и активирует р53-зависимый ответ, который может вызвать остановка клеточного цикла или сенсибилизация клеток к апотозу. Поведение клеток с тройным нокаутом указывает на то, что это решение зависит на функции карманных белков. В их присутствии клетки останавливаются; при их отсутствии, например, путем генетической абляции, секвестрации с помощью E1A или ингибирования после избыточной экспрессии MYC (Berns et al. 2000; Lasorella et al. 2000) клетки становятся бессмертными, но также очень чувствительными к апоптозу.

Действительно, мы наблюдали, что культивирование MEF с тройным нокаутом в условиях, ограничивающих рост, легко индуцирует апоптоз.Однако в то же время наблюдалась продолжающаяся пролиферация клеток. Таким образом, при определенных условиях, ограничивающих рост, потеря функции карманного белка обеспечивает непрерывный клеточный оборот без чистого увеличения числа клеток. Мы предвидим эту потерю функции карманных белков in vivo может также привести к увеличению оборота клеток, что значительно облегчило бы приобретение дополнительных онкогенных явлений. Несколько наблюдений поддерживают этот сценарий.Например, условная инактивация Rb в гипофизе мыши приводили к увеличению клеточного обмена. Опухоли, по-видимому, возникают из клеток, в которых происходит апоптоз. был заблокирован, по-видимому, посредством дополнительной мутации (Vooijs et al. 1997). Кроме того, инактивация членов семейства pRB в эпителии головного мозга мыши большим Т-вариантом Т121 индуцировала аберрантные пролиферацию и р53-зависимый апоптоз. Инактивация p53 в этих условиях привела к резкому снижению апоптоза. (Инь и др.1997). Мы предполагаем, что избыточность карманных белков в контроле клеточного цикла зависит от типа клеток. Например, в мышке гипофизе p107 и p130 могут не экспрессироваться или не функционировать, компенсируя потерю pRB, тогда как в сетчатке мыши как pRB, так и p107 активны, и, следовательно, потеря обоих белков необходима для поддержания длительного обновления клеток в конечном итоге. приводящее к развитию ретинобластомы (Robanus-Maandag et al.1998).

В заключение мы определили три характеристики, связанные с потерей функции карманных белков, которые могут обеспечить обоснование его частого участия в раке человека. Это снижение способности к дифференцировке, потеря старения. реакция и повышенный оборот клеток в условиях, ограничивающих рост. Мы ожидаем, что тщательное изучение судьбы ЭС клетки, несущие одиночные или сложные мутации с потерей функции в семействе генов Rb у химерных мышей, позволят лучше понять роль абляции карманных белков в онкогенезе.

Материалы и методы

Получение ЭС клеток с дефицитом pRb, p107 и  p130

pRb, p107 и p130 были получены в эмбриональных стволовых клетках 129Ola (E14/IB10). Нацеливающие векторы 129Rb-hyg, 129Rb-his и 129p107-IRESβgeo были описаны (te Riele et al.1992 год; Робанус-Маандаг и др. 1998). Для инактивации p130 мы создали нацеливающую конструкцию 129p130-pur, в которой кассета PGK-пуромицина была введена в кодон 405, находящийся в А-домене области кармана (LeCouter et al. 1996). При электропорации и отборе при концентрации пуромицина 1,8 мкг/мл гомологичные рекомбинанты были получены с частотой 80%. Оставшийся аллель p130 был инактивирован отбором при высоких концентрациях пуромицина (14 мкг/мл). с130 ^-/- мышей были созданы с использованием химерных мышей, дающих передачу по зародышевой линии.

Генерация MEF с дефицитом pRb, p107 и  p130

химерных эмбриона получали путем инъекции мутантных ЭС клеток в бластоцисту C57Bl/6 возрастом 3,5 дня. Эмбрионов мы выделили 12 d после имплантации и введения в культуру.Вкратце, эмбриональную ткань без органов промывали в PBS, измельчали ​​и инкубировали. в 100 мкл трипсина/ЭДТА в течение ночи на льду, а затем 30 мин при 37°C с дополнительными 100 мкл трипсина/ЭДТА. Мутантные MEF были выбран на 48 часов с 800 мкг/мл G418. Эти клетки были обозначены как пассаж 1. Нехимерные культуры MEF, служащие контролем, все умерли в течение 48 часов после отбора.

Культура клеток ЭС, получение и характеристика  тератокарцином

ЭС клеток культивировали, как описано (Robanus-Maandag et al.1998). Бестимусным мышам подкожно вводили 10 ⁶ ЭС клеток. Опухоли удаляли через 4 недели после инъекции, фиксировали в фосфатно-буферном формалине, заливали в парафин, делали срезы. при 5 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином по стандартным методикам. Для иммуногистохимической характеристики регидратированные срезы окрашивали антителами против глиального фибриллярного кислого белка (GFAP, DAKO), низкоаффинного нервного рецептор фактора роста (p75 ^LNGFR , Chemicon International), специфичную для нейронов энолазу (NSE, DAKO) и маркер пролиферации Ki-67 (MIB-5, Immunotech).Фракция пролиферирующих клеток определяли путем подсчета Ki-67-позитивных клеток в шести различных областях среза тератокарциномы. при увеличении 160х.

Культивирование MEF, кривые роста, протокол 3T9 

MEF культивировали в GMEM (GIBCO) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1 мМ заменимых аминокислот, 1 мМ пирувата натрия, и 0. 1 мМ β-меркаптоэтанол. Для кривых роста MEF высевали в количестве 2,5 × 10 ⁴ клеток на 12-луночный планшет в трех экземплярах. В разные моменты времени клетки промывали PBS, фиксировали 5 мин в 4% растворе формальдегида. и окрашивали 0,1% раствором кристаллического фиолетового (Sigma) в дистиллированной воде в течение 30 мин. После двукратного промывания клеток водой, им дали высохнуть. Окрашивание клеток получали добавлением 1 мл 10% уксусной кислоты на лунку. Оптическая плотность была измерено 100 мкл полученного окрашивания при 590 нм.Значения нормированы на оптическую плотность в день 0.

Протокол 3T9 выполняли путем посева 3 × 10 ⁵ клеток на 6-луночный планшет в трех повторностях. Культуры инкубировали при 37°С в течение 3,5 сут и определяли общее количество клеток. с использованием счетчика клеток (Casy 1) с последующим повторным посевом 3 × 10 ⁵ клеток. Этот протокол был повторен 20 раз.

Электропорация МЭФ

МЭФ выращивали в чашках диаметром 10 см до субконфлюэнтности.От одной до 2 × 10 ⁶ клеток ресуспендировали в 100 мкл буфера для электропорации (2 мМ Hepes при pH 7,2, 15 мМ K ₂ HPO ₄ /KH ₂ PO _{4 9018 и 10 мМ 4 9218). мМ MgCl 2 ) при 37°С. Клеточную суспензию смешивали с плазмидной ДНК (экспрессирующей плазмидой гистона h3B-GFP [Kanda et al. 1998] вместе либо с доминантно-негативным вариантом CDK2 [Van den Heuvel and Harlow 1993], либо с pcDNA- p19 ^Arf . в соотношении 1 : 10) и переносили в кювету для электропорации (0.1 см, Биорад). Через 5 мин инкубации при комнатной температуре клетки подвергали электропорации с помощью радиочастотного модуля Gene Pulser II/Gene Pulser II (Biorad). Через пять минут электропорация клетки переносили в 8 мл среды при 37°C и высевали в 10-см чашку. Чтобы измерить влияние на G 1 , электропорированные клетки блокировали в G 2 /M нокодазолом (0,5 мкг/мл) через 32 часа после электропорации в течение 16 часов. Клетки трипсинизировали и ресуспендировали в 250 мкл 0.1% Triton X-100 и 50 мкг/мл йодида пропидия в PBS. Для каждого образца с помощью FACS (FACscan, Becton Dickinson) и проанализировали их распределение по клеточному циклу с помощью программы CellQuest (Becton Dickinson).}

Анализ FACS

Распределение MEF в клеточном цикле определяли путем инкубации MEF с 5-бромдезоксиуридином (0.3 мкг/мл) плюс 5-фтор-5-дезоксиуридин (0,03 мкг/мл) в течение 5 часов. Клетки собирали и ресуспендировали в 70% спирте при 4°C, окрашивали мышиным антителом DAKO против BrdU. и подготовлены для анализа FACS, как описано в Brugarolas et al. (1995).

Для анализа размера клеток культуры трипсинизировали, фиксировали в 70% спирте при 4°C, окрашивали йодидом пропидия и анализировали. с помощью FACS, как описано у Brugarolas et al.(1998).

Анализ белка

Уровни белка определяли вестерн-блоттингом в соответствии с установленными протоколами. Антитела против pRB (C-15), p107 (C-18), p130 (C-20), p16 ^INK4A (M-156), CDK4 (C-22), циклин E (M-20), p21 ^CIP (C-19) и p53 (FL-393) были получены от Санта-Крус; антитело p19 ^ARF (R562) было получено от Abcam.Козьи антикроличьи и козьи антимышиные вторичные антитела были получены от Biosource.

Облучение МЭФ

После того, как 5 × 10 ⁵ клеток были высеяны на 10-сантиметровые чашки, их на следующий день облучили γ-излучением в дозе 20 Гр. Клеточные лизаты готовили через 24 ч и анализировали на Вестерн-блоттинге.

Для анализа клеточного цикла клетки облучали 5.5 Гр. Через 14 ч клетки инкубировали с BrdU/FdU в течение 4 ч и анализировали. по ФАКС.

Анализ на мягком агаре

В GMEM, содержащем 10% сыворотки, 3 × 10 ⁴ клеток ресуспендировали в 2 мл 0,4% агарозы с низкой температурой плавления (Sigma) и высевали в двух повторностях в шестилуночные планшеты, покрытые с 1% агарозы с низкой температурой плавления в GMEM, содержащей 10% сыворотки.Количество очагов подсчитывали через 2 нед.

Благодарности

Мы благодарим Karin van ‘t Wout и Karin van Veen-Buurman за инъекции бластоцисты и инъекции ES-клеток голым мышам; Эльс Робанус-Маандаг и Марлин Деккер за предоставление рублей ^−/− ES-клетки и векторы-мишени; Kees de Goeij, Dennis Hoogervorst и Jurjen Bulthuis за гистотехническую помощь; Мартин ван дер Валк для гистологического исследования тератокарциномы; Thijn Brummelkamp для экспрессионной плазмиды pcDNA-p19 ^ARF ; Чарльз Шерр и Фредерик Зинди за стр. 19 ^{Арф −/−} MEF; Джос Джонкерс для p53 ^−/− MEF; Рональд ДеПиньо для Ink4a ^−/− MEF; Эрик Нотебум и Анита Пфаут за помощь в анализе FACS; и Реувен Агами, Даниэль Пипер и Рене Бернар для полезные обсуждения и критическое прочтение рукописи.Работа выполнена при поддержке Нидерландского онкологического фонда. через проектный грант NKI 95–956 для H.t.R. (Дж.-Х.Д., А.в.Р., Л.С.).

Затраты на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страниц. Таким образом, эта статья должна быть настоящим помечены как «реклама» в соответствии с разделом 1734 18 USC исключительно для обозначения этого факта.

Сноски

• ↵1 Автор, ответственный за переписку.

• ЭЛЕКТРОННАЯ ПОЧТА hriele{at}nki.nl; ФАКС 31-20-512-2086.

• Статья и публикация находятся на сайте www.genesdev.org/cgi/doi/10.1101/gad.847700.

• • Поступила в редакцию 1 сентября 2000 г.
  • Принят 25 октября 2000 г.
• Лабораторный пресс в Колд-Спринг-Харбор

Wind Cave NP: Путеводитель (1940)

ПЕЩЕРА ВЕТРОВ Путеводитель 1940 г.

Район Блэк-Хиллз в Южной Дакоте, где Ветер Пещерный национальный парк имеет захватывающую историю создания земли. рассказать.Интерес к ней варьируется от древних отложений окаменелостей, погребенных в Бесплодные земли, рассказывающие историю о доисторических аллигаторах, носорогах, трехпалых лошадей, и других давно вымерших животных, к высокой «игле» образования, которые эрозия вылепила из массивов гранита высоко покрытые лесом склоны Черных Холмов.

Пещера Ветра находится в великом известняке Пахасапа. формация, которая также содержит несколько других крупных подземных пещер. Факты об открытии пещеры малоизвестны, но это обычно считается, что он был открыт Томом Бингхэмом, уроженцем Блэк-Хиллз. пионером во время охоты на оленей в 1881 году.Его привлек странный насвистывая и пошарив в подлеске, он обнаружил что это было вызвано ветром, убегающим через небольшое отверстие в некоторых скалах. Эта дыра, не более 10 дюймов в диаметре, является единственным естественным вход в пещеру до сих пор обнаружен. Он находится в нескольких шагах позади нынешний вход в пещеру.

Сильные потоки ветра, которые дуют попеременно в и из устья пещеры предложил свое имя. Это странно явление, как полагают, вызвано изменениями в атмосферном давление снаружи.Когда барометр падает, обычно дует ветер наружу; когда он поднимается, дует ветер. Многим посетителям нравится останавливаться у входа в пещеру вывешивать себя по погоде.

Нынешнее отверстие в пещере было сделано путем раскопок около 6 футов до длинной извилистой трещины или туннеля, ведущего в коридоры и галереи украшены разнообразными кристаллическими образованиями. Эти образования радикально отличаются от тех, что встречаются в большинстве пещер. потому что сталактитов и сталагмитов здесь практически нет. пещера, особенность, которая добавляет ей уникальности.Здесь образования относятся к необычному коробчатому и морозостойкому типу. Коробка состоит из нежно окрашенных кристаллов, расположенных в виде сот. Крошечный белый кристаллы, иногда накладывающиеся на розовый фон, висят гроздьями с потолков и карнизов, образуя редкостной красоты морозное украшение. Протяженность пещеры составляет примерно 10 миль, но она не была полностью исследована. исследовал.

Национальный парк Винд-Кейв был создан актом Конгресс от 9 января 1903 г.Его границы были впоследствии расширен, и теперь он включает в себя площадь 11 818,94 акра. Как и все остальные национальные парки это заповедник дикой природы. буйвол, лось, антилопа и олени обитают в этом районе, и их часто можно увидеть с главной дороги.

ВХОД В ВЕТРОВУЮ ПЕЩЕРУ

КРАСОЧНАЯ ИСТОРИЯ

В дополнение к своей естественной красоте и научному интерес, юго-западная часть Южной Дакоты имеет красочный и живописная история.Возможно, французский исследователь пробрался туда как еще в 1683 году, и, как говорят, его посетили братья Верендри. в 1743 г.

Индейцы сиу, племя заметное даже среди Индейцы за силу и отвагу давно оккупировали этот регион и только подчиняется белому поселению после ожесточенной и трагической борьбы. Этот племя, как полагают, произошло к востоку от Alleghenies, но как уже в 1632 году французы нашли их в Висконсине и Миннесоте.Некоторые из их потомки сегодня живут на Пайн-Ридж и в индейском районе Роузбад. Бронирование, в нескольких минутах езды от парка Wind Cave.

Согласно индийской легенде, четыре ветра были главных божеств равнинных племен, а ветер ассоциировался в их вере с дыханием жизни и жизненным принцип. Поэтому Пещера Ветров была для них священным местом. Многие У племен Равнин были мифы, в которых рассказывалась история о том, как буйвол впервые вышел из пещеры (это была объективация тот факт, что всякая плоть сделана из земли), и вождь Джозеф Белый Бык (Pte Сан Хунка), живущий племянник Сидящего Быка, сказал, что Сиу верили, что Пещера Ветра в Блэк-Хилс была пещерой откуда Вакан Танка, Великая Тайна, отправила их в сиу Охотничьи угодья.Это была одна из причин, почему сиу так упорно боролись за Блэк-Хиллз, когда они были захвачены белыми. У начальника тоже есть сказал, что некоторые из его людей все еще надеялись, что, когда они вернут себе милости своих богов буйволы снова выйдут из этой пещеры и заполнить равнины. ¹

---

¹ «Тропа войны», Стэнли Вестал.

---

Тучи войны, закончившейся конфликтом 1861-65 гг. и индейские восстания под предводительством Красного Облака, Сидящего Быка, Пятнистый Хвост и другие великие воины мешали развитию этого области, но в 1874 году экспедиция через Блэк-Хиллс под руководством ген.Джордж А. Кастер привел к открытию золота на Френч-Крик и заселение последовало быстро. С 1879 по 1886 год были дни бума, которые сделали легендарные фигуры таких первопроходцев, как Дикий Билл Хикок, Дедвуд Дик, Бедствие Джейн и Проповедник Смит. Все четверо похоронены в Дедвуд.

Задолго до того, как Черные Холмы были известны живописной красоты, которая привела к созданию Государственного парка Кастер в сердце этого труднопроходимого региона, и строительство было начато на Мемориал Рашмора, регион был известен во всем мире своими полезные ископаемые, особенно золото.Шахта Хоумстейк в Лиде — это Крупнейший золотой рудник в США. В 1933 году почти четверть Золотодобыча США происходила из Черного Холмы. С момента начала добычи в 1875 г. общее количество золота составило около В этом регионе было добыто 300 000 000 долларов. Некоторые из других полезных ископаемых, найденных в регионе, представляющих экономическую ценность, — это серебро, свинец, медные, железные, оловянные и вольфрамовые руды; колумбит, танталит, слюда, минералы мышьяка, лития и цезия; фуллерова земля, бентонит, вулканический пепел, уголь, нефть и конструкционные материалы.

ГЕОЛОГИЧЕСКАЯ ИСТОРИЯ ВЕТРОВОЙ ПЕЩЕРЫ

Пещеры в целом можно разделить на три деления в зависимости от породы, в которой они образовались. Они могут образоваться в известняке, магматических породах или песчанике. Из эти известняковые пещеры являются наиболее важными и наиболее часто посещаемыми. большой размер. Пещера Ветра представляет собой известняковую пещеру.

Слой известняка, в котором образовалась Пещера Ветра. Мощность варьируется в районе Блэк-Хиллз от 300 до 630 футов. Это известен как известняк Пахасапа, местное образование в Миссисипи. возраст отложился в большом внутреннем море около 300 миллионов лет назад. Следующий отложения этого известняка, он был поднят над морем. Несколько таких периодов подъема и опускания произошло во время геологическая история.В эти периоды погружения Пахасапа известняк был перекрыт другими отложениями на несколько сотен футов в глубину. толщина. Окончательный взброс суши, вероятно, произошел во время последняя часть мелового периода, около 60 миллионов лет назад. То начало образования Пещеры Ветра, вероятно, датируется этим время.

Известняк, подвергшийся нескольким таким периоды поднятия или искривления становятся трещиноватыми или сломанными. Эти трещины развиваться во всех направлениях и под всеми углами. Близкие вместе служили как шаблон для характерной «коробки», сформированной в следующих манера: дождевая вода, просачивающаяся с поверхности через разлагающиеся растительность поглощает углекислый газ, что делает воду более растворимой для известняка. Эта содержащая углекислый газ вода уносит часть известняка в раствора, затем при испарении откладывает его в трещины или щели ниже. Позже более растворимый известняк между ребрами коробки был растворился, оставив форму коробки такой, какой она видна сегодня.

ТИПОВОЙ ПРИМЕР ФОРМИРОВАНИЯ КОРОБКИ

ДИКАЯ ЖИЗНЬ

Еще одна новая достопримечательность в Национальном парке Пещеры Ветра. представляет собой демонстрацию представителя дикой природы того типа дичи, которая бродила холмы Дакота в первые дни. Защищенный здесь от охотника, путешественник найдет большое стадо бизонов и небольшие группы антилоп, лось и олень.

Посетители обычно могут получить близкий, беспрепятственный вид стада бизонов с главной магистрали, которая вьется по холмистой местности холмы парка. Вся территория парка огорожена забором, который удерживает животных от блуждания по диапазону. Это следует помнить что игра дикая и с ней нельзя обращаться как с домашними животными. это поэтому неразумно выходить из машины или приближаться к любому из игровые животные.

В этом парке вся дикая природа представлена ​​в естественном виде. среда обитания, давая зрителю острые ощущения от наблюдения за дикими животными в открыто, а не из-за заборов или решеток.

Небольшие группы антилоп часто можно увидеть на внимательный наблюдатель. Лоси часто посещают открытые части парка во время ночь, поздний вечер и раннее утро. В течение дня они вернуться к бревенчатым участкам. Олень обычно остаются в лесу, но иногда их можно увидеть пересекающими луга.

КАРТА ПОДЗЕМНЫХ МАРШРУТОВ — НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПАРК ПЕЩЕРА ВЕТРОВ
(нажмите на изображение, чтобы открыть PDF-версию)

ШТАБ-КВАРТИРА ПАРКА, РАСПОЛОЖЕННАЯ СРЕДИ РОЛЛИНГ-ХИЛС

ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Национальный парк Винд-Кейв находится в ведении Служба национальных парков Министерства внутренних дел США, и представителем этого бюро, отвечающего за парк, является Гарри Дж. Лиек, суперинтендант. Его адрес: Хот-Спрингс, С. Дак.

ПУТЕШЕСТВИЕ В ПЕЩЕРУ.— Все путешествия по пещере запрещены. под руководством компетентных смотрителей парка. Входные билеты такие следует:

Этот прейскурант включает использование лифта на выездная поездка.

Путешествие по пещере мало чем отличается от обычного поход по горной тропе. Следует носить удобную обувь для ходьбы. Температура 47° и не меняется зимой или летом. это желательно взять легкий свитер или куртку. Пещера электрически освещенный.

ОБСЛУЖИВАНИЕ ЛИФТОВ.—В 1935 г. для удобства посетителей в пещере был установлен лифт.Это избавляет от необходимости вылезать из пещеры.

ОБРАЗЦЫ ОБРАЗЦОВ. Образцы образований из пещера выставлена ​​в здании штаб-квартиры для изучения и общий осмотр со стороны общественности. Обращение с формациями пещеры или сбор сувениров строго запрещен.

Летом также проводится выставка полевых цветов. поддерживается. Он включает в себя все распространенные виды флоры Блэк-Хиллз для местность.Сбор цветов в парке без разрешения администрации суперинтенданта строго запрещено.

РАЗМЕЩЕНИЕ. — Нет отелей или туристических домиков. расположены в парке, а общественный палаточный лагерь с бесплатными дровами и вода поддерживается возле штаб-квартиры. Столовая и предоставляются услуги газировки. Товары для отдыхающих, диковинки и различные статьи доступны.

Горячие источники — южный вход в Черное море. Холмы.Это в 10 милях к югу от национального парка Винд-Кейв в США. Шоссе № 85А. Это почтовое отделение парка и хорошие отели. лагеря и гаражи. В Хот-Спрингс есть национальный санаторий и государственный солдатский дом и известен как живописный город Черного Холмы.

СТАДА ЗУБРОВ ЧАСТО ВИДЕЛИ С ШОССЕ

КАК ДОБРАТЬСЯ В ПАРК

НА АВТОМОБИЛЕ. Национальный парк Пещеры Ветра открыт. Шоссе США No.85A, и до него можно добраться боковыми рейсами из либо по шоссе № 16 США в Кастере, либо по шоссе № 1. 87 через Государственный парк Кастер.

ПО ЖЕЛЕЗНОЙ ДОРОГЕ.—До парка можно добраться с следующие железнодорожные станции: Хот-Спрингс, Чикаго, Берлингтон и Куинси и Чикагские и Северо-Западные железные дороги; Прингл и Кастер на железной дороге Чикаго, Берлингтона и Куинси; и Баффало-Гэп, Чикаго и Северо-Запад. Пассажиры желающие посетить Национальный парк Винд-Кейв в качестве дополнительной поездки из Эджмонта или Buffalo Gap (28 и 14 миль соответственно от Хот-Спрингс) может остановиться закончились экскурсионные билеты. Из многих восточных пунктов билеты в Национальные парки Йеллоустоун или Глейшер хороши для прохождения Эджмонт.

НА АВТОБУСЕ. Хот-Спрингс обслуживается компанией Black Hills. Транспортная компания из Шайенна, штат Вайоминг, на юг через Рапид. Город, С. Дак. В Шайенне установлены связи с Берлингтоном. Транспортная компания и межгосударственные транзитные линии. С востока и До северных Хот-Спрингс можно добраться через Рапид-Сити через Рапид-Сити. Линии, линии Red Ball и автобусные линии Palace City от Huron, Mitchell, и Су-Фолс, С.Дак. Из Бисмарка, Северная Дакота, центральная автобусная линия обслуживает Пьера, S. Dak., соединяющийся с линиями Rapid City Lines для Rapid City и Hot. Пружины.

НА САМОЛЕТЕ.— Высокоскоростные роскошные самолеты. со всех точек до Шайенна можно добраться через United Air Lines. Wyoming Air Service, выполняющая рейсы из Пуэбло, штат Колорадо, в Биллингс, штат Монтана, также останавливается в Шайенне.

МОСТ НА ТРОП, ВЕДУЩИЙ К ВХОДУ В ПЕЩЕРУ

ДОСТОПРИМЕЧАТЕЛЬНОСТИ

Рейнджеры на стойке информации парка помогут в планирование поездки по Черным Холмам, а также дать информацию о другие национальные парки.В путешествии около 300 миль много интересных мест, включая Башню Дьявола, Пещеру Драгоценностей, Национальные памятники Fossil Cycad, Scotts Bluff и Badlands, Кастер Государственный парк, три национальных леса, федеральные и государственные рыбоводные заводы, а также можно посетить птичий заповедник.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПАМЯТНИК ДРАГОЦЕННАЯ ПЕЩЕРА, переданный Службе национальных парков из Лесная служба Указом Президента от 1 апреля 1934 г. открыт для публики в июне, июле и августе.Это 14 миль к западу от Кастера по шоссе 16. В пещере есть ряд переходы и небольшие помещения, стены которых облицованы кальцитом кристаллы.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПАМЯТНИК ИСКОПАЕМОГО ЦИКАДА, созданный в 1922 году для сохранения крупных залежей ископаемых остатки папоротниковидных растений, которые росли много миллионов лет назад в Мезозойский период, расположен на южной окраине Блэк-Хиллз, недалеко от Пещеры Ветра. Памятник находится в нескольких милях от г. шоссе и не доступен для автомобилей, кроме как через частную собственность.Поскольку этот район представляет интерес в основном для палеоботаников и геологов, в настоящее время не находится в открытом доступе. Хороший образец интересная окаменелость выставлена ​​​​в национальном парке Wind Cave. штаб-квартира.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПАМЯТНИК БЕДРОДОВ.— Резкий контраст в зеленой стране Блэк-Хилс находятся бесплодные земли Уайт-Ривер, бесплодная безлесная местность недалеко к юго-востоку от Пещеры Ветра. Здесь природа украсила землю всеми оттенками желтовато-коричневого, кремового, бледно-зеленый, золотой и розовый.Фантастически вырезанные эрозионные формы возвышаются над долинами, некоторые из них высотой от 150 до 300 футов. постоянно меняющийся цвет и странные образования делают этот регион сильным образное обращение.

БАШНЯ ДЬЯВОЛА НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПАМЯТНИК. Еще один необычный природный феномен страны Черных Холмов – Башня Дьявола через границу штата в Вайоминге. Это большая масса изверженной породы возвышается на 600 футов над рекой Бель-Фурш.

АДМИНИСТРАТИВНОЕ ЗДАНИЕ Грант фото

ГЛОССАРИЙ

Краткое описание технических терминов, используемых в этот буклет и посетители через направляющую пещеру рейнджеров:

АРАКОНИТ (4 ¹ ) — Минерал, который представляет собой одну из форм карбоната кальция (CaCO ₃ ), белого или окрашенного, который часто встречается в виде составных или излучающих групп кристаллов.

BOXWORK (3 ¹ ) — уникальные соты образование пещеры Ветра, состоящей из кальцита с небольшим количеством гематит.

КАЛЬЦИТ (3 ¹ ) — Минерал, представляющий наиболее распространенная форма карбоната кальция, которая вскипает в кислоте. Образования в известняковых кавернах состоят в основном из кальцит.

CHERT (7 ¹ ) — очень твердый, аморфный форма кремнезема, которая часто встречается вместе с известняком.В Пещера Ветра кремень содержит ископаемые породы.

КОНКРЕТ — Округлый агрегат минерального вещество, образованное осаждением или отложением вокруг некоторого ядра (не образование пещеры).

КОНГЛОМЕРАТ — осадочная горная порода, состоящая в основном из сцементированного окатаного гравия.

МЕЛОВОЙ — последний период мезозоя. эпоха.

КАПЕЛЬНИК (3 ¹ ) — неправильной формы отложения карбоната кальция, выпадающие в осадок при испарении вода, просачивающаяся сквозь стены пещеры; сталактиты и сталагмиты иногда называют капельным камнем.

ERA — основное подразделение зарегистрированных геологических время.

РАЗЛОМ — Смещение или движение горных массивов. по плоскости излома,

FLOWSTONE (3 ¹ ) — карбонат кальция (CaCO ₃ ) отложения, образующиеся в результате осаждения из капельной или проточной воды в основном по стенам.

ИСКОПАЕМЫЕ Остатки или следы древних животные или растения, сохранившиеся в осадочных породах, такие как раковины или следы животных или птиц.

FROSTWORK (3 ¹ ) — хрупкий заполнитель кристаллов кальцита, напоминающих иней; вообще чисто белый.

МАГНИТНЫЕ ПОРОДЫ — Горные породы, образованные охлаждение и затвердевание расплавленного каменного материала.

ИЗВЕСТНЯК (4 ¹ ) — осадочная горная порода. состоит в основном из карбоната кальция. Он может быть произведен компанией действием водорослей и беспозвоночных или осаждением кальция карбонат из воды.

МЕТАМОРФИЧЕСКИЕ ПОРОДЫ — магматические или осадочные породы изменяется под воздействием тепла и давления. Сланец представляет собой метаморфизованный сланец, а мрамор метаморфизованный известняк.

МИССИСИПИАН — период палеозойской эры.

ОБНАЖЕНИЕ — обнажение породы на поверхности.

ПАЛЕОЗОЙ — третья великая эра письменных геологическое время. Время большого развития беспозвоночных, рыб, и папоротниковидные деревья. Эпоха обычно подразделяется на семь периодов: Кембрийский (самый старый), ордовикский, силурийский, девонский, миссисипский, Пенсильванский и Пермский.

ОСАДОЧНЫЕ ПОРОДЫ — Породы, образованные накоплением осадок в воде или на суше; может состоять из сланца, известняка, песчаник, окаменелости, гипс или лёсс.

СТАЛАКТИТЫ — известняковые конусы, свисающие с крыши известняковых пещер и образованы известковыми водами которые просачиваются через крышу.

СТАЛАГМИТЫ — Структуры, подобные сталактитам, которые развиваются на дне известняковых пещер и растут вверх за счет приростов от воды, капающей на них с потолка пещеры.Обычно больше тупее, чем сталактиты.

ТРАВЕРТИН (3 ¹ )——кальций карбонат (CaCO ₃ ), осажденный из раствора родниками или проточная вода. Охватывает многие виды отложений.

---

Шкала твердости минералов:
1-тальк
2-гипс
3-кальцит
4-флюорит
5-Апатит
6-Ортоклаз
7-кварц
8-Топаз
9-Корунд
10-ромб

---

ПРАВИЛА И ПОСТАНОВЛЕНИЯ

ПРАВИЛА ПАРКА предназначены для охраны природных красот и пейзажей, а также для комфорта и удобство посетителей.Следующий синопсис предназначен для общего руководство посетителями, которых просят помочь администрации соблюдая правила. С полным регламентом можно ознакомиться в офисе суперинтендант и рейнджер станции.

УСЛУГИ ГИДОВ.— Никому не разрешается входить пещера, если только в сопровождении суперинтенданта или другого парка наемный рабочий.

ПОЖАРЫ. Зажгите осторожно и в специально отведенных местах. места. Полностью погасить перед выходом из лагеря, даже при временном отсутствии. Делать не догадывайся, что твой огонь погас — знай это.

ЛАГЕРЯ. Используйте специально отведенные кемпинги. Держать кемпинги чистые. Горючий мусор сжигают на кострах и весь остальной мусор и отходы всех видов должны быть помещены в мусор банки или ямы, предусмотренные для этой цели. Мертвая или упавшая древесина может быть использована для дрова.

МУСОР.—Не выбрасывайте бумагу, обеденный мусор, кодак. картонные коробки, бумага от жевательной резинки или другой мусор на ободе или на прогулочных дорожках, тропы, дороги или что-то еще.Носите, пока не сможете сгореть в лагере или месте в приемнике.

АВТОМОБИЛЬНЫЕ СРЕДСТВА. Осторожное вождение обязательно. раз для защиты себя и других посетителей. Твоя машина должны быть оснащены хорошими тормозами, звуковым сигналом и светом. Переход по кривым запрещено. Соблюдайте правила дорожного движения. Тракторы с проушинами или транспортные средства без шин строго запрещены.

PARK RANGERS. Рейнджеры здесь, чтобы помочь и советую вам. Если вы сомневаетесь, спросите рейнджера.Рейнджеры в штаб-квартире парка будем рады помочь вам спланировать свою деятельность в Пещере Ветра и объясните правила.

КАМЕРЫ.— Фото- и кинокамеры могут свободно используется в общих сценических целях.

ПЕЩЕРА ВЕТРОВ ОТКРЫТА ДЛЯ ПУБЛИЧНОСТИ
КАЖДЫЙ ДЕНЬ В ТЕЧЕНИЕ ГОДА.

Апрель Выставка — Галерея Dedee Shattuck

ЗАЯВЛЕНИЕ ХУДОЖНИКА

Sacred Geographies

Я получил приглашение принять участие в выставке Solastalgia как раз в тот момент, когда ущелье реки Колумбия было подожжено.Воздух над Портлендом уже несколько недель был густым от дыма от пожаров, полыхающих от Канады до Калифорнии, окрашивающих луну в зловещий оранжево-красный цвет, покрывающих все пеплом и заставляющих тех из нас, у кого нет кондиционера, держать окна закрытыми, несмотря на 30-градусную жару. понижение температуры ночью, что позволило бы нам охладить наши перегретые дома. Но этот пожар имел гораздо более глубокое воздействие, потому что пожар в Игл-Крик поразил нас в самое сердце. Для большого сообщества Портленд-Ванкувер ущелье реки Колумбия является и домом, и убежищем.Он переносит нас, заземляет нас, возвышает нас, определяет нас. А Игл-Крик был самым сердцем Ущелья. Дом первого кемпинга в Национальной лесной системе с 1916 года, Игл-Крик был типичным местом ущелья, предлагая захватывающие дух виды и культовый водопад Панчбоул. Но теперь безрассудные действия импульсивного подростка угрожали нашему убежищу и нашей коллективной идентичности. Я дважды пролетел над огнем за первые две недели, пока он горел. На этот раз вид, который во всех предыдущих случаях сначала вызывал у меня грусть при уходе, а затем радушно приветствовал меня дома, теперь был окутан дымом.Все, о чем я мог думать, это то, что мы никогда не будем прежними.

Однако после того, как первоначальный шок прошел, массовое излияние коллективного горя, захлестнувшее сообщество, стало казаться почти потакающим своим желаниям. Кто мы такие, чтобы жалеть себя из-за этой потери, и это была действительно огромная потеря, когда так много других людей по всему побережью потеряли свои дома, средства к существованию и даже свои жизни? Да, мы потеряли, возможно, самый драгоценный камень, по крайней мере временно, но уж точно не всю корону драгоценностей.И независимо от того, как он начался, огонь был естественным явлением. Как быстро напомнили нам ученые, на самом деле это было бы хорошо для здоровья леса, важное событие перезагрузки.

В то же время уровень язвительности в адрес невольного поджигателя казался столь же неискренним. Самодовольное осуждение очень важного, но необдуманного поступка не учитывало нашу коллективную ответственность и вред, который мы, как некоренное сообщество, наносили этому удивительному месту на протяжении более 150 лет.По крайней мере, с тех пор, как в 1881 году были построены первые железные дороги, мы как общество и наш образ жизни представляли наибольшую угрозу для этого почитаемого места. Наши сложные отношения с ущельем реки Колумбия изменили экосистемы, разрушили традиционные культуры и оставили бесчисленные шрамы на ландшафте из-за лесозаготовок, автомагистралей, плотин, судоходства, ядерных отходов и даже парков, а также недавнего быстрого роста рекреационных походов.

Четыре произведения, составляющие серию под названием «Священная география», являются ответом на драматические события осени 2017 года и на противоречивые связи, которые мы поддерживаем даже с нашими самыми священными местами.«Река», «Гора», «Дерево» и «Огонь» отражают красоту мира природы и наши порой необдуманные попытки принадлежать этому миру.

Как пережить сезон змей, даже если вас укусят

25 мая 2018 г. — Добро пожаловать в сезон змей. Когда погода потеплеет, змеи начнут выползать из своих зимних убежищ и, что неизбежно, пересекаются с людьми. Такие встречи могут закончиться поездкой в ​​отделение неотложной помощи.

«В течение весенних и летних месяцев число (посещений скорой помощи, связанных с укусами змей) удваивается, утраивается, а может быть, даже превышает это число», — говорит Дайан Калелло, доктор медицинских наук, доцент кафедры неотложной медицины в Медицинской школе Рутгерса, Нью-Джерси, США. Ньюарк.«Это, безусловно, феномен теплой погоды».

По оценкам CDC, ежегодно в США ядовитые змеи кусают до 8000 человек. Такие укусы редко бывают смертельными. Ежегодно они убивают около пяти человек. Но змеиный яд может нанести серьезный вред.

«Яд вызывает боль и отек и, возможно, образование волдырей в месте укуса, а также повреждает ткани», — говорит Брет Никс, доктор медицинских наук, профессор неотложной медицины в Wake Forest Baptist Health в Уинстон-Салеме, Северная Каролина. «Большие количества могут вызвать внутреннее кровотечение.

В США ядовитые змеи делятся на два типа: гадюки и коралловые змеи.

Ямковидные гадюки имеют много общих физических черт, таких как треугольные головы, вертикальные зрачки и ямка между ноздрями и глазами. Змеи в этой категории включают:

• Гремучие змеи: в США обитает множество видов гремучих змей. Информационно-образовательная система по ядам Джерси.
• Медноголовые змеи: Эти ядовитые змеи живут в основном на востоке США, но их среда обитания простирается на запад до Техаса. «Если вас укусит ядовитая змея, вам нужна именно эта, потому что она мало что для вас делает», — говорит Никс.
• Вольфрамовые змеи (также известные как водяные мокасины): Виттонмутовые змеи обитают на юго-востоке США. Они любят находиться рядом с водой.

Коралловые змеи, говорит Никс, живут в основном во Флориде и Джорджии. Они черные и красные с белыми или желтыми полосами.

Змеиный яд

На долю гадюк приходится гораздо больше укусов, чем на коралловых змей, но укусы любой из них не всегда ядовиты. Когда они есть, количество яда может варьироваться. Это связано с тем, что змеи контролируют выброс своего яда: чем большую угрозу они воспринимают, тем опаснее их укус. Никс говорит, что каждый четвертый укус гадюки «сухой» или не содержит яда, в то время как 50% укусов коралловых змей доставляют яд.

Вы узнаете, что вас отравила гадюка, если вокруг места укуса появится боль и опухоль.По словам Калелло, змеи чаще всего грызут лодыжку или руку, и симптомы распространяются вверх по ноге или плечу соответственно.

Яд гадюки содержит множество различных соединений, говорит она. Вместе они разрушают ткани и расщепляют белки, которые позволяют вашей крови сворачиваться. Как повреждение тканей, так и кровотечение способствуют отеку.

«Отек и разрушение могут произойти в течение часа, — говорит Калелло, — но повреждение, как правило, не является постоянным, если его лечить.”

При отсутствии лечения повреждение тканей будет ухудшаться. Это может привести к потере конечности или пальцев, говорит Никс, представитель Американского колледжа врачей скорой помощи.

«Если у вас достаточно яда, чтобы вызвать большое количество повреждений тканей, он может стать гангренозным, когда ткань отмирает», — говорит он.

Укусы коралловых змей имеют несколько непосредственных признаков того, что вы были отравлены. До появления серьезных симптомов может пройти от 12 до 18 часов. Яд, содержащий нейротоксины, влияет на способность мозга контролировать мышцы тела.Ваша речь может стать невнятной, и вам может быть трудно глотать. Вы также можете получить слабые мышцы, помутнение зрения и паралич. В конечном итоге яд может затруднить дыхание. Это может привести к летальному исходу, но с 1960-х годов была зарегистрирована только одна смерть от коралловой змеи. Укусы этих змей случаются не часто. Во Флориде, где коралловые змеи наиболее распространены, токсикологические центры ежегодно принимают менее 50 случаев.

Передовой опыт

Что делать — и чего не делать — если вас укусила змея:

• DO Как можно скорее обратитесь в отделение неотложной помощи.Даже если укус не ядовит, вы рискуете заболеть столбняком, серьезной бактериальной инфекцией, если ваша прививка не сделана вовремя.
• DO Как можно меньше двигайте конечностью в месте укуса. Это поможет замедлить распространение яда.
• DO Обратите внимание на внешний вид змеи. Ваше описание поможет врачу определить, что вас укусило. (Ваше местоположение также будет подсказкой. )
• DO Запишите время укуса, чтобы врач знал, сколько времени прошло.
• DO Снимите все украшения с места укуса до того, как начнется отек.
• DO При необходимости используйте Тайленол от боли.
• DO Держите под рукой контактную информацию токсикологической службы. Позвоните по номеру 800-222-1222 или отправьте сообщение POISON на номер 797979, чтобы сохранить номер в своем телефоне.
• НЕ ДЕЛАТЬ Пытаться поймать или убить змею. Вы рискуете получить второй укус.
• НЕ ДЕЛАТЬ Попытаться высосать яд. Это не работает, говорит Калелло, и подвергает вас риску попадания яда в рот.
• НЕ ДЕЛАТЬ Принимайте аспирин, ибупрофен или другие болеутоляющие средства, разжижающие кровь.
• НЕ ДЕЛАТЬ Наложить жгут. По словам Калелло, перекрытие притока крови к месту укуса может привести к большему повреждению тканей.

Лечение

Лечение укуса змеи зависит от вида змеи и степени вашей реакции на яд. В легких случаях может потребоваться только очистка места укуса и наблюдение, чтобы убедиться, что вы не причините дальнейшего вреда.Возможно, вам также возьмут кровь, чтобы проверить наличие проблем со свертываемостью крови, вызванных ядом.

В дополнение к первой помощи, наблюдению и анализам крови, лечение более серьезных укусов требует противоядия, которое нейтрализует действие змеиного яда, чтобы ваша кровь могла нормально сворачиваться.

«Существующее противоядие действительно отлично справляется с уменьшением боли и отека в краткосрочной перспективе и улучшением долгосрочных результатов», — говорит Никс.

Противоядие от коралловой змеи также весьма эффективно, но его больше не производят, а запасы истощаются.По данным FDA, текущий запас противоядия коралловой змеи истекает 31 января 2019 г. вспомогательное дыхание. Никс говорит, что отделение неотложной помощи должно координировать свои действия с местным токсикологическим центром, чтобы выяснить, доступно ли противоядие. К счастью, укусы коралловых змей случаются редко.

Противоядие может вызвать немедленную аллергическую реакцию, поэтому вы будете находиться под наблюдением по мере его получения.У некоторых пациентов наблюдается отсроченная реакция, называемая сывороточной болезнью, до 3 недель после введения противоядия. Симптомы включают лихорадку, крапивницу, зуд и боль в суставах.

Ожидайте от 6 до 24 часов наблюдения в больнице, говорит Никс. И будьте готовы к дискомфорту после ухода.

«Симптомы могут длиться в среднем от 1 до 2 недель после лечения», — говорит Калелло.

Профилактика

Конечно, лучше вообще избегать укусов змей, и вы можете сделать это, не провоцируя их.

«Змеи, найденные в США, не агрессивны и кусают только тогда, когда чувствуют угрозу», — говорит Никс. — Они не ищут тебя.

Никс и Калелло рекомендуют следующее в стране змей:

• Обращайте внимание на то, куда вы идете. Змея, скорее всего, не укусит, если вы не наступите на нее.
• Избегайте употребления алкоголя, чтобы сохранять бдительность. (И умно, добавляет Никс: «Выпивка может привести к тому, что вы схватите змею и развернете ее».)
• Берите с собой трость, чтобы постукивать по земле перед собой.Если змея почувствует угрозу, она с большей вероятностью нападет на палку.
• Носите ботинки и длинные брюки, чтобы защитить лодыжки.
• Ночью наденьте налобный фонарь или фонарик, чтобы увидеть змей до того, как вас ждет неожиданная встреча.

%PDF-1.4 % 49 0 объект >>>/BBox[0 0 531 657]/длина 120>>поток хА 0DlB=A.jk$oyfpdFAP А%еҰКНɧɧ==}jYl»7 m*c)l3]O}Il~8 конечный поток эндообъект 25 0 объект >>>/BBox[0 0 531 657]/длина 120>>поток хА 0D1B=А.͋U;ccJ|gU)O$fCpM~œeE)\\~|Igom−~#I конечный поток эндообъект 33 0 объект >>>/BBox[0 0 531 657]/длина 120>>поток хА 0DlB=A.jk$oyfpdFAP А%еҰКНɧɧ==}jYl»7 m*c)l3]O}Il~8 конечный поток эндообъект 51 0 объект >>>/BBox[0 0 531 657]/длина 120>>поток хА 0DlB=A.jk$oyfpdFAP А%еҰКНɧɧ==}jYl»7 m*c)l3]O}Il~8 конечный поток эндообъект 37 0 объект >>>/BBox[0 0 531 657]/длина 120>>поток хА 0DlB=A.