Краткая биография Гоголя | Сочинение и анализ произведений, биографии, образ героев

Примеры кратких биографий Николая Васильевича Гоголя

Вариант №1

Биография Н.В. Гоголя кратко

Гоголь Н.В. (01.04.1809) родился в Полтавской губернии в семье не зажиточной семье. Родители Николая Васильевича были помещиками и хотели для него достойного образования, которое он и получил в Нежинской гимназии. В отрочестве у молодого писателя проявились разносторонние таланты, в том числе литературный. 

В Петербург Гоголь переезжает в 1828 году и в скором времени печатается под псевдонимом В. Алоев. Однако самые первые труды успеха у читателей не имели. Там же он имеет знакомство с А.С. Пушкиным. Эта встреча оказалась для молодого писателя судьбоносной и сыграла в его судьбе ключевую роль. 

В середине 19 века он посещает Иерусалим, и возле гроба господня просит у господа вдохновения. Второй том «Мертвых душ» Гоголь сжег. Это случилось с 11 по 12 февраля 1852 года, а спустя всего десять дней, автор многих замечательных литературных трудов скончался (21 февраля (4 марта)). На обряде похорон присутствовали тысячи поклонников его творчества. 

Сокращенная биография Николая Васильевича Гоголя

Великий русский писатель Н. В. Гоголь родился в семье небогатого помещика (20.03 (1 апреля))1809 года на Полтавщине. У родителей Гоголь-Яновских он был третьим ребенком. С ранних юношеских лет, будущий литератор, проявлял увлеченность к различным гуманитарным наукам. 

После того как он переехал в Петербург, молодой сочинитель служил чиновником, пробовал свои силы в актерском искусстве, но большую часть времени занимался литературным творчеством. В 1831 году завязывает знакомство с А. С. Пушкиным. Эта встреча стала знаковой в его судьбе. 

Первое сочинительство, которое было замечено в больших, читательских массах – переработанное произведение «Басаврюк» ныне известное как «Вечер накануне Ивана Купала». 

Писатель много путешествовал. Он побывал в Италии, Германии, Франции, Швейцарии. Перед кончиной, Николай Васильевич страдал творческим кризисом. Возможно, этот факт послужил толчком к сожжению второго тома «Мертвых душ». Гоголь скончался 21 февраля 1852 года. 

Вариант №3

Биография Николая Васильевича Гоголя в сокращении

Гоголь родился в селе Большие Сорочинцы Миргородского уезда в 1809 году (1 апреля (20 марта)). Николай Васильевич появился на свет в литературной семье. Его родителями были Василий Афанасьевич и Мария Ивановна.

Гоголь — третий ребенок многодетной семьи, но, несмотря на это, в доме всегда царила гармония и любовь к прекрасному. Детство Коля провел в имении. Там же начал писать свои первые стихи. 

Его обучение началось в Полтавском уездном училище, а позже он поступил в Нежинскую гимназию. Молодой писатель мечтает о карьере юриста, но не прекращает любить литературу. Также проявляет интерес к актерскому искусству. 

Спустя некоторое время Гоголь понимает, что юридическая карьера не приносит ожидаемых плодов. Не все гладко складывается и в актерском искусстве, да и первые произведения – поэма «Идиллия в картинках» встречает в широких массах непонимание и насмешки. 

После знакомства с Пушкиным, Жуковским, всерьез задумывается о карьере писателя. В 1831 – 1832 гг. печатается произведение «Вечера на хуторе близ Диканьки», а когда вышла вторая часть — Николай Васильевич становится популярным. 

Гоголь Николай Васильевич, краткая биография

Николай Васильевич Гоголь прожил короткую, но насыщенную событиями, жизнь. О нём и по сей день много говорят, на его произведениях выросло не одно поколение, они пользуются спросом в школах, на их основе создаются художественные картины. Имя этого писателя, безусловно, оставило значительный след в истории.

Детство

В 1809 году, весной 20 марта, в семье простого помещика Гоголя родился мальчик, которого стали величать Николаем, по отчеству — Васильевичем. Его семья проживала в небольшом местечке Полтавской губернии. Тогда оно называлось Великие Сорочинцы.

Детство будущего писателя проходило недалеко от села Диканька, там у его родителей было собственное имение. Творческую натуру в маленьком Гоголе раскрыл его отец, который являлся поклонником искусства и театра, сочинителем комедий и стихов. Образование мальчик получал в стенах дома.

Юность

По окончании домашнего обучения, Гоголь 2 года провёл в уездном училище Полтавской губернии, после чего благополучно поступил в гимназию г. Нежин. Это учреждение было создано для обучения провинциальных дворянских детей.

Юный Гоголь здесь научился рисовать, играть на сцене и на скрипке. В своём будущем он видел себя юристом, мечтая вершить правосудие. Но литература взяла верх над его мечтами.

Несмотря на неудачные пробы, которые он провалил в декабре, после окончания гимназии (1828 год), его отношение к литературе и стремлению развиваться в этом направлении не угасло.

В 1829 году он стал мелким чиновником. Его однообразную скучную жизнь скрашивала живопись, которой он занимался в Академии художеств, и литература.

Творчество

В 1830 году Гоголь написал свой первый труд. Им стала повесть «Басаврюк», которая позже была переработана в «Вечер накануне И. Купала».

В своих кругах общения у молодого Гоголя было немало известных людей: Пушкин, Вяземский, Брюллов и многие другие. Такие знакомства расширяли его кругозор, помогая в развитии его деятельности. С Пушкиным он дружил.

Литературно известным Николай Васильевич стал после выхода в свет книги «Вечера на хуторе близ Диканьки», на создание которой он посвятил 1831-32 годы своей жизни. В ее состав входит знаменитая повесть «Сорочинская ярмарка».

В последующем году Гоголь решил связать свою деятельность с научно-педагогической практикой, и уже в 1834 году его назначили адъюнкт-профессором в университете Санкт Петербурга (кафедра всеобщей истории). Этот опыт и изучение украинской истории послужили созданию его нового произведения «Тарас Бульба».

Через год после своего назначения Гоголь покинул кафедру и полностью поглотился литературной работой, написав такие произведения, как: «Вий», «Тарас Бульба», «Ревизор» и сборники повестей «Миргород» и «Арабески» …

Наиболее значимым произведением, посвящённым Петербургу, стала повесть «Шинель». Над этим трудом Николай Васильевич работал около 7 лет, закончив лишь в 1842 году, хотя черновой вариант было готов уже в 1836. В это же время он работал и над другими произведениями. В 1841 году он написал «Мёртвые души», первый том которых был напечатан спустя год. С момента создания этого произведения у писателя начали появляться приступы нервных расстройств.

С 1837 по 39 год Гоголь странствовал, а уехал он после неудачной постановки «Ревизора». Он побывал в Швейцарии, Париже и Риме. После он вернулся, снова покинул Россию (более года пробыл в Вене), потом опять оказался на родине.

Работа над вторым томом «Мёртвых душ» совпала с кризисом писателя. Его произведения критиковали, Белинский осудил религиозность и мистицизм писателя. Всё это влияло на душевное состояние писателя, доводило до отчаяния.

В 1852 году писатель стал общаться с протоиереем Матвеем Константиновским, который являлся мистиком и фанатиком. В этом же году, в состоянии тяжёлого душевного срыва, писатель сжёг свои труды второго тома поэмы о мёртвых душах.

Умер Гоголь в 1852 году, спустя 10 дней после уничтожения второго тома поэмы. 21 февраля писателя не стало.

• «Портрет», анализ повести Гоголя, сочинение
• «Мертвые души», анализ произведения Гоголя
• «Мертвые души», краткое содержание по главам поэмы Гоголя
• «Нос», анализ повести Николая Васильевича Гоголя
• «Ревизор», анализ комедии Николая Васильевича Гоголя
• «Шинель», анализ повести Николая Васильевича Гоголя
• «Майская ночь, или Утопленница», анализ повести Гоголя
• «Портрет», краткое содержание по частям повести Гоголя
• «Майская ночь, или Утопленница», краткое содержание по главам повести Гоголя
• «Ревизор», краткое содержание по действиям комедии Гоголя
• «Нос», краткое содержание по главам повести Гоголя
• «Шинель», краткое содержание повести Гоголя
• «Вий», анализ повести Николая Васильевича Гоголя
• Образ маленького человека в произведениях Гоголя
• «Ночь перед Рождеством», анализ повести Гоголя

По писателю: Гоголь Николай Васильевич

Был ли Гоголь геем? | Хелен Мучник

Саймон Карлинский убежден, что «эмоциональная ориентация» Гоголя была гомосексуальной, и этому посвящена его книга. По его мнению, это тема первостепенной важности, «заброшенная область в жизни и творчестве Гоголя», табуированная даже в университетах. Настолько, что, как человек шокирован, узнав, что около двадцати лет назад в Берлине Всеволоду Сечкареву, ныне работающему в Гарварде, не позволил упомянуть об этом в своем исследовании Гоголя старший коллега, который пригрозил разрушить его академическую карьеру, если он это сделает. .Впоследствии несколько критиков Фрейда углубились в другие аспекты сексуальности Гоголя, но не затронули этот. Так что только во имя учености и интеллектуальной свободы этот вопрос должен быть выявлен и исследован. Но у профессора Карлинского есть и другие причины. Он считает этот вопрос решающим для понимания загадочной натуры Гоголя. «Это может дать, — думает он, -« недостающий ключ к разгадке его личности »; это «источник и причина личной и литературной трагедии Гоголя.

У Гоголя, который в своих произведениях кажется скорее скрытым, чем раскрытым, гораздо труднее, чем другим писателям, увидеть связь между человеком и произведением. Он всегда был загадкой. Подобно Чичикову и Хлестакову, коварные герои «Мертвых душ » и «Ревизор », скакая на своих тройках, Гоголь убегает от вас, как только вы собираетесь его схватить, или он пытается спрятаться в каком-нибудь укромном уголке. угол его собственности, как его Пифагор Чертокуцкий в «Карете.«Он действительно более уклончив, чем его существа. В конце концов, мы много знаем о Чичикове и Хлестакове, а несчастный Чертокуцкий прослежен до его тайника и обнаружен. Гоголь же остается скрытным и непостижимым. Его сочинения плавают свободно от него самого, как если бы он сознательно оборвал нить своего вдохновения и, приведя в движение свой изобретенный мир, отступил от него, deus absconditus своего творения.

Профессор Карлинский утверждает, что разгадал тайну, выследил Гоголя до укромного логова его гомосексуализма, а Чертокуцкого выследили до убежища в его карете.Вкратце его тезис состоит в том, что Гоголь, неспособный быть самим собой в мире, где гомосексуальность был запрещен, скрывал свои склонности, пытался подавить свои эмоции, бессознательно проецировал свою скрытность в обманах, мистификациях и символах своих рассказов и пьес. , и в конечном итоге сломался от напряжения, разрушив свое искусство и разрушив себя. Анализ продолжается не столько от человека к работе, хотя используются некоторые соответствующие биографические данные, сколько от работы к человеку, так что работа принимает форму и функцию иероглифов, которые необходимо расшифровать, чтобы человек можно прочитать.

Давно замечено, что привычный в художественной литературе «любовный интерес» заметно отсутствует в творчестве Гоголя и что женщины в нем либо сказочные красавицы, либо ведьмы, либо карикатуры, фигурки с пустоголовой фигурой или грозные харриданы, которые привели к правдоподобному выводу, что Гоголь не любил и боялся женщин и его отталкивала идея брака. Карлинский, принимая эту точку зрения, переходит к интерпретации, которая предсказуема по основной линии аргументации, но не по сложной изобретательности ее развития.

Когда некоторые из рассказов Гоголя заканчиваются счастливыми браками, как три из них в его первой книге « Вечерах на хуторе близ Диканьки », аномалия должна быть объяснена. Делается это без особого труда: «Майская ночь» условно оперная; «Сорочинская ярмарка» заканчивается на заунывной ноте, портящей настроение счастья; а в «Сочельник» героиня — «пожалуй, самый подробный портрет женщины-нарцисса в русской литературе». Совершенно необъяснимо забыв об очаровательной Людмиле Пушкина, Карлинский задается вопросом, где, поскольку нарциссические женщины «совсем не распространены в литературе гоголевских времен», Гоголь мог перенять его идею за нее, и почему в ней не было так много, как «намек на нарциссизм». осуждение в изображении Гоголя »ее и других подобных ей в его более поздних рассказах.Причина, по его мнению, в том, что мужчине не нужно бояться женщины, которая любит себя: она не будет предъявлять к нему никаких требований и, следовательно, «в безопасности».

Еще более хитрым является анализ Карлинским «Женщины», очень ранняя пьеса, которая предшествовала даже рассказам о Диканьке, юношеское упражнение в германском романтизме, в котором Платона заставляют рассуждать о женщине как об идеале: «Она — язык боги…. Она — поэзия, о ней думают, а мы — всего лишь ее воплощение в реальности ». В прочтении Карлинского эта «хвалебная песнь женской красоте» при внимательном рассмотрении оказывается восхвалением гомосексуализма.«Женская красота дает мужчинам критерий, необходимый для оценки красоты других мужчин», а «физическое владение женщиной во время любовного акта» становится «средством божественного союза мужчин с другими мужскими сущностями», — аргумент, что кажется мне случаем особой мольбы и слишком умным наполовину.

Но это совсем не то, что Карлинский делает с образами природы в «Сорочинской ярмарке», «Майской ночи» и «А. Ужасная месть »- знаменитые стихи в прозе, изображающие томный летний день, звездную ночь весной, сияющий ручей и темные участки большой реки.В истинно романтической традиции здесь олицетворяются стихии природы и, поскольку русский язык является изменчивым, грамматически различаются по гендерному признаку: небо обнимает «прекрасную землю» и держит ее «в своих неземных объятиях»; Темный пруд, в котором тускло отражаются звезды, сравнивают с «немощным стариком», держащим «темное и далекое небо в своих холодных объятиях, покрывая сверкающие звезды своими ледяными поцелуями».

Карлинский понимает в этих описаниях, что Гоголь «внимательно следит за тем, чтобы не могло быть никакого конгресса» между гетеросексуальными компонентами земли и неба, пруда и звезд.(Интересно, чего он ожидал от образов совершенной тишины?) Затем есть реки, Псил из «Сорочинской ярмарки», «самовлюбленная красавица, нарциссически обнажающая свою« серебристую грудь », и «Ужасная месть», — могучий мужчина Днепр, который «бормотал и ворчал, не находя ничего, что ему нравилось». Эти романтические отрывки, не столько описания, сколько музыкальные стихотворения, задающие настроение, становятся в исполнении Карлинского «спящим мужчиной, импотентом и ворчливым старым ворчуном… в отличие от… бодрствующих, самореализованных и удовлетворенных образов. красивой летней земли и красивой реки.Гоголь, которому по условию запрещалось проявлять свои гомосексуальные чувства, вынужденный «выражать свое представление о сексуализированной природе в гетеросексуальных терминах», не мог удержаться от бессознательного выражения отвращения, о котором ему было запрещено говорить открыто.

Так же и в самой форме рассказов и пьес Гоголя, в их сюжетах и ​​лейтмотивах Карлинский выявляет закономерность, раскрывающую скрытую, безошибочную основу гоголевских структур. «Несомненно, знаменательно, — пишет он, — что в« Еве святого Иоанна », самой первой из своих страшилок, Гоголь« уже связал желание любви и брака с наказанием, возмездием и потерей жизни.Остальные ранние сказки не содержат этой темы, но, начиная с Миргород , второго собрания, мы находим, что

Гоголевские герои мужского пола, ищущие любви, брака или сексуального завоевания, быстро и неизбежно наказываются смертью, унижением и множеством других катастроф. Андри Бульба застрелен своим отцом; Хома Брют в «Вий» побежден демоническими силами; безнадежное увлечение недостижимой женщиной доводит до безумия героя «Дневника сумасшедшего»; Лейтенанта Пирогова на «Невском проспекте» унижают и пороли, погибает его друг Пискарёв; а бедный, кроткий Акакий Акакиевич в «Шинели», который даже не осмелился бы стремиться к любви или обладанию другим человеческим существом, все еще гибнет, осмелившись желать себе замену жены в виде пальто женского пола.

В отличие от этих трагических историй, счастливые заканчиваются бегством мужчины либо от брака, либо от какой-то любовной связи: майору Ковалеву в «Носе» удается перебраться через границу; в Брак Подколёсин на грани свадьбы сбегает, выпрыгивая из окна второго этажа, а негодяи Хлестаков и Чичиков, хоть и спасаются от ареста, но также избегают возможных супружеских ловушек. «Эта закономерность, — говорит Карлински, — слишком значительна и устойчива, чтобы быть случайной.На что можно было бы ответить, что, какой бы реальной и стойкой она ни была, эта закономерность не является фундаментальной, что, за исключением фарса Брак , сексуальная тема во всех этих фикциях подчинена основным заботам Гоголя: человеческой беспомощности, неудачам и унижению. которые трагичны; и повсеместность мелочности, что комично.

Это то, чем они, по сути, являются все они, даже глубоко эротический «Вий», который, по сути, является повествованием о сверхчеловеческой, зловещей силе, перед лицом которой великая, хотя и бесполезная, духовная сила духа. Испытано, как и в «Тарасе Бульбе», напротив, проверено его физическое мужество.Даже «Шинель», которая, как справедливо указывает Карлинский, является «самой искренней, трогательной и честной» из любовных историй Гоголя, на самом деле является всего лишь еще одним — самым душераздирающим из всех — часто повторяемой схемы, показывающей счастье, каким бы нетребовательным оно ни было, или стремление, каким бы скромным оно ни было, оказаться либо вне досягаемости, либо, если оно будет достигнуто, быстро и безвозвратно утеряно. «Дневник сумасшедшего», как понял Достоевский, связан с человеческой гордостью и катастрофой унижений, а «Невский проспект» — об обмане, неуместных идеалах, отвергнутых желаниях — тема всегда — это неизбежный провал и гибель.

Карлинский изображает Гоголя человеком, озабоченным сексом, тем более, что он не осознает этой озабоченности. Но Гоголя мучила более глубокая агония, бремя, которое с детства давило его, как инкуб, и от которого он никак не мог избавиться. Это мучительное бремя было постоянным всепроникающим страхом смерти. А смерть постоянно крадется в его рассказах или прячется за кулисами. Карлинский проигнорировал это.

Но это очень важно, как наиболее убедительно Владимир Короленко показал в очерке «Трагедия великого юмориста», написанном им в 1909 году в честь столетия Гоголя.Он приписывал частые, загадочные смены настроений Гоголя — финал к «Сорочинской ярмарке» с его внезапным вторжением одиночества и меланхолии в сцену веселых весельчаков — яркий и характерный пример — врожденной предрасположенности, унаследованной от отца. . Было что-то странное в Василии Николаевиче. Счастливо женатый, беззаботный, одаренный, добродушный рассказчик и автор украинских комедий, которого соседи любили забавными анекдотами, которыми он их развлекал, он был подвержен необъяснимым, изнуряющим мрачным состояниям, приступам «странных» воображения »и« жестокого отчаяния », как он сам их описал.Он умер на сорок пятом году жизни, когда Гоголю было шестнадцать.

«Гоголь впоследствии писал, что его отец умер не от какого-то конкретного недуга, а исключительно и целиком« от страха смерти »», — отмечает Короленко, добавляя, что «этот« страх смерти »Николай Васильевич Гоголь получил от отца как роковой. наследственность », и что темперамент отца действительно отразился в сыне с поразительной точностью, хотя« в значительно увеличенной и более яркой форме, как маленькая картинка, запертая в ящике волшебного фонаря, сияет в увеличенном виде на огромном экране. .

Может ли темперамент передаваться по наследству, нет сомнений в том, что в своей базовой конфигурации характер Гоголя имел много общего с характером его отца. Он тоже страдал от необъяснимых приступов уныния и умер в возрасте сорока трех лет, как и его отец, от неизвестного физического заболевания. Однако у него приступы депрессии стали орудием его гения, источником его юмора. Так он писал в более поздней жизни, вспоминая, как раньше отвлекался от ужасных приступов депрессии, придумывая «забавных персонажей и помещая их в самые забавные ситуации».Эти изобретения позабавили не только его самого, но и других. А в школе болезненный, физически отталкивающий мальчик — как его описывают современники — оставил свой след своим комическим даром. Дома он проповедовал и властвовал над своей матерью, сентиментальной, суеверной женщиной, которая его обожала, и двумя его младшими сестрами.

Образец клоунады и проповеди, заложенный в детстве, сохранялся на протяжении всей его жизни. Это был его способ общения с другими, как в его дружеских отношениях, так и в его писаниях — способ доминирования в любом случае был ненасытным и необходимым для него.Он стремился к большим высотам и боялся, что смерть может помешать ему достичь их. Так он однажды написал в письме своему дяде. По его словам, даже в детстве он был увлечен желанием «сделать [свою] жизнь полезной» и заливался холодным потом при мысли, что может погибнуть, не добившись славы. Его отношения с другими были обусловлены этим желанием; мир был его аудиторией или его паствой, и он проводил свою жизнь, развлекая, наставляя, проповедуя — всегда с беспокойной интенсивностью того, кто чувствует себя постоянно под угрозой смерти.

Несомненно, именно это — высокие амбиции, которые постоянно преследуют и подвергают опасности злонамеренные силы, которых нельзя умилостивлять или умиротворять, а также приступами уныния — несомненно, именно это, а не разочарования в отдельных людях, мужчинах или женщинах, следует придерживаться. ответственны за эти резкие колебания настроения, эти обманы, лишения, попытки побега, те колоссальные нелепости, из которых вылеплены работы Гоголя, «типичной ситуацией» которой, как заметил Эдмунд Вильсон, является «внезапное падение со дна». какой-то впечатляющей конструкции, которую мы наблюдали, как тщательно построенную.

Нечто подобное, хотя и с другим акцентом, — вот что говорит Абрам Терц в своей недавней книге « В тени Гоголя , ^* » — блестяще проницательном, образном исследовании, в котором он целиком представляет Гоголя как художника. и исключительно привержен своему искусству, и видит свое искусство (которое имеет много общего с его собственным) как форму магии, отражающую жизнь такой, какой она есть на самом деле, магическим, нелогичным состоянием бытия, управляемым только абсурдом, комичным, когда в этом нет страданий, и когда они есть, они трагичны.

Подход Карлинского сильно отличается. Его внимание сосредоточено не на Гоголе-художнике, а на Гоголе-человеке, и искусство Гоголя для него является инструментом познания человека. Он не считает себя фрейдистом. Но очевидно, что он настолько загипнотизирован психоаналитическим волшебником, что не осознает, насколько его предположения и процедуры принадлежат Фрейду, базовое предположение, например, что homo — это не sapiens , а erotikos и что продукты воображения — это бессознательные образы сексуальных влечений.Кто, кроме фрейдистского ученика, сможет пройти через творчество Гоголя, как это делает Карлинский, как лунатик через лес фаллических символов? Для него ружье, указательный палец, свиная морда, какими бы мнимыми ни были их функции в рассказе, — не что иное, как символы мужской агрессии.

Так, например, когда трогательный старый герой «Старосветских помещиков» Афанасий Иванович гонит гусей со своего крыльца, он не просто гоняется за гусями, а утверждает свое нежелание вступать в половую связь с Пульхерией Ивановной, своей возлюбленной. жена.И нежная Пульхерия исчезает и умирает не из-за сверхъестественного страха смерти, как сам Гоголь предположил в очень личном и трогательном отрывке в конце рассказа, а потому, что она внезапно осознала это благодаря поведению своего любимого кота, который сбежала из своего уютного дома, чтобы мучительно, но рискованно жить в лесу со стаей диких кошек, как много она упустила и насколько обездоленной она была в своем сексуально ограниченном существовании. Именно в свете таких наблюдений и проводится рецензирование творчества Гоголя.

Не вводя в заблуждение намеренно, Карлинский часто не осознает, что, вырывая кусок из контекста, он исказил его для своих целей. Приведу два примера. В сноске со ссылкой на «Вий» он цитирует отрывок из Абрама Терца, который кажется ему «особенно проницательным» и подтверждает то, что он сам сказал о ужасном финале этой ужасной истории, когда Вий, похожий на гнома, монстр с железным лицом, приказывает своим сопровождающим демонам поднять его веки, которые свисают до земли, видит свою жертву, указывает на нее и убивает.Комментарии Карлинского:

… Немногие вещи могут быть столь же фаллическими, как веки, свисающие с земли. Он заставляет других поднимать эти веки для него, что кажется безошибочной эрекцией, двойной, которая с указательным железным пальцем становится тройной — тройной удар, как выразился бы Эл Капп.

И Терц:

Удлиненные веки Вия, которые видят насквозь и убивают, и которые сочетают в себе абсолютную подземную слепоту с ясновидением, отбрасывают свою тень на весь текст рассказа, который одержим страстью видеть то, что скрыто и запрещено, и которое пронизано эротизм и, если хотите, состояние эрекции зрения.

Хотя эти отрывки кажутся похожими, они очень разные по замыслу и значению. Карлинский говорит о сексе, Терц об искусстве в образах секса. Его фрагмент является частью большого дискурса, который занимает центральное место в его книге и связан с особым качеством творческого порыва Гоголя, с взглядом Гоголя, настолько похожим на его собственный, что визуальное наблюдение фатально для искусства, что искусство «вожделеет». после «скрытого и запрещенного», что является его истинным интересом, после тревожных, дразнящих секретов магии всего, что непостижимо для физического восприятия и открыто только художественному воображению.Терц говорит о реализме и природе искусства; «Возведение зрения» имеет эстетический оттенок.

В другом месте Карлинский цитирует отрывок о страстях из Мертвых душ и более поздний комментарий Гоголя на полях, опровергающий его. Отрывок гласит:

.

Бесчисленны, как песок морской [перевод Карлинского], разновидностей человеческих страстей, и ни одна из них не похожа друг на друга, и все они, скромные или прекрасные, сначала послушны человеку, а только потом становятся его ужасающими хозяевами …Но есть страсти, выбор которых не зависит от человека. Они уже родились с ним в тот момент, когда он родился в этом мире, и у него нет силы отвергнуть их….

И отказ от ответственности:

Я написал это в состоянии заблуждения; это ерунда. Врожденные страсти — это зло, и все усилия разумной воли человека должны быть направлены на их искоренение.

Это вводит рассказ о Гоголе в последний период его жизни, когда он был поглощен «искоренением своих врожденных страстей», которые Карлинский, конечно, считает гомосексуалистом.Но вот отрывок из Dead Souls , который непосредственно предшествует тому, что он процитировал (перевод — Б.Г. Герни):

В человеке все быстро преобразуется; еще до того, как у человека появится возможность повернуться, внутри него уже вырос страшный язвенный червь, который властно отвлек на себя весь его жизненный сок. И не раз в человеке, рожденном для великих дел, развивалась какая-то страсть — не просто безоглядное великое желание, но подлый, подлый зуд к чему-то незначительному, заставляя его забыть великие и священные обязанности и увидеть в нем что-то великое и священное. незначительные безделушки.

Эти два предложения проливают другой свет на весь дискурс и больше подходят не только Чичикову, но и самому Гоголю, посвятившему всю свою жизнь ужасной пропасти между душераздирающей мелочностью повседневного существования и «великими делами». для чего человек, и особенно он сам, был предназначен Богом. Но Карлинский сконцентрировался на своей цели так исключительно и с таким ослепляющим рвением, что его зрение было ослаблено, что сделало невозможным увидеть что-либо, что могло бы усложнить или опровергнуть его тезис.

Точно так же биография Гоголя просеивается на предмет доказательств, подтверждающих литературные находки в поддержку центрального тезиса. На самом деле в жизни Гоголя всего две хорошо проверенные привязанности. Он любил своего младшего брата, на три года младше его, который умер в возрасте семи лет; а двадцать лет спустя, тридцатилетний и знаменитый писатель, живущий в Риме, он любил чахоточного молодого Иосифа Вельгорского и ухаживал за ним на последних стадиях его смертельной болезни. Были и другие мужчины, которые ему нравились, друзья, которые сопровождали его в путешествиях, которые делили с ним квартиры в Италии, Германии, Франции.Карлинский думает, что был влюблен в некоторых из них, приводя в качестве доказательства очень эмоциональный тон своих писем к ним. На мой взгляд и слух, эти фрагменты надутой риторики, если они представляют собой нечто большее, чем образцы современной моды (можно вспомнить юношеские излияния Герцена), выражают желание или притворство любить, а не какое-либо подлинное чувство. Конечно, могу ошибаться.

Но бывают и другие случаи, когда на основании свидетельств, даже более тонких, чем письма, только сообщений о настроениях, странном поведении, своеобразной одежде, Карлинский намекает на тайные дела, в домыслах, столь же достоверных, как и в колонках сплетен.Наиболее оскорбительны в этом отношении страницы, посвященные последним дням Гоголя, подробности которых пересказывались много раз, и никогда лучше, чем у Василия Гиппиуса, трезвым, скрупулезным и взвешенным исследованием которого Карлинский очень восхищается, но, к сожалению, не делает. не подражать.

В эти последние дни Гоголь якобы попал под зловещее влияние монаха-подвижника отца Матфея Константиновского, которого он избрал своим духовным наставником и который предположительно побудил его сжечь вторую часть . Dead Souls , над которой он трудился девять лет.Но Гиппиус указал, что ни характер отца Матфея, ни природа его влияния на Гоголя не были четко установлены, и что рукопись Мертвых душ могла быть уничтожена не намеренно, а случайно. Карлинский, однако, не обращая внимания на все неопределенности, на основе своих догадок строит мрачную сказку о садомазохистском ужасе: Гоголь, влюбленный в отца Матфея, признался ему в «сокровенной тайне», в которой он никогда никому не признавался, и не мог «заставить себя довериться… даже личной записной книжке»; монах наложил суровое покаяние и довел Гоголя до такого жалкого состояния страха, что он услышал крик: «Хватит! Прекрати! Я больше не могу слушать, это слишком страшно »; затем отказался от еды, сжег свою работу, и его добили благонамеренные, но невежественные врачи, которые пролили ему кровь, когда он был ослаблен голодом.

Никто не знает, что именно было сказано в последней беседе между кающимся и его духовником. Но, учитывая иерархию грехов в христианском богословии, более вероятно, что исповедание не в содомии, которое является грехом плоти, а в гордости, самом смертельном из грехов духа, привело бы к падению великого монаха. гнев. И это было гордостью, что Гоголя повсеместно осудили с момента публикации его Избранных отрывков переписки с друзьями , и это была гордость, которую он тщетно стремился искупить в своем паломничестве в Иерусалим.К этому последнему трагическому эпизоду был направлен весь кабинет Карлинского; это должно было закрепить его мнение о том, что «страх Гоголя перед его гомосексуальными наклонностями и его подавление их [были] одной из основных тем его произведений, одной из главных причин его личной трагедии и одним из факторов, способствовавших его смерти».

В своем рвении доказать эту гипотезу профессор Карлинский вышел за пределы области научных исследований. Хотя он взял на себя обвинение Анри Троя в том, что в его биографии Гоголя он притворяется, что существует способ «проникнуть в разум Гоголя» и «проследить его психические процессы», сам он предположил, что проникнет не только в сознание Гоголя, но и к его тайным корням в самых сокровенных нишах его глубоко похороненных эмоций.Обсуждая «Два Ивана», он признал, что Гоголь «конечно же отреагировал бы с ужасом и негодованием» на то, что он сделал с этой историей, но оправдал свою интерпретацию на том основании, что она подтверждает задуманный им замысел. Другими словами, произведение искусства — это головоломка. Уловка состоит в том, чтобы, учитывая рамку, поместить в нее, формируя рисунок, разбросанные части расчлененной работы, обрезая или отбрасывая части, которые не подходят. То же и с жизнью Гоголя. Когда узор сформирован, головоломка решена.

Давным-давно Фрейд дал сигнал к такой активности в своих фантазиях о Достоевском и Леонардо; и, к сожалению, его метод продолжает пользоваться популярностью, особенно в академических кругах. Жалко, что ученый, обладающий способностями Карлинского, был склонен к такому подходу, который представляет собой не что иное, как интеллектуальную игру, которая под видом учености требует и достигает не более чем сообразительности. Его исследование заслуживает внимания; это показывает, что вдохновение Гоголя было глубоко личным, что его письмо возникло из глубины его существа, а не из отстраненного созерцания его мира.Его тезис также не является ошибочным по сути, и его страстное осуждение общества, которое делает жизнь трудной или невозможной для его Прустов, Чайковских и Оскара Уайлдса, заслуживает высокой оценки. Вполне возможно, что Гоголь эмоционально тянулся к мужчинам и был безразличен и даже враждебен к женщинам, и это предпочтение можно обнаружить в его творчестве. Не нужно, чтобы призрак вышел из могилы, чтобы сказать нам это. Но какая разница? Это не влияет на качество его рассказов.Они по-прежнему остаются невероятно смешными, ужасающими, фантастическими и душераздирающими изобретениями, которыми всегда были. И их преднамеренный абсурд не поддается рациональному объяснению; чем больше это объясняется, тем непонятнее становится; сама рациональность становится абсурдной.

Наконец, принадлежит ли Гоголь к компании наших Прустов и Уайльдов или нет, описывать его смерть как мученическую смерть и «ритуальное убийство» — большое преувеличение. На самом деле все исследование страдает из-за преувеличения.Он игнорирует слишком многое из того, что характерно и жизненно важно в работе и личности этого коварного, запутанного, измученного гения, отгоняя смехом и чудесными фантазиями вечно надвигающийся призрак смерти и вечного проклятия. Упрощенный постулат сексуальной неудовлетворенности не может его объяснить. Это наклонное узкое зеркало, в котором образ Гоголя кажется уменьшенным, искаженным и гротескным. Раздувая это до крайности, Карлинский напрягает комара. Он похож на человека из русской басни, который во время посещения зоопарка внимательно наблюдал за каждой птицей и зверем, но не заметил слона.

Призрак Гоголя и переселенцы Джумпы Лахири

Они не могут напугать меня своими пустыми пространствами Между звездами — на звездах, где нет человеческого рода. Во мне так близко к дому, Что пугать себя собственными пустынными местами. На картине Эдварда Хоппера «Ночные ястребы» три человека сидят за стойкой закусочной, не разговаривая и не глядя друг на друга. Официант возится за стойкой. Это «чистое, хорошо освещенное место», а не место, которое защищает от одиночества и ничтожества внешнего мира.Четыре человека на картине принесли с собой этот мир изоляции и сделали его частью своего собственного эмоционального пространства. То, что картина говорит об анонимности, одиночестве и пустоте американских интерьеров, физических и эмоциональных, — это тема, которая проходит через американскую литературу двадцатого века так же явно и бесспорно, как Миссисипи проходит через середину Америки. Имена писателей с начала века до его конца похожи на порты на пути: Шервуд Андерсон, Томас Вулф, Карсон МакКуллерс, Теннесси Уильямс, Раймонд Карвер, Мэрилин Робинсон.В произведениях всех этих писателей персонажи ищут выходы из комнат и домов, в которых заключено их одиночество: Элизабет Уиллард ждет смерти, чтобы вывести ее из унаследованного отеля, ставшего ее тюрьмой; неназванный рассказчик «Собора» восклицает в смущенной радости в момент трансценденции, что он больше не чувствует себя заключенным ни в чем; Эмили Грирсон смотрит в окна обветшавшего особняка, который буквально превратился в гробницу. Башляр написал: «Если меня попросят назвать преимущества дома, я должен сказать: дом укрывает мечтания, дом защищает мечтателя, дом позволяет мечтать в мире» (6).Но для американских писателей стены, окружающие внутреннее пространство домов, чаще являются метафорой ограничения внутри собственного эго или заключения в рамках набора условностей, отрицающих близость и индивидуальность. Для персонажей, которые живут в этих пространствах, жизнь находится снаружи, а не внутри, как в Bachelard. Двери закрывают мир, и главный герой американской фантастики должен выйти за эту дверь, чтобы понять себя и установить значимый контакт с другими. Быть закрытым — не значит быть в безопасности, но быть пойманным в ловушку.Эта метафора может возникнуть, как сказал Хемингуэй во всей американской художественной литературе, от Гека Финна, который убегает от своего жестокого отца и обычной семьи вдовы Дуглас в жестокий и опасный мир, который, по крайней мере, дает ему некоторую независимость. Это может начаться с Дома Ашера По и готической традиции. Как отмечает Уильям Ружичка, это, безусловно, пронизывает вымысел Фолкнера с его клаустрофобными и ветшающими южными особняками. Мы также видим эту метафору в такой современной классике, как «Домашнее хозяйство» Мэрилин Робинсон, в которой Рут и Сильвия сжигают дом, который стал символом удушающих условностей жизни небольшого городка, условностей, которые мешают индивидуальной автономии, не обеспечивая при этом доброты, понимания или помощь.И он появляется снова и снова в романах Перси, Маламуда, Прайса и Беллоу о кризисе среднего возраста. Стены образуют тюрьму, и те, кто попадает в эти стены, находятся в своего рода одиночном заключении; единственный ответ — побег. Решение одиночества — снаружи. Д.Х. Лоуренс однажды написал о первых поселенцах в Америке: В основном они приехали, чтобы уйти — это самый простой из побуждений. Выбраться. Вдали от чего? Вдали от всего. Вот почему большинство людей приехали в Америку и до сих пор приезжают. Чтобы уйти от всего, что они есть и чем были.«Отныне будь без хозяина». Это все хорошо, но это не свобода. Скорее наоборот — безнадежное принуждение. Это никогда не свобода, пока вы не найдете то, чем действительно хотите быть. В той степени, в которой это правда, неудивительно, что многие из главных героев американской художественной литературы продолжают бежать, убегая из домов, которые одновременно лишены смысла и задыхаются в своих ограничениях. Теперь эти пустые внутренние пространства Америки находятся в центре работы Джумпы Лахири…

Извините, Россия, но Чайковский определенно был геем

Историки не сомневаются в том, что Петр Чайковский был геем, но будущий биографический фильм, снятый в его родной стране, будет. Что ж, извините, Россия, но Чайковский — вместе с десятками других икон русской культуры — был геем.

Историки не сомневаются в том, что Петр Чайковский был геем, но будущий биографический фильм, снятый в его родной стране, будет. Юрий Арабов сказал российской газете, что его экранизация жизни композитора XIX века не будет сосредоточена на его сексуальности, потому что «это далеко не факт, что Чайковский был гомосексуалистом», — сообщила The New York Times .

Арабов также сказал, что фильмы, которые «рекламируют» гомосексуальность, находятся «вне сферы искусства», и что только «обыватели» думают, что композитор был геем. В свете недавнего российского законодательства, направленного против геев, это можно рассматривать как еще одну попытку стереть гей-историю страны. Что ж, извините, Россия, но Чайковский — вместе с десятками других икон русской культуры — был геем, что с готовностью подтвердят многие ученые.

Петр Чайковский (композитор)

Чайковский написал два наиболее типично русских балета — «Лебединое озеро» и «Щелкунчик» .И, как описал Кристофер Харрити в The Advocate , сексуальность Чайковского была хорошо известна, а также хорошо задокументирована в его собственных письмах. Харрити пишет (выделено автором):

История гомосексуализма Чайковского была подавлена ​​в России Советами, и лишь недавно она стала широко известна в постсоветской России. писем и дневников Чайковского, а также письма его брата Модеста, который также был геем, ясно показывают его ориентацию. […] Многие из самых интимных отношений Чайковского были гомосексуальными: слуга Чайковского Алексей Софронов и его племянник Владимир «Боб» Давыдов. Веселый писатель Е.М. Форстер ссылается на Чайковского и Давыдова в своей истории любви Морис, , написанной в 1913-1914 годах и опубликованной в 1971 году: «… Чайковский влюбился в своего племянника и посвятил свой шедевр [ Symphonie pathetique ] ему.»

И, как сообщал в 2009 году журнал The Independent , биография Роланда Джона Уайли обнаружила убедительные доказательства сексуальности:

Новая биография Роланда Джона Уайли была опубликована этой осенью и восторженно рецензирована на этих страницах Майклом Черчем; он утверждает, что некоторые из этих загадок — не более чем мифы.Например, Уайли указывает, что Чайковский всю свою жизнь был открытым геем, до такой степени, что он феминизировал имена молодых людей, с которыми общался, и даже свое собственное — подписал письмо своему брату (который также был геем) «Петролина» «.

Николай Гоголь (автор)

Романист XIX века, наиболее известный по Мертвым душам и его рассказам, также был гомосексуалистом. Сексуальный лабиринт Николая Гоголя , сочиненный русским геем Саймоном Карлинским, утверждал, что доказательства гомосексуальности Гоголя можно найти в его произведениях.В своей рецензии на книгу The New York Review of Books Хелен Мучник изложила аргумент Карлинского следующим образом:

Его тезис, вкратце, состоит в том, что Гоголь не может быть самим собой в мире, где гомосексуальность запрещен. , скрывал свои наклонности, пытался подавить свои эмоции, бессознательно проецировал свою скрытность в обманах, мистификациях и символах своих рассказов и пьес и в конечном итоге сломался под напряжением, разрушив свое искусство и разрушив себя.

Здесь и здесь, среди прочего, есть упоминания о сексуальности Гоголя.

Парнок, умершая в 1933 году, была известна как русская Сафо и писала о своей сексуальности в своих стихах. Вот отрывок из ее стихотворения 1924 года «Сны»:

Только во сне, с прерывистым стоном,
, чтобы не умереть во сне,
на такой сладкой волне,
над этим небесно-голубым утопающим,
вся ее грудь свободно вздымается
от дыхания, моя душа качается.

Парнок опубликовала несколько сборников стихов, пока в 1928 году цензура советского правительства не сочла ее произведения «незаконными».

Сергей Набоков (брат Владимира Набокова)

Владимир Набоков, наиболее известный своим романом 1955 года Лолита , был известный гомофоб. Да, как объяснил Лев Гроссман в статье 2000 года для Салона, его брат был известным гомосексуалистом. Гроссман писал:

Гомосексуализм Сергея бросит тень на его странную и героическую жизнь, а также, в конечном счете, станет причиной его ужасающей и безвременной смерти.Это бросило тень и на жизнь Владимира: он любил своего брата, но кем бы он ни был — блестящим писателем, любящим отцом — Владимир был убежденным гомофобом, а его брат-гей был постоянным источником стыда, смущения и сожалею ему.

Сергей умер в нацистском трудовом лагере, а Владимир написал несколько романов. Между тем, веселые персонажи появляются повсюду в творчестве Владимира, возможно, в знак признания его брата.

Эта статья из архива нашего партнера The Wire .

Метаболическая регуляция сайленсинга теломер с помощью фосфорилирования h4T11, катализируемого комплексом SESAME

Фосфорилирование h4T11 обогащено промоторами генов и проксимальными областями к теломерам

Для определения локализации фосфорилирования h4T11 по всему геному, проведена иммунорецепция h4pT11 (была проведена иммунорецепция h4pT11) путем высокопроизводительного секвенирования (ChIP-seq) h4pT11 в дрожжевых клетках, выращенных в богатой глюкозой среде, и сравнили его с положениями h4K4me3, гистонового маркера, связанного с транскрипцией активного гена.На рис. 1a показан профиль метагена, а на рис. 1b — отслеживание репрезентативных генов в браузере. Эти данные показывают, что h4pT11 высоко обогащен перед сайтом начала транскрипции (TSS) и фланкирует пики h4K4me3 (рис. 1a, b), что согласуется с локализацией h4pT11 на промоторе гена PYK1 ³³ . Мы также классифицировали гены, регулируемые РНК-полимеразой II, на пять групп на основе их уровней транскрипции, а затем сравнили уровни h4pT11 среди этих групп. Сигналы h4pT11 положительно коррелировали с уровнями транскрипции генов (рис.1а). Подобно возникновению репрессивных гистоновых маркеров, метилированию h4K36 и метилированию h4K9 в областях активных генов ^35,36,37 , обогащение h4pT11 в высокоэкспрессируемых генах может регулировать их экспрессию. Более того, h4pT11 был обогащен 541 геном, среди которых 408 генов были совместно заняты субъединицами SESAME, Pyk1 и Ser33 (рис. 1c). Анализ путей Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) показал, что эти 408 генов участвуют в таких путях, как рибосома, метаболизм, пути регуляции долголетия, фагосома, аутофагия, экспорт белка и т. Д.(Дополнительный рис. 1а).

a Составной профиль связывания h4pT11 с 5065 генами, которые были разделены на пять групп в соответствии с их скоростями транскрипции. Отношение нормализованного обогащения log ₂ (h4pT11 / h4, h4K4me3 / h4) для каждой области гена, включая 500 п.н., расположенные выше и ниже гена, использовали для анализа среднего гена. Указаны сайт начала транскрипции (TSS) и сайт терминации (TES).b треков ChIP-seq, показывающих занятость h4K4me3 / h4, h4pT11 / h4, Pyk1 и Ser33 в репрезентативных генах. c Диаграмма Венна генов, которые перекрываются между наборами генов Pyk1-пик, Ser33-пик и h4pT11-пик, как определено с помощью ChIP-seq. Представлено количество сайтов связывания. d , e треков ChIP-seq, показывающих занятость h4pT11 / h4, Pyk1 и Ser33 в левой и правой областях теломер хромосомы VIII (TEL VIII) ( d ) и хромосомы XII (TEL XII) ( и ).Контрольные треки были созданы с использованием немаркированного штамма BY4741 с антителом против FLAG. f ChIP-qPCR анализ Pyk1, Ser33 и Sam1 на теломерах хромосомы VI (TEL VIL и TEL VIR), хромосомы VIII (TEL VIIIL и TEL VIIIR) и хромосомы XII (TEL XIIL и TEL XIIR). YJR011C использовался как нецелевой регион. г ChIP-qPCR анализ h4pT11 на теломерах в WT, pyk1-ts , ser33Δ и sam1Δ мутантов. Pyk1 был инактивирован путем выращивания мутанта pyk1-ts при недопустимой температуре (37 ° C) в течение 2 часов.h4pT11 был нормализован до уровня гистона h4. Для рис. 1f, g количественные данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего; n = 3 биологических независимых эксперимента. Статистическую значимость проверяли с помощью двустороннего критерия Стьюдента t . * p <0,05; ** p <0,01; *** р <0,001.

Интересно, что мы заметили значительное количество пиков для h4pT11 вблизи теломер (уникальные субтеломерные последовательности) (Fig. 1d, e и Supplementary Fig. 1b).Мы также наблюдали связывание субъединиц СЕЗАМЕ, Pyk1 и Ser33 в этих областях (рис. 1d, e и дополнительный рис. 1b). Заселенность Pyk1, Ser33 и Sam1 в субтеломерных областях подтверждали с помощью ChIP с последующей количественной ПЦР в реальном времени (qPCR) (рис. 1f). По сравнению с нецелевым геном YJR011C наблюдается обогащение в 2,01, 2,16, 2,95 раза Pyk1, Ser33 и Sam1 нетеломерного гена PYK1 (рис. 1f). По сравнению с YJR011C в 2,29–7,38 раза больше, 1.55-5,15-кратное, 1,57-4,13-кратное обогащение Pyk1, Ser33 и Sam1 в регионах теломер (Fig. 1f), подтверждая, что SESAME имеет сходную занятость в регионах теломер и целевых регионах эухроматина. Локализация h4pT11 в этих регионах также была подтверждена с помощью ChIP-qPCR (рис. 1g). Сигнал ChIP h4pT11 / h4 у гена PYK1 был в 2,81–5,37 раза выше, чем у YJR011C (рис. 1ж). Сигналы ChIP h4pT11 / h4 в областях теломер были в 2,53–9,71 раза выше, чем у YJR011C (рис.1г). Вариабельность занятости SESAME и h4pT11 на теломерах может быть обусловлена ​​генетическим разнообразием и нерегулярностью нативного репрессированного хроматина на теломерах ³⁸ . Более того, обогащение h4pT11 в этих областях было значительно снижено у мутантов SESAME, включая мутанты pyk1-ts , ser33Δ и sam1Δ (рис. 1g). Потеря занятости h4pT11 в разных областях теломер варьирует, что может быть вызвано разной аффинностью связывания комплекса SESAME в разных областях, а Pyk1 частично инактивируется при 37 ° C.Эти результаты показывают, что комплекс SESAME фосфорилирует h4T11 в проксимальных областях теломер.

Set1 и h4K4me3 необходимы для рекрутирования СЕЗАМЕ для фосфорилирования h4T11 по активным генам, то есть PYK1 и PMA1 ³³ . Затем мы исследовали влияние Set1 и h4K4me3 на занятость SESAME и h4pT11 на теломерах. У мутантов set1Δ и h4K4A занятость h4pT11 в гене PYK1 была значительно снижена, но его занятость на теломерах не пострадала (дополнительный рис.1в). Сходным образом потеря Set1 не снижает занятость комплекса SESAME на теломерах, несмотря на снижение обогащения SESAME в гене PYK1 (Supplementary Fig. 1d), указывая тем самым, что связывание SESAME на теломерах не зависит от катализируемого Set1 h4K4me3.

h4pT11, катализируемый SESAME, поддерживает теломер-специфическое подавление транскрипции

Чтобы изучить влияние катализируемого SESAME h4pT11 на подавление теломер, мутация h4T11A была введена в репортерный штамм, подавляющий теломер, который имеет репортерный ген URA3, расположенный рядом с . левая теломер хромосомы VII (Tel VII-L) (рис.2а) ³⁹ . В этом репортерном анализе сайленсинг теломер отражается ростом клеток на среде, содержащей 5-фтороротовую кислоту (5-FOA), суицидный субстрат для клеток, экспрессирующих URA3 . Рост мутанта h4T11A на пластине 5-FOA был снижен по сравнению с его аналогами клеток дикого типа (фиг. 2a). Аналогичное нарушение роста на планшете с 5-FOA наблюдалось также у мутантов SESAME, sam1Δ и shm2Δ (фиг. 2a). Снижение роста мутантов h4T11A, sam1Δ и shm2Δ на пластинах 5-FOA было вызвано повышенной транскрипцией URA3 , как определено с помощью количественной ПЦР с обратной транскрипцией (qRT-PCR) (рис.2b), что указывает на дефекты сайленсинга теломер у мутантов SESAME и h4T11A. Мы также подтвердили этот результат на другом штамме репортерного молчания теломер, несущем репортерный ген ADE2 , вставленный рядом с правым теломером хромосомы V (Tel V-R). Клетки с нормальным молчанием ADE2 становятся красными после выращивания в течение 4–6 дней, но станут белыми после дерепрессии ADE2 ³⁹ . В соответствии с результатами репортерного анализа URA3 , мы наблюдали, что мутантные клетки h4T11A стали белыми (дополнительный рис.2a), и это изменение цвета было связано с повышенной экспрессией ADE2 у мутанта h4T11A (дополнительный рис. 2b).

h4pT11, катализируемый SESAME, необходим для поддержания сайленсинга теломер. Верхняя панель: Схема положения URA3 , вставленного рядом с теломером VII-L в репортерном штамме, подавляющем теломеры. Нижняя панель: WT, h4T11A, sir 2Δ, sam1Δ и shm2Δ клеток, несущих URA3 , соседних с Tel VII-L, выращивали до насыщения, нормализовали для OD ₆₀₀ , серийно разбавляли в 3 раза и наносили пятнышки. на пластинах SC — Trp и SC — Trp + 5-FOA.Нарушение роста на пластинах 5-FOA указывает на снижение сайленсинга URA3 . b qRT-PCR анализ URA3 в мутантах WT, h4T11A, sir 2 Δ , sam1Δ и shm2Δ . c — e qRT-PCR анализ нативных теломер-проксимальных генов ( YFR057W , COS8 , YCR106W , SOR1 , SEO1 ) в WT (c116) 9023 (h4T) c ), pyk1-ts ( d ), ser33Δ ( e ) и sir 2 Δ мутантов. f Влияние серина на транскрипцию нативных теломер-проксимальных генов ( COS8 , SOR1 и SEO1 ) у WT, h4T11A и sir 2 Δ мутантов, как определено с помощью анализа qRT-PCR . g треков ChIP-seq, показывающих обогащение h4pT11 / h4, Sir2, Sir3 и Sir4 в областях в пределах 20 т.п.н. от репрезентативных теломер. h , i ChIP-анализ занятости Sir2 в регионах с разным удалением (1, 2.5, 5, 7.5 и 15 т.п.н.) на теломеры VI-R у мутантов WT, h4T11A ( h ), pyk1-ts ( i ) и ser33Δ ( i ). j ChIP-анализ h5K16ac в областях с разным расстоянием (1, 2,5, 5, 7,5 и 15 т.п.н.) до теломер VI-R у WT и мутанта h4T11A. Ацетилирование h5K16 нормировали на его вход. Для рис. 2b – f, h – j количественные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение; n = 3 независимых биологических эксперимента. Статистическую значимость проверяли с помощью двустороннего критерия Стьюдента t .* p <0,05; ** p <0,01; *** р <0,001. На рис. 2а показан типичный пример трех биологических независимых биологических повторов.

В дополнение к анализу репортерного сайленсинга теломер, мы исследовали влияние h4pT11 на транскрипцию естественных теломер-связанных генов с помощью qRT-PCR. Типичным примером является YFR057W , который расположен рядом с правым теломером хромосомы VI (Tel VI-R) и подвергается транскрипционному подавлению SIR-зависимым образом (рис.2в). YFR057W был активирован в мутанте h4T11A, но не в мутанте h4T11D, который имитирует фосфорилирование h4T11 (рис. 2c). Мы также исследовали транскрипцию генов около других теломер, включая COS8 , YCR106W , SOR1 , PHO11 и SEO1 , которые находятся в 6,4 кб от Tel VIII-L, 3,2 кб от Tel III-R. , 8,6 кб от Tel XR, 3,4 кб от Tel IL и 7,2 кб от Tel IL, соответственно. Подобно дерепрессии YFR057W , транскрипция этих генов была увеличена в h4T11A, но не в мутанте h4T11D (рис.2c), указывая на то, что дефекты подавления транскрипции возникают на множестве теломер и не зависят от гена. Сходная дерепрессия этих генов наблюдалась у мутантов pyk1-ts , ser33Δ , sam1Δ и shm2Δ (рис. 2d, e и дополнительный рис. 2c). Более того, делеция SER33 или SHM2 в мутанте h4T11A не увеличивала дополнительно транскрипцию генов, проксимальных к теломерам, по сравнению с мутантом h4T11A (дополнительный рис.2г). Эти два независимых анализа показывают, что катализируемое SESAME фосфорилирование h4T11 необходимо для поддержания естественного сайленсинга теломер.

Серин стимулирует комплекс SESAME фосфорилировать h4T11 ³³ . Действительно, лечение серином значительно увеличивало глобальные уровни h4pT11 (дополнительный рис. 2e). Таким образом, мы исследовали влияние серина на сайленсинг теломер. Обработка серином, но не глицином подавляла транскрипцию генов вблизи теломер (дополнительный рис.2f), и этот усиленный эффект сайленсинга с помощью серина не наблюдался у мутантов h4T11A и sir2Δ (Fig. 2f), указывая тем самым, что h4pT11 необходим серину для усиления сайленсинга теломер.

Мы также исследовали влияние катализируемого SESAME h4pT11 на подавление транскрипции в локусах HM с помощью репортерного анализа с URA3 , интегрированным рядом с локусами молчащего спаривания, HML или HMR . У мутантов SESAME не обнаружено обнаруживаемых дефектов в сайленсинге HM (дополнительный рис.2g, h), предполагая, что SESAME-фосфорилированный h4T11 репрессирует транскрипцию генов около теломер, но не локусов HM . Данные ChIP-seq для h4pT11 также показали очень низкие сигналы h4pT11 в локусах HM (дополнительный рис. 2i). Этот локус-специфический эффект сайленсинга также наблюдался у мутантов комплекса Mediator и h4K79 метилтрансферазы Dot1, которые обладают сниженным естественным сайленсингом теломер, но интактным HM сайленсингом ^40,41 .

Потеря SESAME-катализируемого h4pT11 приводит к снижению занятости комплекса SIR в областях теломер

Сравнивая наши данные ChIP-seq для h4pT11 с данными известных белков, регулирующих теломеры, мы обнаружили, что h4pT11 имеет сходный характер распределения в областях теломер с комплекс SIR (Sir2 / Sir3 / Sir4) (рис.2g и Supplementary Fig. 3a), подтверждая, что h4pT11 может быть функционально связан с комплексом SIR в регуляции сайленсинга теломер.

Сначала мы исследовали, зависит ли h4pT11 от комплекса SIR. Истощение белков SIR не оказывало значительного влияния на глобальные уровни h4pT11, а также на h4pT11 в областях теломер (дополнительный рис. 3b, c). Затем мы исследовали влияние мутации h4T11A на связывание SIR на теломерах с помощью ChIP-qPCR. Потеря h4pT11 привела к снижению занятости Sir2 на теломерах (Тел VI, Тел VIII, Тел XII) (Рис.2h и дополнительный рис. 3d). Уровни Sir2 также были значительно снижены в генах, проксимальных к теломерам у мутанта h4T11A (Supplementary Fig. 3e), что согласуется с их дерепрессией у мутанта h4T11A (Fig. 2c). Напротив, потеря h4pT11 не оказала значительного влияния на связывание Sir2 в HML и локусах рДНК (дополнительный рис. 3f), что согласуется с отсутствием значительного эффекта SESAME на подавление локусов HM (дополнительный рис. 2g, h). Аналогичное снижение занятости Sir2 на теломерах и теломер-проксимальных генах наблюдалось у мутантов pyk1-ts и ser33Δ (рис.2i и дополнительный рис. 3d, e). Поскольку Sir2 специфически деацетилирует h5K16 в областях близости теломер ⁴² , мы, таким образом, спрашивали, будет ли потеря h4pT11 влиять на h5K16ac в результате диссоциации Sir2 от теломер. В самом деле, h5K16ac был значительно увеличен в этих регионах у мутанта h4T11A (Fig. 2j), что согласуется с уменьшением занятости Sir2 у мутанта h4T11A (Fig. 2h). Кроме того, занятость Sir3 и Sir4 на теломерах была значительно снижена у мутанта h4T11A (дополнительный рис.3g, h), предполагая, что h4pT11 способствует связыванию комплекса SIR на теломерах.

Катализируемый кунжутом h4pT11 необходим для поддержания нормального уровня белка Sir2

Затем мы исследовали влияние h4pT11 на экспрессию белков SIR. Хотя транскрипция SIR2 , SIR3 и SIR4 существенно не изменилась у мутантов h4T11A и SESAME (рис. 3a и дополнительный рис. 4a), уровни белка Sir2 были значительно снижены у мутанта h4T11A, но не у мутанта h4T11D. (Инжир.3б). Уровни белка Sir2 также были значительно снижены у мутанта h4T11A в различных фоновых штаммах (дополнительный рис. 4b). Напротив, Sir3 и Sir4 существенно не изменились у мутанта h4T11A (фиг. 3b и дополнительный фиг. 4c).

a qRT-PCR анализ экспрессии SIR2 , SIR3 и SIR4 в мутантах WT, h4T11A и h4T11D. b Левая панель: Вестерн-блоттинг-анализ Sir2 и Sir3 у мутантов WT, h4T11A и h4T11D.Антитело h4pT11 может распознавать фосфомимический сайт (аспартат) в h4T11D с низкой эффективностью. Правая панель: Относительные интенсивности Sir2 / GAPDH и Sir3 / GAPDH на левой панели были количественно определены с использованием ImageJ со стандартной ошибкой (SE). Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка трех независимых биологических экспериментов. c Sir2 уровни белка были значительно снижены у мутантов WT, pyk1-ts , ser33Δ, sam1Δ и shm2Δ , за исключением sam2Δ , как определено с помощью Вестерн-блоттинга. d Серин значительно увеличивал глобальные уровни белка Sir2 у WT, но не у мутанта h4T11A. e qRT-PCR анализ SIR2 , SOR1 , YCR106W , YFR057W , COS8 и PHO11 в WT и PHO11 в WT и h4T11A, трансформированный мутантным вектором Sir2 pp2 SIR2 ). Для рис. 3a – e количественные данные представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего; n = 3 независимых биологических эксперимента.Статистическую значимость проверяли с помощью двустороннего критерия Стьюдента t . * p <0,05; ** p <0,01; *** р <0,001; n.s. не имеет значения.

Чтобы подтвердить, что катализируемый SESAME h4pT11 регулирует стабильный уровень Sir2, мы исследовали уровни белка Sir2 у мутантов SESAME, включая pyk1-ts , sam1Δ , sam2Δ , ser33Δ и . шм2Δ . Подобно мутанту h4T11A, Sir2, но не Sir3, был значительно снижен у этих мутантов, за исключением sam2Δ (рис.3в). Снижение Sir2 у мутанта sam1Δ , но не у мутанта sam2Δ может быть вызвано тем фактом, что их экспрессия регулируется по-разному ⁴³ . Поскольку серин стимулирует комплекс SESAME для фосфорилирования h4T11 и усиления сайленсинга теломер (рис. 2f и дополнительный рис. 2e), мы также исследовали влияние серина на уровни белка Sir2. Обработка серином значительно увеличила глобальные уровни h4pT11 и Sir2 (дополнительный рисунок 4d). В качестве контроля глицин не увеличивал уровни белков h4pT11 и Sir2 (дополнительный рис.4г). Более того, этот стимулирующий эффект серина на уровни белка Sir2 наблюдался у WT, но не у мутанта h4T11A (Fig. 3d), что согласуется с усиленным эффектом серина на сайленсинг теломер у WT, но не у мутанта h4T11A (Fig. 2f).

Чтобы проверить, регулирует ли катализируемый SESAME h4pT11 сайленсинг теломер путем поддержания уровней белка Sir2, мы исследовали, может ли сверхэкспрессия Sir2 восстанавливать дефекты сайленсинга теломер у мутанта h4T11A. Мы трансформировали мутант WT и h4T11A конструкцией, которая сверхэкспрессирует Sir2 под конститутивным сильным промотором TEF1 ( pTEFpro-SIR2 ).Транскрипция генов близости теломер была значительно увеличена у мутанта h4T11A; однако сверхэкспрессия Sir2 аннулирует повышенную транскрипцию этих генов у мутанта h4T11A (Fig. 3e), указывая тем самым, что дефекты молчания теломер у мутанта h4T11A могут быть устранены сверхэкспрессией Sir2. Вместе эти результаты показывают, что катализируемый SESAME h4pT11 необходим для поддержания гомеостаза Sir2 и сайленсинга теломер.

Потеря h4pT11 ведет к деградации Sir2 за счет аутофагии

В эукариотических клетках существуют две основные системы деградации белка, регулирующие стабильность белка: протеасома 26S и пути лизосомы ⁴⁴ .Чтобы идентифицировать механизм (ы), ответственный за деградацию Sir2 в мутанте h4T11A, мы обработали клетки WT и h4T11A протеасомным ингибитором MG132 и обнаружили, что на восстановленный Sir2 в мутанте h4T11A не повлияла обработка MG132 (рис. 4a), что позволяет предположить, что Sir2 белок в мутанте h4T11A деградировал независимо от протеасомного пути.

a Вестерн-блоты, показывающие обработку PMSF, но не MG132, спасали восстановленные белки Sir2 в мутанте h4T11A.Эндогенно экспрессируемые Sir2-FLAG и Sir3 в мутантах WT, h4T11A и h4T11D исследовали с помощью антител против FLAG и против Sir3 соответственно. b Сниженные рапамицином уровни белка Sir2 были частично восстановлены обработкой PMSF, как определено вестерн-блоттингом. Рапа рапамицин. c , d Репрезентативные вестерн-блоты, показывающие сниженные рапамицином уровни белка Sir2, были частично восстановлены хлорохином (CQ) и 3-MA. e , f Вестерн-блоты, показывающие, что глобальные уровни белка Sir2 были значительно выше у мутантов atg2Δ ( e ) и atg12Δ ( f ), чем у WT при обработке рапамицином.Мутанты WT, atg2Δ и atg12Δ обрабатывали 1 мкг / мл рапамицина в течение 0–1,5 ч. г , ч Глобальные уровни белка Sir2 были значительно выше у мутантов atg2Δ и atg12Δ , чем у WT при выдержке в течение 0–6 дней в среде YPD, как определено с помощью вестерн-блоттинга. Для фиг. 4a, b, e, f количественные данные представляют собой средние значения ± SE; n = 3 независимых биологических эксперимента. Статистическую значимость проверяли с помощью двустороннего критерия Стьюдента t .* p <0,05; ** p <0,01; *** р <0,001. На рис. 4c, d, g, h показаны типичные примеры трех независимых биологических экспериментов.

Аутофагия — это лизосомозависимый процесс, который разрушает клеточные компоненты, белки и поврежденные органеллы для поддержания клеточного гомеостаза ⁴⁵ . Аутофагия включает поэтапный процесс, включающий образование аутофагосомы, слияние аутофагосомы с лизосомой и деградацию грузов, который требует набора белков, связанных с аутофагией (ATG), которые координированно функционируют на разных стадиях ^46,47 .Чтобы проверить, регулирует ли аутофагия деградацию Sir2, мы обрабатывали клетки фенилметансульфонилфторидом (PMSF), ингибитором лизосомных протеаз ⁴⁸ . Восстановленные белки Sir2 в мутанте h4T11A были восстановлены обработкой PMSF (рис. 4a). Когда клетки обрабатывали рапамицином (Rapa), ингибитором киназы mTOR для индукции аутофагии, уровни белка Sir2 были значительно снижены (фиг. 4b, дорожка 2 по сравнению с полосой 1). В качестве контроля Sir3 и Sir4 не разлагались под действием рапамицина (дополнительный рис.5а – в). Вызванное рапамицином расщепление Sir2 улучшалось добавлением PMSF, но не MG132 (фиг. 4b, дорожка 4 против дорожки 5). Мы также обрабатывали клетки рапамицином вместе с ингибиторами аутофагии, хлорохином (CQ) и 3-метиладенином (3-MA) ​​и обнаружили, что как CQ, так и 3-MA могут предотвращать индуцированную рапамицином деградацию Sir2 (рис. 4c, d). Эти данные дополнительно подтверждают, что Sir2 разлагается аутофагией.

Чтобы определить, регулируют ли белки аутофагии деградацию Sir2, мы исследовали глобальные уровни белка Sir2 в мутантах с делецией гена аутофагии в присутствии или в отсутствие лечения рапамицином (дополнительный рис.5г). В частности, делеция ATG2 и ATG12 значительно ингибировала индуцированную рапамицином деградацию Sir2 (рис. 4e, f), тогда как у мутантов atg5Δ , atg7Δ и atg9Δ (дополнительный рис. 5d), подтверждая, что разные пути аутофагии могут быть ответственны за деградацию Sir2.

Приведенные выше данные предполагают, что Sir2 деградирует в результате краткосрочного (0–1,5 ч) процесса аутофагии. Поскольку гетерохроматин постепенно теряется во время старения ⁶ и катализируемый SESAME h4pT11 обогащается генами, регулирующими пути долголетия (дополнительный рис.1a), мы, таким образом, исследовали влияние длительной аутофагии, вызванной старением, на статус Sir2 (Supplementary Fig. 5e). Когда клетки выдерживались в течение 0, 2, 4 и 6 дней, уровни белка Sir2 значительно снижались во время хронологического старения (рис. 4g). Примечательно, что общие уровни Sir2 у мутантов atg2Δ и atg12Δ были выше, чем у WT во время процесса старения (рис. 4g, h), указывая на то, что Sir2 деградирует в результате аутофагии во время хронологического старения.

Катализируемый кунжутом h4pT11 предотвращает ядерный экспорт Sir2 и ингибирует опосредованную аутофагией деградацию Sir2

Sir2 известен как сайленсирующий белок в ядре ⁴⁹ , тогда как аутофагия является цитоплазматическим процессом.Для разложения в вакуоли Sir2 необходимо транспортировать из ядра в цитоплазму. Таким образом, мы исследовали локализацию Sir2 в WT и мутанте h4T11A, экспрессирующем слитый белок Sir2-GFP. Мониторинг GFP с помощью флуоресцентной микроскопии показал, что Sir2 локализован преимущественно в ядре клеток WT, и только 25,08% клеток имеют локализованный в цитоплазме Sir2 (рис. 5a, b). Однако у мутанта h4T11A наблюдалось значительное увеличение (68,09%) клеток, которые имели локализованный в цитоплазме Sir2 (рис.5а, б), предполагая, что мутация h4T11A ускоряет ядерный экспорт Sir2.

a Репрезентативные флуоресцентные изображения, показывающие распределение Sir2-2xGFP (зеленый) в клетках WT и h4T11A, экспрессирующих Sir2-2xGFP из природного локуса SIR2 . ДНК ядра окрашивали 4 ’, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI), как показано синим цветом. У мутанта h4T11A было больше Sir2, диффузного по клетке, чем у WT.Стрелки указывают на локализованный в ядре Sir2 у WT и локализованный в цитоплазме мутант Sir2 h4T11A, соответственно. Пруток, 10 мкм. b Количественная оценка локализации Sir2-2xGFP в клетках, показанных на фиг. 5a, c, соответственно. Гистограммы представляют процент клеток, демонстрирующих Sir2-2xGFP, локализованный в ядре (только Nucleus) или экспортированных в цитоплазму (Nucleus + Cyto). Данные показывают среднее значение ± стандартная ошибка, по крайней мере, из трех независимых биологических экспериментов, с подсчетом ~ 350 клеток для каждого штамма на эксперимент. c Нокдаун экспрессии CRM1 сохранил большую часть Sir2 в ядре. Клетки WT TetO ₇ и TetO ₇ -CRM1 , выращенные в среде YPD, обрабатывали 6,25 мкг / мл доксициклина в течение 1,5 ч с последующей флуоресцентной микроскопией. Пруток, 10 мкм. d Нокдаун экспрессии CRM1 частично спасал уменьшенный рапамицином Sir2. WT TetO ₇ и TetO ₇ -CRM1 Клетки , выращенные в среде YPD, обрабатывали 6.25 мкг / мл доксициклина и рапамицина в течение 0–1,5 ч. e Глобальные уровни белка Sir2 у мутанта h4T11A были значительно ниже, чем у WT, при лечении рапамицином. f, , г ч. Вестерн-блоттинг анализ Sir2 и h4pT11 у WT и мутанта h4T11A при старении в течение 0–6 дней в среде YPD. i Вестерн-блоттинг, показывающий делецию ATG2 , спасал восстановленный Sir2 у мутантов h4T11A и pyk1-ts .Для мутантов WT, atg2Δ , pyk1-ts и pyk1-ts atg2Δ эти четыре штамма обрабатывали при 37 ° C в течение 2 часов. Для фиг. 5b, d, e, h, i количественные данные представляют собой средние значения ± SE; n = 3 независимых биологических эксперимента. Статистическую значимость проверяли с помощью двустороннего критерия Стьюдента t . * p <0,05; ** p <0,01; *** р <0,001. На рис. 5f, g показан типичный пример трех независимых биологических экспериментов.

Анализ последовательности Sir2 выявил консенсусную последовательность экспорта в ядро ​​(NES), обогащенную лейцином (L), LPEDLNSLYI, для поддержания 1 хромосомной области экспортина (Crm1). Таким образом, мы исследовали локализацию Sir2 и уровни белка в мутанте TetO ₇ -CRM1 , где промотор CRM1 был заменен на TetO ₇ и CRM1. Транскрипция была отключена обработкой доксициклином (Dox). (Дополнительный рис. 6a) ^34,50 .Нокдаун CRM1 ведет к накоплению Sir2 в ядре и препятствует индуцированной рапамицином деградации Sir2 (Fig. 5b-d и Supplementary Fig. 6a), указывая тем самым, что ядерный экспорт Sir2 является предпосылкой для его деградации с помощью аутофагии. Напротив, консенсусная последовательность NES не была обнаружена в Sir3 и Sir4, что могло бы объяснить, почему Sir2, но не Sir3 и Sir4, деградировал в результате аутофагии.

Мы обработали рапамицином WT и мутант h4T11A и обнаружили, что обработка рапамицином приводит к меньшему количеству белка Sir2, остающемуся в h4T11A по сравнению с клетками WT (рис.5д). Чтобы показать, что деградация Sir2 в мутанте h4T11A опосредована аутофагией, WT и мутант h4T11A обрабатывали рапамицином вместе с PMSF или CQ. Вызванная рапамицином деградация Sir2 в мутанте h4T11A может быть восстановлена ​​обработкой PMSF (фиг. 5f) и CQ (фиг. 5g). Мы также определили влияние h4pT11 на уровни белка Sir2 во время хронологического старения. Уровни h4pT11 были значительно снижены во время хронологического старения (рис. 5h). Глобальные уровни Sir2 не только снижаются при старении, но и значительно ниже у мутанта h4T11A по сравнению с диким животным (рис.5ч). Эти данные предполагают, что во время хронологического старения фосфорилирование h4T11 снижается, что ускоряет деградацию Sir2 за счет аутофагии.

Мы также удалили PEP4 , который кодирует основную вакуолярную протеазу, в мутанте h4T11A. Потеря Pep4 восстанавливала уровни Sir2 у мутанта h4T11A (дополнительный рис. 6b). Сходным образом восстановленный Sir2 в мутанте pyk1-ts был восстановлен в мутанте pyk1-ts pep4Δ (дополнительный рис. 6c). Более того, восстановленный белок Sir2 в мутанте h4T11A был увеличен до нормального уровня у мутантов h4T11A atg2Δ и h4T11A atg12Δ (рис.5i и дополнительный рис. 6d). Сниженный уровень Sir2 также был восстановлен у мутантов pyk1-ts atg2Δ и pyk1-ts atg12Δ (рис. 5i и дополнительный рис. 6e). В целом, эти данные указывают на то, что катализируемый SESAME h4pT11 предотвращает ядерный экспорт Sir2 и ингибирует опосредованную аутофагией деградацию Sir2.

Катализируемый кунжутом h4pT11 репрессирует транскрипцию генов аутофагии и предотвращает аутофагический поток

Чтобы изучить влияние h4pT11 на аутофагию, мы использовали анализ высвобождения GFP (зеленый флуоресцентный белок), который обнаруживает свободный GFP, который высвобождается при доставке. управляемого эндогенным промотором Atg8 с N-концевой меткой GFP (GFP-Atg8) в вакуоль и последующим протеолизом части Atg8 слитого белка ⁵¹ .Анализ высвобождения GFP продемонстрировал значительно увеличенный аутофагический поток с активным вакуолярным протеолизом в мутанте h4T11A по сравнению с его аналогом WT, о чем свидетельствует повышенное соотношение свободного GFP / GFP-Atg8 в клетках h4T11A (рис. 6a). Более того, количество свободного GFP и GFP-Atg8 (общий Atg8) было значительно выше у мутанта h4T11A, чем у WT, что позволяет предположить, что h4pT11 может репрессировать экспрессию Atg8 (фиг. 6a). Соответственно, во время хронологического старения у мутанта h4T11A было намного больше свободных белков GFP, чем у WT (дополнительный рис.7а). Мы также заметили, что поток аутофагии был значительно индуцирован у мутанта pyk1-ts (рис. 6b). Чтобы укрепить эти результаты, мы использовали дополнительный анализ, оценивая зависимую от аутофагии транслокацию GFP-Atg8 в вакуоль с помощью флуоресцентной микроскопии. Процент аутофагических клеток, которые демонстрировали четко вакуолярную локализацию GFP, был значительно увеличен у мутантов h4T11A и pyk1-ts (рис. 6c, d). Эти данные показывают, что катализируемый SESAME h4pT11 репрессирует путь аутофагии.